畢業(yè)設(shè)計論文-瘦肉精的危害及檢測方法

黃河水利職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)論文（設(shè)計報告）黃河水利職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)論文（設(shè)計）報告題目：瘦肉精的危害及檢測方法學生：指導教師：專業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用班級：生物技術(shù)及應(yīng)用1101班2013年12月27日摘要瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。瘦肉精雖然能提高豬的瘦肉率帶來更多經(jīng)濟價值，但它是有很危險的副作用，人體食用含有瘦肉精的肉會對身體產(chǎn)生危害，常見的有惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，特別對心臟病、高血壓患者危害更大，長期食用則可能導致染色體基變，誘發(fā)惡性腫。因此在生豬的收購、加工、市場銷售的過程中要加大檢測力度，來保證人民的身體健康。目前，除傳統(tǒng)檢測項目在生豬加工過程中使用外，也加入了瘦肉精的檢測，常見的檢測方法有氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜檢測法、酶聯(lián)免疫吸附法、液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法、膠體金檢測卡法等多種途徑。本文主要介紹了瘦肉精的特點、類型、發(fā)病癥狀、治療方法及防范措施、檢測方法等。詳細綜述了瘦肉精的檢測方法，并結(jié)合自己在眾品集團實習方面的一些經(jīng)歷，介紹了目前較為流行的瘦肉精檢測方法及各自的優(yōu)勢，最后總結(jié)了瘦肉精檢測方法的發(fā)展前景。關(guān)鍵詞：瘦肉精鹽酸克倫特羅人體危害液相色譜黃河水利職業(yè)技術(shù)學院畢業(yè)論文（設(shè)計報告）I目錄TOC\o"1-2"\h\u155651.引言 219951.1瘦肉精的概念 2166451.2瘦肉精的類型 284911.3瘦肉精事件 435641.4瘦肉精中毒癥狀 7199681.5瘦肉精中毒治療辦法 8125241.6瘦肉精的防治措施 9153902.傳統(tǒng)生豬檢測 10261993.瘦肉精的檢測方法 1033783.1氣象色譜-質(zhì)譜檢測法 11197723.2高效液相色譜檢測法 11163203.3酶聯(lián)免疫吸附法 1279283.4液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS) 12125313.5膠體金檢測卡法 13123604.實習經(jīng)歷 1315114.1樣品處理 13286434.2使用方法 14914.3注意事項 14304335.快速檢測的優(yōu)點 1586896.瘦肉精檢測發(fā)展趨勢 178584致謝 1923138文獻 20PAGE21瘦肉精的危害及檢測方法1.引言1.1瘦肉精的概念 瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。使用瘦肉精可以促進動物體蛋白質(zhì)沉積、促進脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此曾被用作牛、羊、禽、豬等畜禽的促生長劑、飼料添加劑。瘦肉精在人體內(nèi)也會產(chǎn)生很大危害，可使人表現(xiàn)為面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等一系列不良反應(yīng)。一次性攝入克倫特羅的量過大，還會迅速導致心率過速，對原有心律失常的病人更易突發(fā)心臟病，嚴重時會出現(xiàn)心肌梗死。我國政府也將瘦肉精列為動物飼養(yǎng)中禁止添加藥品以及肉類產(chǎn)品必檢項目。