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植物葉綠素的定量測(cè)定及吸收光譜

——分光光度計(jì)的使用2010.04.07一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)基本的物質(zhì)定量測(cè)定方法與分光光度計(jì)的使用。學(xué)習(xí)測(cè)定葉綠素總量及吸收光譜的技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素的含量測(cè)定方法有多種，其中主要有：

1、原子吸收光譜法：2、分光光度法：葉綠素a和葉綠素b在649nm和665nm處有最大吸收，且兩吸收曲線相交于652nm處。因此測(cè)定提取液在649nm、665nm，并根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。

三、儀器、原料和試劑分光光度計(jì)、天平、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、新鮮的植物葉片、95％乙醇(或80％丙酮)、石英砂、碳酸鈣粉

四、操作步驟1.葉綠素濾液的提取制備：2.比色與結(jié)果計(jì)算：3.吸收光譜曲線測(cè)定與繪制1.葉綠素濾液的提取制備：葉片0.5g、石英砂和碳酸鈣粉、3mL95％乙醇，研磨之糊狀；再加乙醇10mL，研磨至組織變白。靜置3～5min。用濾紙過濾至棕色容量瓶中，少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次。定容至25mL。2.比色與結(jié)果計(jì)算：以95％乙醇為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)665nm、649nm和652nm下測(cè)定濾液的吸光度。95％乙醇提取液中色素濃度計(jì)算公式（mg/L）：

Ca=13.95A665-6.88A649

Cb=24.96A649-7.32A665

葉片色素的含量

五、在96％乙醇中葉綠素的吸收光譜

95％乙醇作空白對(duì)照，在400-700nm范圍內(nèi)以20nm間隔測(cè)定并記錄提取液的光密度讀數(shù)，在最大吸收部位，以5毫微米為間隔增加讀數(shù)。以光密度讀

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