常用染色液配制

1．草酸銨結(jié)晶紫染色液A液：結(jié)晶紫 2.5g，95%乙醇25mL。B液：草酸銨 1.0g，蒸餾水1000mL。制備時(shí)，將結(jié)晶紫研細(xì)，加入 95%乙醇溶解，配成 A液。將草酸銨溶于蒸餾水，配成B液。兩液混合靜止 48h后，過(guò)濾后使用。2．魯格爾氏（路戈氏）碘液碘1.0g，KI2.0g，蒸餾水300mL。先用3~5mL蒸餾水溶解KI，再加入碘片，稍加熱溶解，加足水過(guò)濾后使用。3．脫色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液： 95％乙醇70mL，丙酮30mL4．沙黃（番紅）染色液2.5％沙黃（番紅）乙醇溶液：沙黃（番紅） 2.5g，95%乙醇100mL。此母液存放于不透氣的棕色瓶中，使用時(shí)取 20mL母液加80mL蒸餾水使用。5．0.1％美蘭染色液0.1g溶解于100mL蒸餾水中。6．呂氏堿性美藍(lán)色染色液A液：美藍(lán)0.3g，95%乙醇30mL。B液：KOH0.01g，蒸餾水100mL，分別配制 A液和B液，混合即可。7．瑞氏染色液瑞氏染料粉未 0.3g,甘油3mL，甲醇97mL。將染料放乳缽內(nèi)研磨，先加甘油，后加甲醇，過(guò)夜后過(guò)濾即可。8．5％孔雀綠水溶液（芽孢染色用）孔雀綠5.0g,

蒸餾水

100mL。先將孔雀綠放乳缽內(nèi)研磨，加少許

95％乙醇溶解，再加蒸餾水。9．黑色素水溶液（莢膜負(fù)染色用）黑色素10g，蒸餾水100mL，40％甲醛（福爾馬林）0.5mL。將黑色素溶于蒸餾水中，煮沸5min，再加福爾馬林作防腐劑，用玻璃棉過(guò)濾。10．硝酸銀鞭毛染色液A液：?jiǎn)螌幩?5.0g，F(xiàn)eCL31.5g，福爾馬林(15%)2.0mL，1%NaOH.0mL，蒸餾水100mL。B液：AgNO32.0g,蒸餾水100mL。將AgNO3溶解后，取出10mL備用，向其它的90mL硝酸銀液中加濃氫氧化銨，則形成很厚的沉淀，再繼續(xù)滴加氫氧化銨到剛剛?cè)芙獬恋沓蔀槌吻迦芤簽橹Ｔ賹溆玫南跛徙y慢慢滴入，則出現(xiàn)薄霧，但輕輕搖動(dòng)后，薄霧狀的沉淀又消失，再滴入硝酸銀，直到搖動(dòng)后，仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為之。如霧重，則銀鹽沉淀出，不宜使用。11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液A：20％單寧（鞣酸）2.0mL；B：飽和鉀明礬液(20%)2.0mL；C：5％石炭酸2.0mL；D：堿性復(fù)紅酒精（ 95％）飽和液 1.5mL。將以上各液于染色前 1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的順序，混合均勻，馬上過(guò)濾 15~20次，2~3d內(nèi)使用效果較好。12．石炭酸復(fù)紅染色液A液:堿性復(fù)紅0.3g，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚 ）5g，蒸餾水95mL。先將染料溶解于乙醇，將苯酚溶于水， AB兩液混合即可。13．乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液石炭酸（苯酚）10g，乳酸（比重1.21）10mL，甘油20mL，棉藍(lán)（苯胺藍(lán)）0.21g，蒸餾水10mL。將石炭酸加入蒸餾水中，加熱溶解，再加入乳酸和甘油，最后加棉藍(lán)。附錄Ⅴ：常用緩沖液的配制1．pH7.0磷酸鹽緩沖液（PBS）（20℃pH值7.0~7.1）甲液：KH2PO434.0g，蒸餾水1000mL；乙液：K2HPO443.6g，蒸餾水1000mL。甲液二份和乙液三份混合即可。2．0.2mol/l 醋酸緩沖液（pH7.0）甲液：醋酸 34.0mL，蒸餾水1000mL；乙液：醋酸鈉 43.6g，蒸餾水1000mL。甲液72mL，乙液28mL，NaCL0.58g，配畢測(cè)pH值，以121℃，30min滅菌后備用。3．明膠磷酸鹽緩沖液成分：明膠 2g，磷酸氫二鈉 4g，蒸餾水1000mL，pH6.2。制法：加熱溶解，校正 pH，121℃高壓滅菌 15min。4．包被緩沖液(pH9.6碳酸鹽緩沖液)的制備N(xiāo)a2CO31.59g，NaHCO32.93g，加蒸餾水至 1000mL。也可用pH9.6的磷酸鹽緩沖液代替。5．洗液(PBS－T)的制備PBS加0.05%(V/V)吐溫-20。6．抗體稀釋液的制備BSA1.0g加PBS－T至1000mL；封閉液的制備同抗體稀釋液。7．底物緩沖液的制備A液(0.1mol/L 檸檬酸水溶液)