非禽源外源病毒檢測(cè)課件-藥典宣貫用(2012年1030)

非禽源外源病毒檢測(cè)病毒制品檢測(cè)室豬病組

吳華偉E-mail:聯(lián)系電話：主要內(nèi)容1、外源病毒污染的主要來(lái)源2、外源病毒檢驗(yàn)的主要材料3、2010年版《中國(guó)獸藥典》非禽源外源病毒檢驗(yàn)的新變化及關(guān)鍵點(diǎn)解析4、非禽源外源病毒檢測(cè)實(shí)例展示紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢測(cè)致細(xì)胞病變檢查法熒光抗體檢查法5、病毒室可提供的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及檢測(cè)試劑盒6、關(guān)于相關(guān)問(wèn)題的回應(yīng)外源病毒污染的主要來(lái)1源1.1

種毒(包括原始種毒、基礎(chǔ)種毒、生產(chǎn)種毒）

種毒在疫苗生產(chǎn)的作用至關(guān)重要，在某種程度上它是疫苗內(nèi)在質(zhì)量和屬性特點(diǎn)的決定因素。如果種毒污染了外源病毒，通過(guò)逐級(jí)培養(yǎng)放大作用，必然會(huì)影響到疫苗的質(zhì)量。

因此，生物制品生產(chǎn)中使用的種毒必須來(lái)源清楚，歷史背景明確，并建立嚴(yán)格的種毒種子批制度，強(qiáng)調(diào)對(duì)種毒的外源病毒檢測(cè)工作。如某企業(yè)產(chǎn)品檢驗(yàn)時(shí)提供的檢驗(yàn)強(qiáng)毒污染了高致病性PRRSV。1.2

生產(chǎn)原輔材料指培養(yǎng)繁殖疫苗病毒所需的原輔材料，主要包括：細(xì)胞（原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞，如PK15細(xì)胞污染PCV1）雞胚（如污染ALV、REV、CIAV等）動(dòng)物組織（如生產(chǎn)豬瘟組織毒疫苗的兔脾淋、肌肉或?qū)嵸|(zhì)臟器等污染了兔瘟病毒）牛血清

（如BVDV污染）其他：如胰酶、血漿等檢驗(yàn)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果普通胚源SPF胚源陽(yáng)性/批數(shù)陽(yáng)性率

(%)陽(yáng)性/批數(shù)陽(yáng)性率(%)陽(yáng)性/批數(shù)陽(yáng)性率(%)ALV24/11121.621/7328.83/387.9REV8/2033.9//8/2033.9CIAV9/1108.28/7710.41/33(進(jìn)口苗）3合計(jì)41/4249.729/15019.312/2744.41.3

生產(chǎn)環(huán)境及操作過(guò)程造成污染良好的生產(chǎn)環(huán)境和規(guī)范的操作程序是生產(chǎn)合

格產(chǎn)品的必要條件。生產(chǎn)企業(yè)實(shí)施GMP管理就是創(chuàng)造良

好生產(chǎn)條件的重要手段，也是生產(chǎn)生物制品的必要條件。（如清場(chǎng)不徹底，空調(diào)系統(tǒng)故障，共用區(qū)域管理不規(guī)范等）1.4

人為添加違規(guī)成分如在疫苗中違規(guī)添加未經(jīng)批準(zhǔn)的流行毒株或不同血清型的毒株等。外源病毒污染主要檢查的材2料2.1 種毒： 包括基礎(chǔ)種毒、生產(chǎn)種毒、工作種毒2.2 細(xì)胞

