細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法07

細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法中山醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室編輯ppt實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞因子跨膜分泌阻滯劑BFA，使新產(chǎn)生細(xì)胞因子滯留在細(xì)胞內(nèi)；破膜劑使熒光抗體可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并可以檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞因子；流式細(xì)胞記數(shù)技術(shù)可以記數(shù)細(xì)胞，分析相應(yīng)細(xì)胞的質(zhì)和量。

編輯ppt方法特點(diǎn)1.單細(xì)胞水平計(jì)數(shù)

2.簡(jiǎn)單、快捷、靈敏3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀

編輯ppt實(shí)驗(yàn)過程取淋巴細(xì)胞，刺激劑作用，37℃孵育1小時(shí)

參加BFA繼續(xù)培養(yǎng)5小時(shí)，用PBS洗滌。4%多聚甲醛室溫固定8分鐘后，PBS洗滌。編輯ppt重懸細(xì)胞，4℃放置幾小時(shí)或過夜。參加熒光標(biāo)記抗體,4℃避光30分鐘，洗滌。緩沖液2重懸，流式細(xì)胞記數(shù)儀檢測(cè)。結(jié)果分析編輯ppt需要的緩沖液

1.1×PBS1升〔洗細(xì)胞用〕2.PBS+0.1%BSA+NaN30.05%500ml(用于染色后FACS前)3.PBS+BSA+NaN3+0.1%Saponin250ml(封閉染色后用)4.PBS+BSA+NaN3+Saponin+5%milk40ml編輯ppt流式細(xì)胞儀〔FLOWCYTOMETER，F(xiàn)CM〕對(duì)于處在流動(dòng)狀態(tài)的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)的快速的定量和分析的技術(shù)。編輯ppt檢測(cè)儀器：流式細(xì)胞記數(shù)儀編輯pptFCM結(jié)構(gòu)組成局部液流系統(tǒng);將細(xì)胞引導(dǎo)至檢測(cè)位點(diǎn)光學(xué)系統(tǒng);產(chǎn)生并收集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng);將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào),使之?dāng)?shù)字化,輸入計(jì)算機(jī)并分析。細(xì)胞分選系統(tǒng)。編輯ppt編輯pptFLOWCELL(流動(dòng)室)InjectorTip熒光信號(hào)聚焦的激光光束鞘液編輯ppt熒光信號(hào)每種熒光染料均有特定的激發(fā)波長(zhǎng),并激發(fā)后會(huì)有發(fā)射波長(zhǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)的即是它特定的發(fā)射波長(zhǎng).利用各種不同波長(zhǎng)的光學(xué)濾片來收集(檢測(cè))這些光學(xué)信號(hào)編輯ppt熒光染料的特性激發(fā)波長(zhǎng)(EXCITING)發(fā)射波長(zhǎng)(EMISSION)編輯ppt激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物編輯pptFALSSensorLaser前向角散射光信號(hào)

編輯pptFALSSensor90LSSensorLaser側(cè)向角散射光信號(hào)編輯pptFluorescenceFALSSensorFluorescencedetector(FL1,FL2,FL3,FL4)編輯ppt檢測(cè)信號(hào)編輯ppt雙參數(shù)點(diǎn)圖編輯ppt標(biāo)本制備標(biāo)本來源:外周血、骨髓、培養(yǎng)細(xì)胞、組織(經(jīng)尼龍網(wǎng)300目過濾)制成單細(xì)胞懸液標(biāo)本濃度：106/ml-外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)，白血病人血標(biāo)本需PBS稀釋抗凝劑：EDTA、肝素-假設(shè)抗凝不佳，有凝塊，那么不可檢測(cè)。溶血?jiǎng)罕３旨?xì)胞形態(tài)、紅細(xì)胞裂解完全。反響溫度：26~27oC，室溫避光。 編輯ppt結(jié)果示范1.560.258.230.26左圖顯示在抗原刺激前，CD4+和CD4-細(xì)胞中能產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞占PBMC的0.2