1.2瘦肉精的類型瘦肉精的種類比較多，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”,其中最常用的為鹽酸克倫特羅(ClenbuterolHydrochloride)，常見的有：鹽酸克倫特羅(ClenbuterolHydrochloride)萊克多巴胺(Ractopamine)沙丁胺醇(Salbutamol)硫酸沙丁胺醇(SalbutamolSulfate)鹽酸多巴胺(DopamineHydrochloride)西馬特羅(Cimaterol)硫酸特布他林(TerbutalineSulfate)苯乙醇胺A(PhenylethanolamineA)班布特羅(Bambuterol)鹽酸齊帕特羅(ZilpaterolHydrochloride)鹽酸氯丙那林(ClorprenalineHydrochloride)馬布特羅(Mabuterol)西布特羅(Cimbuterol)溴布特羅(Brombuterol)酒石酸阿福特羅(ArformoterolTartrate)富馬酸福莫特羅(FormoterolFumatrate)1.3瘦肉精事件一、雙匯瘦肉精事件18道檢驗不檢瘦肉精消費者熟悉的雙匯集團旗下公司被央視3·15特別節(jié)目曝光。央視報道，雙匯宣稱“十八道檢驗、十八個放心”，但豬肉不檢測“瘦肉精”。添加“瘦肉精”養(yǎng)殖的有毒生豬，順利賣到雙匯集團旗下公司。據(jù)央視《每周質(zhì)量報告》的3·15特別節(jié)目《“健美豬”真相》報道，養(yǎng)豬場采用違禁動物藥品“瘦肉精”飼養(yǎng)，有毒豬肉流向了雙匯。濟源雙匯食品有限公司是河南雙匯集團下屬的分公司，以生豬屠宰加工為主，有自己的連鎖店和加盟店，“十八道檢驗、十八個放心”的字樣隨處可見，但卻不包括“瘦肉精”檢測。濟源雙匯食品有限公司采購部業(yè)務(wù)主管承認，他們廠的確在收購添加“瘦肉精”養(yǎng)殖的所謂“加精”豬，而且收購價格比普通豬還要貴一些。這種豬停喂“瘦肉精”一周后，送到他們廠里賣的時候就不容易被查出來。二、雨潤事件“雨潤”午餐肉：2009年安徽省質(zhì)監(jiān)局曾經(jīng)通報，阜陽“雨潤”、合肥“臘味思”各有一批次午餐肉和臘肉檢出含有禁用物質(zhì)“瘦肉精”。《每日經(jīng)濟新聞》從安徽省質(zhì)監(jiān)局獲悉，雨潤集團已將問題午餐肉全部召回并銷毀，而合肥“臘味思”的該批次產(chǎn)品也未流向市場。根據(jù)安徽省質(zhì)監(jiān)局通報，合肥市臘味思食品有限公司2009年1月19日生產(chǎn)的臘肉、阜陽雨潤肉類加工有限公司2009年3月16日生產(chǎn)的午餐肉經(jīng)抽查發(fā)現(xiàn)含有“克倫特羅”（瘦肉精）。據(jù)安徽媒體報道，當?shù)毓ど虉?zhí)法人員于21日上午對上述2個批次產(chǎn)品展開市場清查，但并沒有發(fā)現(xiàn)合肥市臘味思公司的產(chǎn)品。而標注為阜陽生產(chǎn)的“雨潤”肉制品很少。執(zhí)法人員只在一家中小超市內(nèi)發(fā)現(xiàn)一款阜陽生產(chǎn)的“雨潤”火腿腸，但沒有看到午餐肉制品?！霸撆萎a(chǎn)品的總量只有100盒左右，今天已全部召回并銷毀。”南京雨潤集團相關(guān)負責人昨天向《每日經(jīng)濟新聞》表示，午餐肉是雨潤為數(shù)不多的高溫產(chǎn)品之一，只在安徽附近銷售，由阜陽雨潤肉類加工有限公司加工生產(chǎn)，產(chǎn)量小，一年銷售額大約只有10萬元左右?！睹咳战?jīng)濟新聞》記者從滬上零售市場看到，上海所售的“雨潤”火腿腸等產(chǎn)品幾乎都產(chǎn)自江蘇南京，并沒有阜陽產(chǎn)的“雨潤”午餐肉。多家超市也表示從來沒有采購過合肥“臘味思”這一產(chǎn)品。不過，為了安全起見，部分超市已開始對“雨潤”品牌旗下的其他產(chǎn)品進行清查，并要求供應(yīng)商提供各批次產(chǎn)品的質(zhì)檢合格報。三、山東瘦肉精羊河北198只瘦肉精羊已全部撲殺中新社石家莊4月11日電（記者牛琳)河北省畜牧局11日透露，由山東流入河北的198只“瘦肉精羊”已全部撲殺，并進行無害化處理。