：

包括原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞2.3 制品（1）活疫苗

：

指病毒性活疫苗（2）其它生物制品

：如用于治療目的的抗血清、用作生產(chǎn)原材料的血清等.3

2010年版《中國(guó)獸藥典》非禽源外源病毒檢驗(yàn)的新變化及關(guān)鍵點(diǎn)解析與2005年版《中國(guó)獸藥典》相比，2010年版中“非禽源外源病毒檢驗(yàn)”的新變化可歸納為“三個(gè)明確，三個(gè)調(diào)整”。三個(gè)明確：1、明確了外源病毒檢驗(yàn)時(shí)細(xì)胞種類(lèi)的選擇原則2、明確了外源病毒檢驗(yàn)時(shí)接種樣品的劑量3、明確了樣品接種后細(xì)胞的最少培養(yǎng)時(shí)間和最少繼代次數(shù)三個(gè)調(diào)整：1、調(diào)整了非禽源外源病毒檢驗(yàn)三種方法的層次關(guān)系2、調(diào)整了熒光抗體檢測(cè)法每種細(xì)胞及制品應(yīng)選擇的熒光抗體種類(lèi)3、調(diào)整了紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)中使用紅細(xì)胞的類(lèi)別“三個(gè)明確”1、明確了細(xì)胞的選擇原則舊版：綠猴腎（Vero）傳代細(xì)胞和相應(yīng)的敏感細(xì)胞。2010版：（1）綠猴腎（Vero）傳代細(xì)胞；（2）疫苗靶動(dòng)物的胚胎細(xì)胞，或新生動(dòng)物細(xì)胞，或細(xì)胞系。表1不同非禽源細(xì)胞及其制品外源病毒檢驗(yàn)法選用的細(xì)胞（見(jiàn)下頁(yè)）2、明確了接種樣品的劑量舊版：未明確規(guī)定接種量。2010版：至少1.0ml（疫苗制品至少含10頭份）。當(dāng)待檢驗(yàn)的疫苗病毒不感染選用的細(xì)胞或不使選用細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞病變且不引起紅細(xì)胞吸附時(shí)，不需用血清中和，檢驗(yàn)時(shí)接種劑量達(dá)10頭份及以上。?中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所表1不同非禽源細(xì)胞及其制品外源病毒檢驗(yàn)法選用的細(xì)胞制苗用細(xì)胞來(lái)源或疫苗靶動(dòng)物熒光抗體檢查法致細(xì)胞病變檢查法

和紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)待檢外源選用細(xì)胞豬BVDV牛睪丸細(xì)胞或BT或MDBK（1*）Vero、PK15或STPPVPK15或STCSFVPK15或ST牛BVDV牛睪丸細(xì)胞或BT或MDBKVero、牛睪丸細(xì)胞或

BT或MDBKBTV（*2）羊BVDV牛睪丸細(xì)胞或BT或MDBKVero、綿羊睪丸細(xì)胞或山羊腎細(xì)胞BTV（*2）犬BVDV牛睪丸細(xì)胞或BT或MDBKVero、MDCK、CRFK或F81RVVero或BHK21CPVCRFK或F81馬于豬瘟活疫苗熒光

V，可引起Vero或綿BVDV牛睪丸細(xì)胞或BT或MDBKVero、馬源敏感細(xì)胞

2）牛、綿羊和山羊TV。（*3）馬傳染性抗體馬檢傳測(cè)染法性中貧對(duì)血BVD病V的毒檢驗(yàn)羊睪丸細(xì)胞的CPE，通過(guò)致應(yīng)馬選源擇敏B敏T或感M細(xì)DB胞K細(xì)（胞*3。）（*細(xì)胞病變檢查法檢出外源B注：（*1）對(duì)制品如污染BT貧血病毒暫無(wú)相關(guān)活疫苗。中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所3、明確了最少培養(yǎng)時(shí)間和最少繼代次數(shù)舊版：連傳2代，每代7日。2010版：樣品接種細(xì)胞后總培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)不少于14日，培養(yǎng)期間應(yīng)至少繼代1次，在滿足總原則的基礎(chǔ)上，規(guī)定了采用不同方法最終檢驗(yàn)時(shí)所用的細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)的最少時(shí)間，即熒光抗體檢查法使用的細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)5～7日，致細(xì)胞病

