痰涂片標準化操作

痰涂片標準化操作普仁醫(yī)療集團無錫市第五人民醫(yī)院檢查科劉君第1頁主要內(nèi)容標本搜集與運輸抗酸菌涂片Ziehl-Neelsen染色顯微鏡讀片檢查成果登記與玻片保存抗酸菌涂片檢查假陽性及假陰性也許原因

第2頁標本搜集與運輸?shù)?頁提綱標本容器標本編號搜集辦法與運輸注意事項標本質(zhì)量評價第4頁容積20-50ml廣口半透明或透明材質(zhì)一次性使用螺旋蓋且能密封防水防滲出側(cè)面容易標識（外壁有部分粗糙面）痰容器規(guī)格第5頁哪種痰盒合適?第6頁哪種痰盒合適?第7頁哪一種容器可作為痰盒？第8頁標本搜集搜集3份標本，是發(fā)覺傳染性結(jié)核病人最優(yōu)選擇

搜集標本時要同步為患者和試驗員提供方便。第9頁搜集三份痰優(yōu)缺陷超出三份痰后，檢出也許性不能大幅度提升晨痰檢出率比即時痰高搜集三份晨痰對住院患者比較適合前后兩次檢查在工作量較大時能發(fā)揮較大效率假如NTP指南中對搜集痰標本另有要求，能夠進行調(diào)整第10頁標本搜集即時痰-夜痰-晨痰

即時痰 就診時夜痰

夜間留取痰晨痰 次日清晨留取痰

*假如規(guī)劃指南有所調(diào)整，請根據(jù)指南調(diào)整第11頁用于療效監(jiān)測隨訪標本隨訪標本(在治療期間和結(jié)束時候搜集)晨痰另外一份標本根據(jù)NTP指南進行搜集第12頁標本搜集安全意識:患者比標本有危險!假如有試驗員指導監(jiān)督病人留痰，那么他面臨危險要遠高于其他試驗員第13頁痰標本搜集生物安全

就診者不要在試驗室內(nèi)留痰。在室外留痰，最佳在陽光直射地方。假如不能室外留痰，那么應在通風良好室內(nèi)且遠離他人。就診者留痰時，監(jiān)督病人留痰人員應站在留痰者身后或身邊，而不是站在留痰者正面。第14頁搜集標本操作指南

就診者注意事項：如何減少對他人傳染危險第15頁在空氣流動地點搜集標本流動空氣能稀釋氣溶膠

UV光線能將結(jié)核菌滅活霧化消毒第16頁標本搜集向患者解釋清楚下列幾點:為何需要痰標本；需要幾份痰，檢查三次痰必要性晨痰主要性，第二次送痰必要性第17頁向患者宣傳教育:如何留痰唾液或鼻腔分泌物不是合格痰標本合格痰標本來自肺深部什么是合格痰標本，如何咳痰，如何使用痰盒；運輸痰盒注意事項第18頁有關標本信息

留痰或開化驗單日期病人姓名，性別，年紀，住址痰盒上必須有病人有關信息，不能標在痰盒蓋子上診斷機構(gòu)名稱（假如標本是外單位送檢話）第19頁第20頁專業(yè)機構(gòu)痰標本運輸耐藥監(jiān)測鄉(xiāng)鎮(zhèn)集痰點結(jié)防因此外機構(gòu)送檢標本第21頁標本接收查對化驗單檢查標本質(zhì)量體積(3-5ml)描述標本性狀(干酪,血痰，粘液，唾液）登記標本性狀和進行試驗室編號第22頁

只有取得高質(zhì)量痰標本才能得到精確可信抗酸菌鏡檢成果第23頁檢查單參照樣式第24頁檢查單內(nèi)容病人一般信息：姓名、年紀、性別初診病人還是隨訪病人痰標本送檢日期鏡檢報告成果檢測者及審核者報告日期

第25頁抗酸菌涂片

第26頁重點涂片過程涂抹一張符合要求涂片進行示范列出符合要求涂片關鍵點評價已經(jīng)染色涂片第27頁內(nèi)容涂片制備涂片關鍵評價涂片第28頁涂片制備

每一張玻片都要編號

涂抹痰標本

自然干燥

加熱固定第29頁使用鉛筆在磨砂面上編號第30頁使用竹木簽進行涂抹第31頁第32頁不得使用火焰加熱辦法加速痰膜干燥×第33頁

太厚合適太薄痰膜厚薄第34頁合適痰膜厚度第35頁好

脫落好

不均勻第36頁

合適太厚太薄涂片厚度第37頁涂片質(zhì)量評價不均勻太厚形狀不規(guī)則，太薄第38頁形狀不規(guī)范，太薄涂片質(zhì)量評價第39頁好涂片:

挑取了痰標本膿性部分做螺旋狀軌跡涂抹均勻大小約為2cmX1cm

不要太厚：透過染色前痰膜能夠隱約看到報紙上字第40頁哪個涂片比較好？第41頁Ziehl-Neelsen染色第42頁染色步驟初染(堿性復紅)脫色(鹽酸酒精)復染

(亞甲蘭)

第43頁抗酸染色原理初染時堿性復紅與細胞壁分枝菌酸結(jié)合脫色時脫色液不能將堿性復紅從抗酸菌細胞壁上洗脫抗酸菌染色保持初染顏色復染提供背景對比第44頁抗酸菌非抗酸菌Z－N染色原理