2011年4月1日，由山東省慶云縣運往河北省青縣宰殺點待宰殺的198只綿羊，被河北省畜牧局現(xiàn)場抽檢出“瘦肉精”成分。2日，該省獸藥監(jiān)察所對查獲的疑似“瘦肉精羊”進行二次檢驗，抽取48份尿樣，經(jīng)檢測全部為“瘦肉精”陽性，這批待宰羊隨后由當?shù)剞r(nóng)業(yè)部門異地封存圈養(yǎng)。據(jù)介紹，在河北省畜牧獸醫(yī)局和滄州市農(nóng)牧局工作人員的監(jiān)督下，青縣組織有關(guān)部門對該批肉羊全部撲殺，并進行無害化處理。2011年3月31日晚，河北省食品整治辦接到舉報稱，山東省一批“瘦肉精羊”運至滄州青縣戴莊子村尹中路屠宰點，擬于當日晚間或次日晨屠宰。1日凌晨，河北省食品整治辦工作人員與當?shù)赜嘘P(guān)部門會合，共同對尹中路屠宰點進行突擊檢查。經(jīng)查，現(xiàn)場共有待宰羊198只，系畜主山東慶云縣渤海路西石官堂村劉玉國于3月31日下午從山東運來，準備在此宰殺。四、河北瘦肉精羊河北省昌黎縣人民法院29日宣判一起“瘦肉精”案件，昌黎縣龍家店鎮(zhèn)西刁坨村38歲的農(nóng)婦韓立榮違反中國食品衛(wèi)生管理法規(guī)，明知“瘦肉精”是有毒、有害的非食品原料且國家明令禁止給家畜喂食，仍故意給其飼養(yǎng)的育肥羊投喂，結(jié)果被追究刑事責任。法院以生產(chǎn)、銷售有毒、有害食品罪判處韓立榮有期徒刑5年，并處罰金人民幣7萬元。昌黎縣人民法院經(jīng)審理查明：被告人韓立榮于2009年開始飼養(yǎng)肉用育肥羊。因給育肥羊喂食含有“鹽酸克侖特羅”（俗稱“瘦肉精”）的飼料，其丈夫于2009年受到昌黎縣畜牧發(fā)展局處罰。昌黎縣畜牧發(fā)展局在處罰的同時告知被告人韓立榮，含有“鹽酸克侖特羅”的藥品不能喂羊。2011年，韓立榮飼養(yǎng)了220只育肥羊，被告人韓立榮從一商販手中購買了兩千多片含有“鹽酸克侖特羅”成分的藥片，并在明知此藥片含有“鹽酸克侖特羅”成分且畜牧部門不準給飼養(yǎng)的家畜喂食的情況下，仍繼續(xù)給其飼養(yǎng)的育肥羊喂食。2011年3月22日，被告人韓立榮被昌黎縣畜牧發(fā)展局執(zhí)法人員查獲，有關(guān)人員當日當場對其中六頭育肥羊的尿樣進行抽樣，結(jié)果呈陽性。其中兩份尿樣送交秦皇島市出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心檢驗，確認被告人韓立榮飼養(yǎng)的育肥羊尿液含“鹽酸克侖特羅”成分。被告人韓立榮當庭供述,220只羊一個月后售出，得款7萬元。昌黎縣人民法院認為，公訴機關(guān)指控被告人韓立榮犯罪的事實清楚，提供的證據(jù)充分，故對其指控的罪名成立。被告人韓立榮違反中國食品衛(wèi)生管理法規(guī)，明知“鹽酸克侖特羅”藥片是有毒、有害的非食品原料，且國家明令禁止給家畜喂食的前提下，仍故意給其飼養(yǎng)的育肥羊投喂該藥品，其行為已構(gòu)成生產(chǎn)、銷售有毒、有害食品罪。依據(jù)《中華人民共和國刑法》和《最高人民法院、最高人民檢察院關(guān)于辦理非法生產(chǎn)、銷售、使用禁止在飲料和動物飲用水中使用的藥品等刑事案件具體應(yīng)用法律若干問題的解釋》的相關(guān)規(guī)定，昌黎縣人民法院作出上述一審判決。1.4瘦肉精中毒癥狀在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，由于經(jīng)濟利益的驅(qū)使以及檢測方法、手段還不完善，一些非法生產(chǎn)者將其作為一種生長促進劑添加到動物飼料中。在豬等肉用牲畜中投喂克倫特羅，即使是屠宰前七天停藥，肝、肺中仍可檢出較高濃度的克倫特羅。由于克倫特羅分解溫度較高，一般烹調(diào)的方法（100℃）無法破壞其生物活性，即使是油炸（260℃）也只能使其活性損失一部分。人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會出現(xiàn)急性中毒癥狀，表現(xiàn)為面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢麻木等一系列不良反應(yīng)。