變和紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)使用的細(xì)胞應(yīng)至少培養(yǎng)7日。鑒于以上原則和要求，外源病毒檢驗(yàn)時(shí)采用傳代細(xì)胞應(yīng)該是首選，但具體的細(xì)胞傳代過(guò)程（培養(yǎng)時(shí)間、傳代次數(shù)）應(yīng)根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性而定?！叭齻€(gè)調(diào)整”1、調(diào)整了三種檢驗(yàn)方法的層次關(guān)系舊版：熒光抗體檢查法、綠猴腎（Vero)細(xì)胞傳代法（同時(shí)做熒光抗體檢查、致細(xì)胞病變和紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)）、致細(xì)胞病變和紅細(xì)胞吸附性的檢驗(yàn)。2010年版：在明確細(xì)胞種類(lèi)選擇的前提下，將2005年版中“致細(xì)胞病變檢查法和紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)”一項(xiàng)拆分為兩個(gè)并列的檢驗(yàn)項(xiàng)目，保留了熒光抗體檢查法，刪除了“綠猴腎（Vero）傳代細(xì)胞檢查法”，而在細(xì)胞選擇項(xiàng)中明確了Vero細(xì)胞為必選細(xì)胞，使得非禽源外源病毒檢驗(yàn)的層次關(guān)系更趨清晰，避免了檢驗(yàn)項(xiàng)目間的交叉，便于理解和執(zhí)行。2、調(diào)整了紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)使用紅細(xì)胞的種類(lèi)舊版：豚鼠紅細(xì)胞+人“O”型紅細(xì)胞+雞紅細(xì)胞2010年版：豚鼠紅細(xì)胞+雞紅細(xì)胞3、調(diào)整了應(yīng)選擇的熒光抗體種類(lèi)：中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所細(xì)胞來(lái)源舊版2010年版豬源細(xì)胞BVDV、PRV、PPV、HCVBVDV、PPV、HCV牛源細(xì)胞BVDV、BTVBVDV、BTV羊源細(xì)胞BVDV、BTVBVDV、BTV犬源細(xì)胞RVBVDV、RV、CPV馬源細(xì)胞馬傳染性貧血病毒BVDV、馬傳染性貧血病毒檢驗(yàn)時(shí)需重點(diǎn)說(shuō)明的幾個(gè)問(wèn)題●1、關(guān)于樣品處理問(wèn)題●取樣品2～3瓶。對(duì)毒種或活疫苗進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，將樣品混合，其中疫苗制品1ml稀釋液中應(yīng)至少含10頭份（另有規(guī)定除外），8000g離心

10min后取上清備用；對(duì)細(xì)胞（培養(yǎng)面積需大于75cm2）進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，經(jīng)3次凍融后混合作為檢品。毒種和活疫苗樣品的具體處理如下：

（1）不需進(jìn)行血清中和的條件：如毒種或疫苗病毒不感染所選用的細(xì)胞或?qū)λx用的細(xì)胞不產(chǎn)生細(xì)胞病變和不引起紅細(xì)胞吸附時(shí)，不進(jìn)行血清中和。

（2）血清中和不完全時(shí)：需要中和的樣品，選擇單特異性血清進(jìn)行中和，如對(duì)檢品中病毒中和不完全時(shí)，可用效價(jià)更高的血清重做。（3）特殊情況的處理：根據(jù)病毒特性，適當(dāng)對(duì)毒種或疫苗進(jìn)行稀釋?zhuān)臃N量最低不得低于1頭份（如對(duì)于寵物類(lèi)單劑量活疫苗）。不同疫苗處理方法見(jiàn)表2（下頁(yè)）。表2 常見(jiàn)疫苗樣品處理方法疫苗種類(lèi)熒光抗體檢測(cè)法致細(xì)胞病變檢查法和紅細(xì)胞吸附性外源病毒檢驗(yàn)豬瘟活疫苗不中和不中和豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗中和中和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗中和中和豬乙型腦炎活疫苗中和中和豬偽狂犬病活疫苗中和中和狂犬病活疫苗（FLury株）不中和中和犬瘟熱、腺病毒病、細(xì)小病毒病、副流感病毒2型呼吸道感染四聯(lián)活疫苗中和中和犬瘟熱、細(xì)小病毒病二聯(lián)活疫苗中和中和山羊痘活疫苗中和中和水貂犬瘟熱活疫苗中和中和狐貍腦炎活疫苗（CAV-2C株）中和中和小反芻獸疫活疫苗中和中和犬細(xì)小病毒活疫苗中和中和2、關(guān)于熒光抗體檢查法的陽(yáng)性對(duì)照病毒的選擇問(wèn)題可采用FA或IFA方法，參考毒種和檢測(cè)試劑請(qǐng)聯(lián)系菌種保藏室。中監(jiān)所目前提供可檢測(cè)BVDV、CSFV、PPV三種病毒的3種IFA檢測(cè)試劑盒（200頭份/盒，約可檢10批疫苗）。制苗細(xì)胞來(lái)源或疫苗靶動(dòng)物待檢外源病毒選用細(xì)胞陽(yáng)性對(duì)照參考毒株所有靶動(dòng)物BVDVMDBK、BT或牛睪丸細(xì)胞Oregon