細胞壁脂質(zhì)復合物第45頁抗酸菌非抗酸菌堿性復紅脫色Z－N染色原理復染第46頁染色過程將涂片排放在染色架上滴加堿性復紅染色液，加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持5分鐘流水輕緩沖洗滴加脫色液，保持1分鐘流水輕緩沖洗滴加亞甲蘭復染液，保持1分鐘流水輕緩沖洗第47頁將涂片排放在染色架上，注意間隔第48頁火焰固定？？？第49頁滴加堿性復紅第50頁加熱第51頁滴加染液和加熱第52頁第53頁滴加染液和加熱第54頁流水沖洗第55頁不可大水流迅速沖洗第56頁脫色第57頁流水輕緩沖洗后，復染第58頁流水洗去復染液第59頁在玻片架上自然干燥第60頁顯微鏡讀片檢查第61頁顯微鏡簡圖第62頁操作步驟第63頁顯微鏡檢查操作第64頁第65頁第66頁涂片檢查視野次序第67頁2cm,3cm=150fields3cm2cm2cm=100fields2cm1cm1cm涂片鏡檢報告標準2verticallines,1cmeach=100fields第68頁第69頁第70頁單一抗酸菌第71頁“V”-字形第72頁成簇抗酸菌第73頁復染太濃造成影響第74頁合適復染第75頁76顯微鏡讀片練習第76頁第77頁報告成果分級

陰性

未發(fā)覺抗酸菌/300視野

報告實際菌落數(shù) 1-8條/300視野 (1+) 3-9條/100視野(2+) 1-9條/l0視野 (3+) 1-9條/每視野 (4+) 達成或超出10條/每視野第78頁涂片分級:4+

(每個視野達成或多于10條)

第79頁涂片分級:2+(1-9條/10視野最少50個視野)第80頁涂片分級:1+

3-9條/100視野第81頁涂片分級:實際菌數(shù)

(1－8AFBin300fields)第82頁將下列成果分級:第83頁第84頁

1＋第85頁第86頁

2+第87頁第88頁3+第89頁第90頁

6條(實際菌數(shù))第91頁第92頁

4+第93頁第94頁

1＋第95頁第96頁3+第97頁第98頁

2+第99頁第100頁

4+第101頁登記與玻片保存第102頁內(nèi)容提綱：

試驗室化驗單填寫試驗室登記本填寫我國NTP推薦抗酸桿菌萋-尼氏法鏡檢成果報告標準報告假陰性、假陽性成果造成后果

第103頁化驗單參照樣式第104頁試驗室登記本第105頁填寫說明：1.試驗序號：為試驗室流水號，每年從“1”開始，初診患者3個標本，隨訪患者2個痰標本，每次均用同一試驗序號編號。2.痰標本起源：根據(jù)患者做痰檢查時情況，選擇1欄填寫。初診患者填寫門診序號，隨訪患者填寫患者登記號。3.性狀：標本性狀按照國家試驗室質(zhì)量控制新標準，分為干酪痰（A）、血痰(B)、粘液痰(C)和唾液(D)，分別按A、B、C、D分類登記。第106頁填寫說明：4.成果：涂片陽性者使用紅筆統(tǒng)計為“數(shù)字+”，如“1+、2+、3+”，300個視野內(nèi)僅見1～8條抗酸桿菌者填寫“條數(shù)”；陰性成果填為“陰性”，不能統(tǒng)計為“-”或“（-）”。5.報告人：檢查人員填寫全名。6.備注：填寫需要尤其說明事宜。第107頁精確登記、報告應當具有完整性、連續(xù)性、可靠性、及時行，是結(jié)核病控制規(guī)劃中十分主要一項內(nèi)容。

第108頁用紅色筆標注陽性成果陰性成果應填記“陰性”不得以“-”體現(xiàn)。第109頁成果填寫必須精確，如填寫抗酸菌詳細條數(shù)時應如實填寫而不應當簡寫為陰性或者陽性。隨訪成果也應當精確填寫.第110頁登記本統(tǒng)計有何問題？第111頁玻片保存假如使用顯微鏡附帶鏡油，或者是購買粘度合適鏡油（immersionoil）,而不是香柏油（cedaroil）,則不需使用二甲苯，直接使用鏡頭紙擦拭即可。第112頁玻片保存干燥后玻片，按試驗室序號及涂片編號放置在玻片盒中，寄存在陰涼干燥環(huán)境中。處于潮濕酷熱環(huán)境中抗酸菌易于褪色（見下列圖）第113頁第114頁鄉(xiāng)鎮(zhèn)查痰點涂片送區(qū)縣結(jié)防所區(qū)縣結(jié)防所涂片保存3個月第115頁抗酸菌涂片檢查

假陽性及假陰性也許原因

第116頁假陽性原因染料沉渣或結(jié)晶等脫色不徹底抗酸性物質(zhì)或細菌染色液中污染抗酸菌試驗室污染第117頁第118頁脫色不徹底第119頁假陽性造成成果就診者被誤診誤治隨訪病人延長了治療時間揮霍了醫(yī)療資源第120頁AFB痰檢假陽性成果預防措施使用新載玻片進行對應檢查。每個標本均使用新竹簽完成涂抹。所有染液均通過濾。染色時玻片彼此保持一定距離。嚴禁使用染色缸染色。染色時勿使玻片上染液干燥第121頁

滴鏡油時，鏡油容器或吸管不接觸痰膜。不要用竹木簽蘸鏡油避免物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜。完整、精確標注痰盒、玻片和登記試驗登記本。登記前、后對檢查單和標本盒上標注進行認真查對。精確統(tǒng)計和報告成果AFB痰檢假陽性成果預防措施第122頁假陰性原因1）觀測涂片視野數(shù)量不足2）鏡檢技術(shù)能力差3）染色操作不規(guī)范（抗酸桿菌顏色暗淡、背景太淡或過深）4）顯微鏡存在問題5）染液質(zhì)量差

第123頁假陰性造成成果結(jié)核病人沒有得到正確診斷和治療，向其他人傳