一次性攝入克倫特羅的量過大，還會迅速導致心率過速，對原有心律失常的病人更易突發(fā)心臟病，嚴重時會出現(xiàn)心肌梗死。同時，由于激活了Na+-K+-ATP酶，促使鉀離子進入細胞內(nèi)引起血鉀降低，從而導致心律失常?？藗愄亓_通過增加肌糖原的分解，引起血液中乳酸、丙酮酸的升高，并可出現(xiàn)酮體，容易引起糖尿病人代謝紊亂，導致酮癥酸中毒或乳酸中毒。通過對大鼠毒理試驗結(jié)果的研究，使用2000μg/kg·d的高劑量克倫特羅，可極大地降低體內(nèi)牛磺酸的貯備，使骨骼肌收縮增加，并且破壞快縮肌纖維和慢縮肌纖維的融合現(xiàn)象，因此可引發(fā)肌肉震顫，四肢和面部肌肉痙攣，出現(xiàn)行走不穩(wěn)、無法握物等癥狀。盡管反復(fù)使用會產(chǎn)生耐受性，對支氣管擴張作用減弱及持續(xù)時間縮短。但是對于原有心律失常、高血壓、青光眼、糖尿病、甲狀腺功能亢進、前列腺肥大等疾病的患者，上述癥狀更易發(fā)生，甚至危及生命。[雖然鹽酸克倫特羅殘留的毒作用為輕度的，但長期食用含有瘦肉精的豬肉和內(nèi)臟會引起人體心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。臨床表現(xiàn)為：1．急性中毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動，有手抖甚至不能站立，頭暈，乏力，原有心律失常的患者更容易發(fā)生反應(yīng)，心動過速，室性早搏，心電圖示S-T段壓低與T波倒置。2．原有交感神經(jīng)功能亢進的患者，如有高血壓、冠心病、甲狀腺功能亢進者上述癥狀更易發(fā)生。3．與糖皮質(zhì)激素合用可引起低血鉀，從而導致心律失常。4．反復(fù)使用會產(chǎn)生耐受性，對支氣管擴張作用減弱及持續(xù)時間縮短。雖然克倫特羅殘留的毒作用為輕度的，但美國FDA研究表明，應(yīng)用擬交感神經(jīng)藥者或?qū)η八庍^敏者，對克倫特羅的反應(yīng)要比正常健康個體更為嚴重。FDA擔心非法應(yīng)用克倫特羅可導致此藥的生產(chǎn)工人患病或死亡。FDA指出，職業(yè)性吸入克倫特羅對心血管的影響，可能要比經(jīng)食品攝食的危害性更大，但有待于進一步的證實。1.5瘦肉精中毒治療辦法1.在食用含有瘦肉精的肉類及肉類產(chǎn)品后感到不適時應(yīng)當立即到醫(yī)院就診，并保留食物到質(zhì)檢中心檢驗是否瘦肉精中毒。2．立即洗胃、輸液，促使毒物排出。2．在心電圖監(jiān)測及電解質(zhì)測定下，使用保護心臟藥物如6-二磷酸果糖(FDP)及β1-受體阻滯劑倍他樂克。4.喝水稀釋其含量，停止使用該種肉類。1.6瘦肉精的防治措施1.加強輿論宣傳加強輿論宣傳進一步加強輿論宣傳，通過各種媒體宣傳“瘦肉精”對人類的危害，認清“瘦肉精”的本質(zhì)。加強生產(chǎn)者的職業(yè)道德教育，同時提高消費者識別、抵制能力。大力宣傳畜產(chǎn)品安全生產(chǎn)的意義和要求，強化畜產(chǎn)品衛(wèi)生安全意識，增強生產(chǎn)者的產(chǎn)品標準意識、食品質(zhì)量安全意識：及時通報查處“瘦肉精”案例，以震懾不法分子，對于打擊不力的連續(xù)發(fā)生“瘦肉精”中毒的地區(qū)予以曝光，停運、停銷違規(guī)地區(qū)的生豬，確保畜產(chǎn)品安全。2.加大經(jīng)費投入以擴大檢測范圍就目前情況來看，“瘦肉精”監(jiān)測大多集中在大城市，而在偏遠的地區(qū)，設(shè)施落后，經(jīng)費不足無法開展“瘦肉精”檢測工作，導致出現(xiàn)“瘦肉精”檢測空白區(qū)。因此國家應(yīng)加大必要的經(jīng)費投入，保證更好地開展“瘦肉精”檢測工作。加強對養(yǎng)豬企業(yè)的日常監(jiān)督和生豬出欄前的“瘦肉精”殘留檢測，在當前生豬尿樣檢測的基礎(chǔ)上擴大監(jiān)測覆蓋面，增加抽檢頻率，切實加強對生豬源頭的檢查監(jiān)督。