C24V株、NADL株豬PPVPK15或STNADL-2株、7909株CSFVPK15或STThiverval株（法國(guó)）牛、綿羊和山羊BTVVero或綿羊睪丸細(xì)胞暫無(wú)犬RVVero或BHK21CVS-11株CPVCRFK或F81CPV-DD株馬源細(xì)胞EIAVVero或驢白細(xì)胞暫無(wú)3、關(guān)于禽源材料制備的非禽用制品的外源病毒檢測(cè)（如豬偽狂犬病毒活疫苗等）按非禽源細(xì)胞及其制品外源病毒檢驗(yàn)方法執(zhí)行。4．其它非禽源外源病毒檢測(cè)方法的應(yīng)用研發(fā)單位在產(chǎn)品申報(bào)注冊(cè)時(shí)，采用的其它方法進(jìn)行的外源病毒檢測(cè)，經(jīng)農(nóng)業(yè)部獸藥評(píng)審委員會(huì)評(píng)定，認(rèn)可通過(guò)的其它外源病毒檢測(cè)方法，仍可作為該產(chǎn)品認(rèn)可的外源病毒檢測(cè)方法。如，豬偽狂犬病活疫苗（HB-98株）、水貂犬瘟熱活疫苗等。4非禽源外源病毒檢測(cè)實(shí)例展示紅細(xì)胞吸附性病毒檢測(cè)豬PPV感染PK15豬PPV感染PK15細(xì)胞吸附紅細(xì)胞(豚鼠+雞)現(xiàn)象(右圖)和正常PK15細(xì)胞對(duì)照(左圖)CAV紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)CPIV紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)正常細(xì)胞對(duì)照犬腺病毒和犬副流感病毒感染NLDK細(xì)胞4.2致細(xì)胞病變檢查法4.2.1常見(jiàn)細(xì)胞病變（CPE)特點(diǎn)：（1）細(xì)胞的折光率增強(qiáng)，形態(tài)逐漸變圓，感染細(xì)胞由局部感染擴(kuò)展到整個(gè)單層，細(xì)胞死亡、脫落。如：腸道病毒、偽狂犬病毒等。細(xì)胞聚集成叢，類(lèi)似葡萄串狀，細(xì)胞之間常有細(xì)絲狀細(xì)胞間橋連接，細(xì)胞變圓或膨大。如大多數(shù)腺病毒。細(xì)胞融合形成多核巨細(xì)胞，又稱為合胞體。如副粘病毒。胞漿中有空泡形成。如呼腸孤病毒、SV40等。BVDV

C24V株感染MDBK細(xì)胞CPE(右圖,200X)和正常MDBK細(xì)胞對(duì)照(左圖,200XBVDV

C24V株感染牛睪丸細(xì)胞CPE(右圖，100X)和正常牛睪丸細(xì)胞(左圖,100X)PRRS病毒感染Mark

145細(xì)胞CPE(右圖,100X)和正常Mark

145細(xì)胞對(duì)照(左圖,100X）4.2.2 合胞體（Syncytia）:是病毒感染后導(dǎo)致感染細(xì)胞及相鄰細(xì)胞胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細(xì)胞相鄰的細(xì)胞膜消失，形成多核的巨細(xì)胞。融合形成的融合橋可允許病毒亞單位（核衣殼、核酸等）通過(guò)。如BRSV、IBRV等。呼吸道合胞體I型病毒感染Vero細(xì)胞4.2.3 包涵體：細(xì)胞感染病毒后，出現(xiàn)于細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)的特殊結(jié)構(gòu)。在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)。多為圓形、卵圓形或不定形。一般是由完整的病毒顆粒或尚未裝配的病毒亞基聚集而成；少數(shù)

則是宿主細(xì)胞對(duì)病毒感染的反應(yīng)產(chǎn)物，不含病毒粒子。有的位于細(xì)胞質(zhì)中（如天花病毒包涵體）有的位于細(xì)胞核中（如皰疹病毒）或細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核中都有（如麻疹病毒）有的還具有特殊名稱，如天花病毒包涵體叫顧氏（Guarnieri）小體，狂犬病毒包涵體叫內(nèi)基氏（Negri）小體。包涵體觀察4.3

熒光抗體檢查法免疫熒光技術(shù)中熒光抗體染色具有三種基本方法，即直接法(FA)、間接法(IFA)、抗補(bǔ)體法。最常用的是直接法和間接法。一般來(lái)說(shuō)，F(xiàn)A法步驟少，特異性高，但敏感性較低；IFA法步驟多，非特異性相對(duì)增多，單敏感性可提高5～10倍。熒光抗體染色常用固定劑：（1）80%或100%冷丙酮：絕大部分病毒固定使用。（2）冷甲醇/丙酮：，配制時(shí)體積比1:1。(3)95%或100%乙醇：對(duì)可溶性蛋白抗原的固定,特別是切片樣品。（4）四氯化碳：較常用于病毒抗原及其它微生物抗原的固定。（5）8－10%福爾馬林：對(duì)脂多糖抗原較適合，因?yàn)檫@類(lèi)抗原可溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。固定時(shí)間：一般為室溫5～15分鐘，易失活病毒4℃30～60分鐘，或-20℃固定12小時(shí)以上。常見(jiàn)熒光素吸收波長(zhǎng)及熒光顏色熒光色素名稱最大發(fā)射廣波長(zhǎng)（nm）最大吸收峰波長(zhǎng)（nm）熒光顏色FITC異硫氰酸熒光素520～530495黃綠色熒光RB200羅丹明595～600570桔紅色熒光TMRITC四甲基異硫氰酸羅丹明620550桔紅色熒光豬瘟病毒間接免疫熒光（IFA）CSFV

