瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座

試驗(yàn)三瓊脂免疫電泳試驗(yàn)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第1頁(yè)試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)了解免疫電泳原理和用途。掌握免疫電泳操作過(guò)程和方法。掌握免疫電泳試驗(yàn)結(jié)果分析方法，并對(duì)粗提蛋白進(jìn)行檢測(cè)。瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第2頁(yè)

免疫電泳為區(qū)帶電泳與雙向免疫擴(kuò)散結(jié)合。先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不一樣電荷和分子量蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行方向上開槽，加入抗血清。

37℃下使二者擴(kuò)散，各區(qū)帶蛋白在對(duì)應(yīng)位置與抗體反應(yīng)形成弧形沉淀線。免疫電泳原理圖解見圖。試驗(yàn)原理瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第3頁(yè)免疫電泳原理圖解瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第4頁(yè)試驗(yàn)材料：牛血清粗提蛋白瓊脂糖巴比妥緩沖液（PH8.6，離子強(qiáng)度0.05）兔抗牛血清瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第5頁(yè)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第6頁(yè)（1）配制1.2％瓊脂，加熱使之融化。（巴比妥緩沖液配制）（2）吸收3－－4

mL瓊脂溶液，均勻涂布到載玻片上，注意要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并馬上于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成2mm瓊脂板。（3）取打孔器在圖示位置打孔（圖），此二孔位置要對(duì)稱。于酒精燈上小心烘烤，使瓊脂與玻璃板貼緊。操作步驟2mm2mm圖2膠板打孔及挖槽示意圖瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第7頁(yè)（4）用微量加樣器加入10－－20uL粗提蛋白和牛血清，不要溢出（可加入指示劑）。（5）把載玻片放到電泳槽中，倒入巴比妥緩沖液，

瓊脂板兩端用濾紙與緩沖液搭橋，接通電源，電壓

10-12v/cm電泳1-2h。（6）樣品中有藍(lán)色染料，當(dāng)藍(lán)色靠近另一端時(shí)，終止電泳，小心取出載玻片。（7）用刀片在膠體中央，劃兩道平行線。刀刻要

深及底部，兩道平行線間隔不可大于3mm。用大頭針挑去瓊脂。（8）加入人全血清，放入濕盒中，37℃下擴(kuò)散

24h。瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第8頁(yè)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第9頁(yè)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第10頁(yè)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第11頁(yè)瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第12頁(yè)注意事項(xiàng)（1）澆載玻片時(shí)，玻片應(yīng)保持水平，瓊脂面要盡可能鋪平。（2）加樣應(yīng)一次加滿，并預(yù)防樣品溢出孔外。（3）電泳過(guò)程中注意預(yù)防發(fā)燒，以免影響電泳結(jié)果。（4）電泳時(shí)要使濾紙與凝膠親密接觸，不可有縫隙。瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第13頁(yè)思索題（1）畫出沉淀線形態(tài)、數(shù)量和位置，并給予簡(jiǎn)明說(shuō)明。（2）與相關(guān)免疫學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行比較，探討免疫電泳主要優(yōu)點(diǎn)。瓊脂免疫電泳實(shí)驗(yàn)專家講座第14頁(yè)P(yáng)H8.6巴比妥緩沖液配制：

巴比妥酸0.92g-----100ml，加熱熔解巴比妥鈉5.15g-------350ml，