3.消費者購買豬肉時要揀帶些肥膘(1-2cm)的肉，顏色不要太鮮紅，豬內(nèi)臟因瘦肉精殘留量多不宜食用。各地政府及動物檢疫局要始終保持高度警惕，防止死灰復(fù)燃，防止流散在社會個人手中的“瘦肉精”產(chǎn)生新的危害。公安部將發(fā)動全國公安機關(guān)特別是基層派出所會同有關(guān)部門立足轄區(qū)，主動摸排，信息共享，關(guān)口前移，力爭對食品安全等違法犯罪線索早發(fā)現(xiàn)、早檢測、早查處，減少危害。同時也希望廣大群眾積極舉報，一旦發(fā)現(xiàn)此類犯罪活動，公安機關(guān)將依法嚴肅查處、嚴懲不貸。國務(wù)院副總理、國務(wù)院食品安全委員會主任李克強表示，要以堅決的態(tài)度、過硬的舉措、更大的力度，持續(xù)深入整治食品非法添加行為，切實解決影響食品安全的突出問題，要以《食品安全法》為準繩，重典治亂，加大懲處力度，切實改變違法成本低的問題，讓不法分子付出高昂代價，真正起到震懾作用。中國衛(wèi)生部下發(fā)通知，要求衛(wèi)生系統(tǒng)做好嚴厲打擊食品非法添加行為，切實加強食品添加劑監(jiān)管，高度重視對非法添加行為造成食品安全事故的責任調(diào)查。2.傳統(tǒng)生豬檢測在瘦肉精事件發(fā)生以前，肉制品企業(yè)對所收購的生豬進行檢驗時只進行豬的疫病、體重、以及形態(tài)進行檢查?？谔阋?、豬瘟、高致病性豬藍耳病、炭疽、豬丹毒、豬肺疫、豬副傷寒、豬Ⅱ型鏈球菌病、豬支原體肺炎、副豬嗜血桿菌病、絲蟲病、豬囊尾蚴病、旋毛蟲病。入場（廠、點）時，只要具備有效的《動物檢疫合格證明》，無規(guī)定的傳染病和寄生蟲病，需要進行實驗室疫病檢測的，檢測結(jié)果合格，只要履行規(guī)程規(guī)定的檢疫程序，檢疫結(jié)果符合規(guī)定的都可以進入屠宰生產(chǎn)。3.瘦肉精的檢測方法瘦肉精的檢測方法很多，因此，大家一直都在關(guān)注瘦肉精的檢測方法。但是由于瘦肉精的種類增長速度快，現(xiàn)在的一些常檢測方法不能有效的檢測出來。所以，檢測方法的完善在這方面就起到了至關(guān)重要的作用。最早的檢測方法比較復(fù)雜，靈敏性底不能有效的達到檢測目的。以下是幾種比較常見的檢測方法：3.1氣象色譜-質(zhì)譜檢測法氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。FenteC.A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；PteerBatioens應(yīng)用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織中的CLB含量進行檢測，最低檢測限為2μg/g；劉琪等用GC-MS法(EI離子源）檢測豬尿中的CLB,檢測限為0.5μg/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB,衍生物用電脈沖方式或化學離子化方式掃描，會產(chǎn)生更高的靈敏度。另外,GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，中國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法(NY/T468~2001)。3.2高效液相色譜檢測法HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且,HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實現(xiàn)分析過程的自動化。黃士新等(1995)應(yīng)用紫外檢測器，在λ=243nm,色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn,流速：1mL/min,柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留，最低檢測限可達2μg/g。