Thiverval株感染PK15

72小時(shí)PPV感染ST細(xì)胞72小時(shí)（左100X，右200X)豬細(xì)小病毒病毒間接免疫熒光（IFA）BVDV間接免疫熒光（IFA)BVDV(C24V株，10-2)感染MDBK細(xì)胞（72小時(shí)，100X）BVDV(C24V株，10-2)感染MDBK細(xì)胞（72小時(shí),200X)BVDV直接免疫熒光（FA)BVDV感染MDBK細(xì)胞（200X）BVDV感染MDBK細(xì)胞（200X)BVDV感染BT細(xì)胞RV感染BHK21細(xì)胞犬細(xì)小病毒GD/2011株感染F81細(xì)胞（FA）BTV感染BHK21細(xì)胞5

病毒室可提供的檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和檢測(cè)試劑5.1外源病毒檢測(cè)用參考毒種試劑名稱規(guī)格用途制備組豬瘟病毒（Thiveral株）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)等豬病組豬細(xì)小病毒（NADL-2株）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等豬病組豬細(xì)小病毒（7909株）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等豬病組牛病毒性腹瀉病毒Oregon

C24V株（AV69）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等牛羊病組牛病毒性腹瀉病毒NADL株（AV67）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等牛羊病組狂犬病病毒弱毒株（CVS-11株）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等牛羊病組犬細(xì)小病毒（弱毒株）0.5ml/支外源病毒檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等牛羊病組5.2檢測(cè)用陽(yáng)性血清試劑名稱規(guī)格用途羊源偽狂犬病病毒陽(yáng)性血清1ml/支外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等。羊源偽狂犬病病毒陰性血清1ml/支鑒別檢驗(yàn)等。牛源病毒性腹瀉/粘膜病病毒陽(yáng)性血清1ml/支中和試驗(yàn)、試劑盒研制等。牛源病毒性腹瀉/粘膜病病毒陰性血清1ml/支中和試驗(yàn)、試劑盒研制等。牛源傳染性牛鼻氣管炎病毒陽(yáng)性血清1ml/支中和試驗(yàn)、試劑盒研制等。牛源傳染性牛鼻氣管炎病毒陰性血清1ml/支鑒別檢驗(yàn)、試劑盒研制等。羊源山羊痘病毒陽(yáng)性血清1ml/瓶外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等。羊源山羊痘病毒陰性血清1ml/瓶鑒別檢驗(yàn)等。羊源小反芻獸疫病毒陽(yáng)性血清1ml/瓶外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等。羊源小反芻獸疫病毒陰性血清1ml/瓶鑒別檢驗(yàn)等。犬源狂犬病標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1ml/瓶外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等。犬源狂犬病陰性血清1ml/瓶鑒別檢驗(yàn)等。兔源狂犬病陽(yáng)性血清1ml/瓶外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等。兔源狂犬病陰性血清1ml/瓶鑒別檢驗(yàn)等。犬源犬細(xì)小病毒陽(yáng)性血清1ml/瓶外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、中和試驗(yàn)等。5.3 非禽源外源病毒檢測(cè)熒光抗體試劑（新增加）試劑名稱規(guī)格用途制備組豬細(xì)小病毒間接免疫熒光檢測(cè)試劑盒200頭份（約10批苗）外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等豬病組豬瘟病毒間接免疫熒光抗體檢測(cè)試劑盒200頭份（約10批苗）外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等豬病組牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒間接免疫熒光檢測(cè)試劑盒200頭份（約10批苗）外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等豬病組FITC標(biāo)記的牛傳染性鼻氣管炎病毒直接熒光抗體1ml/支外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等牛羊病組FITC標(biāo)記的牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒直接熒光抗體1ml/支外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等牛羊病組FITC標(biāo)記的藍(lán)舌病直接熒光抗體1ml/支外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)等牛羊病組FITC標(biāo)記的狂犬病病毒直接熒