實(shí)驗(yàn)七：血清鐵及總鐵結(jié)合 - 副本

血清鐵及總鐵結(jié)合力測(cè)定【目的與要求】掌握血清鐵及總鐵結(jié)合力測(cè)定的原理和方法及注意事項(xiàng)；了解血清鐵及總鐵結(jié)合力各種測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)?！驹怼垦彖F:血清中的鐵與運(yùn)鐵蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，并與雙吡啶結(jié)合成粉紅色的絡(luò)合物，在一定范圍內(nèi)，鐵離子的多少與色澤成正比。絡(luò)合物在520nm處有吸收峰，與同樣處理的鐵標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得血清鐵含量。【原理】總鐵結(jié)合力(TIBC):是指血清中的運(yùn)鐵蛋白全部被鐵飽和所能結(jié)合的鐵量。總鐵結(jié)合力測(cè)定方法:將過量鐵標(biāo)準(zhǔn)液加到血清中，使之與未帶鐵的運(yùn)鐵蛋白結(jié)合，多余的鐵被輕質(zhì)碳酸鎂粉吸附除去，然后測(cè)定血清中總鐵含量，即為總鐵結(jié)合力。１.血清鐵測(cè)定的試劑組成與配制

1、100mg/L（1791μmol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液：1ml溶液一瓶，4℃保存。2mg/L（35.8μmol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.2ml加蒸餾水定溶至10ml，4℃保存。2、鐵顯色劑：2號(hào)甲粉劑一支，2號(hào)乙粉劑一支，2號(hào)丙液100ml×1瓶。用時(shí)將甲、乙二粉劑倒入丙液中，充分混勻，溶解，即為鐵顯色劑，4℃～8℃避光保存。2.血清鐵測(cè)定操作步驟加入物名稱(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管蒸餾水（ml） 0.535.8μmol/L鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml） 0.5血清（ml） 0.5鐵顯色劑（ml） 1.51.51.5混勻后，沸水浴5分鐘（空白及標(biāo)準(zhǔn)管可以不煮），冷卻后離心，3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液1.0ml，0.5cm光徑，波長(zhǎng)520nm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度OD值。3.總鐵結(jié)合率測(cè)定的試劑組成與配制

1、100mg/L（1791μmol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液6ml，4℃保存。10mg/L(179.1μmol/L)的鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取貯備液10倍稀釋，即取5ml鐵貯備液加蒸餾水稀釋至50ml。1mg/L(17.91μmol/L)的鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取10mg/L鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液10倍稀釋，即取1ml10mg/L(179.1μmol/L)鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液加蒸餾水稀釋至10ml。2、鐵吸附劑50mg/支，4℃保存。3、鐵顯色劑：3號(hào)甲粉劑一支，3號(hào)乙粉劑一支，3號(hào)丙液100ml×1