國外有人應(yīng)用HPLC(二極管陣列檢測器）測定動物性食品中CLB殘留，測得最低檢測限為1.26ng/g,回收率達98.9%。中國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15μg/g,其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點是樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應(yīng)用中受到一定的限制。3.3酶聯(lián)免疫吸附法利用免疫學抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用，通過化學方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與克倫特羅(CL)結(jié)合，形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合，然后加入待測克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結(jié)合，洗滌后加底物，根據(jù)有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多，則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450nm,參比波長應(yīng)大于600nm。3.4液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)參見SN/T1924—2007進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。本標準適用于動物源性食品肌肉和內(nèi)臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進行酶解后，提取液經(jīng)C18和SCX雙SPE柱凈化，液相色譜—質(zhì)譜進行測定內(nèi)標法定量。3.5膠體金檢測卡法此法速度快，適合于基層單位作初步篩選檢測。用BSA偶聯(lián)的克倫特羅分子于膠體會顆粒結(jié)合后，包被在醋酸纖維素膜上；在硝酸纖維素膜上將克倫特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)。加入樣品后，樣本中的克倫特羅分子與克倫特羅一BSA一膠體金偶聯(lián)物一起層析泳動到檢測區(qū)競爭與克倫特羅抗體結(jié)合，剩余的克倫特羅一BSA～膠體金繼續(xù)泳動到質(zhì)控區(qū)與抗體結(jié)合。當樣品中的克倫特羅濃度超過～定量后，膠體金偶聯(lián)物就不能與克倫特羅抗體結(jié)合，只有質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)紫紅色線條，檢測區(qū)不出現(xiàn)線條；相反則質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)都出現(xiàn)線條。4.實習經(jīng)歷下面我將詳細介紹在我實習期間所進行的測試方法：我所在的眾品公司所進行的瘦肉精檢測方法主要以快速檢測卡為主，如果檢測卡呈陽性再以儀器檢測進行確認，檢測尿液、組織和飼料樣本中萊克多巴胺的殘留量。宰前按批次進行抽查，當原料豬數(shù)量低于十頭時逐頭進行檢測，當數(shù)量大于十頭時抽檢其百分之十進行檢測，宰后檢測采用隨機抽查檢測方法和宰前一致，其中瘦肉精的檢驗采用快速試劑卡檢測，所用快速檢測卡為北京庫爾生物技術(shù)有限公司所產(chǎn)的萊克多巴胺、沙丁胺醇、克倫特羅檢測試劑卡。4.1樣品處理用干燥、潔凈的離心管或適當容器采集50ml左右尿液。如果不立即檢測，尿樣在2-8℃冷藏可保存24小時，要注意避免腐敗造成失效或污染。出現(xiàn)陽性結(jié)果時應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測。2、將瘦肉或內(nèi)臟樣本剪碎，裝入1.5ml離心管中，蓋緊管蓋。放入沸水浴中加熱5分鐘以上使有液汁浸出，取出離心管放至室溫。3、如果不立即檢測，尿樣在2-8℃冷藏可保存24小時，要注意避免腐敗造成失效或污染。4.2使用方法1、測試前將未開封的檢測卡恢復(fù)至室溫。2、從鋁箔袋中取出檢測卡（在一小時內(nèi)使用）。3、將檢測卡平放于臺面，用塑料吸管垂直滴加1滴無氣泡的樣本滲出液(約20-30ul)于加樣孔，30秒后再加入展開液2-3滴(約60-80ul)。4、反應(yīng)10min后，展開區(qū)出現(xiàn)紫色條帶為陰性結(jié)果，無條帶者為陽性結(jié)果。5、結(jié)果解釋陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶。在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：尿液中的鹽酸克倫特羅濃度在閾值（3μg/ml）以上。陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)。陰性結(jié)果表明：尿液中的鹽酸克倫特羅濃度在閾值（3μg/ml）以下。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，提示測試失敗或試紙已失效。注意：測試區(qū)（T）內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陰性結(jié)果。4.3注意事項1、檢測卡在室溫20-25℃下一次性使用。2、脂肪會導致假陽性結(jié)果，取樣時棄去肉眼可見的脂肪部分。3、檢測時避免陽光直射。4、出現(xiàn)陽性結(jié)果，應(yīng)用本卡復(fù)查并作陽性對照實驗。必要時送實驗室進一步定量。5、附帶的瘦肉精陽性對照液為5μg/ml。6、儲存及有效期：2-10℃冷藏儲存，有效期為12個月。5.快速檢測的優(yōu)點與傳統(tǒng)的檢測相比，傳統(tǒng)的瘦肉精檢測，大都在實驗室中，需要在現(xiàn)場提取檢測樣品然后在實驗室里面利用儀器進行化驗分析用，使用不方便且成本極高，工作效率低下，還要專業(yè)儀器操作人員。目前檢測瘦肉精的方法有以下幾種，膠體金快檢卡是最快速簡單的一種方法，適用于多種流通領(lǐng)域和各種實驗室。各種檢測方法的對比：檢測方法費用步驟檢出限時間特點液質(zhì)聯(lián)用/氣質(zhì)聯(lián)用很高復(fù)雜高，尿液、肉類大約0.5ppb(μg/kg)，飼料10ppb長一般由檢測機構(gòu)實施，作為確證方法高效液相色譜法高復(fù)雜高，尿液、肉類大約0.5ppb(μg/kg)長一般由檢測機構(gòu)實施，作為確證方法酶聯(lián)免疫試劑盒便宜較復(fù)雜高，尿液0.1ppb(μg/kg肉類0.3-0.5ppb，飼料5ppb較長用于大量篩查膠體金快檢卡便宜簡單略低，尿液約3ppb；肉類1ppb；飼料5-10ppb短用于大量篩查，但需要確證方法6.瘦肉精檢測發(fā)展趨勢根據(jù)目前國內(nèi)外檢測CLB各種方法的進展情況以及CLB濫用及殘留的嚴峻性，建立一種克服上述各種檢鍘方法缺點的簡便、快速、精確、準確、可實現(xiàn)現(xiàn)場檢測的測定CLB技術(shù)勢在必行。滴金免疫技術(shù)(DIGFA)和生物傳感器技術(shù)(Biosensor，BS)是兩種快速、高教的殘留物分析技術(shù)．如能研究、開發(fā)運用到檢測生物樣品中CLB的殘留可能會產(chǎn)生理想的效果和大的飛躍。1、滴金免疫技術(shù)(DIGFA)DIGFA的關(guān)鍵技術(shù)是抗CLB單克隆抗體的制備、膠體金的制備、膠體金標記的單克隆抗體的制備、免疫滲濾裝置(如，硝酸纖維抗體包被膜)的制備。后三種關(guān)鍵技術(shù)已比較成熟，最關(guān)鍵的是制備出特異性強、純度高的抗CLB的單克隆抗體。目前，DlGFA已成功地運用于早孕診斷、弓形蟲病診斷、血吸蟲病診斷等，靈敏度及準確度均很理想。如果研制成檢測CLB的滴金免疫試紙條或滴金免疫測試盒可實現(xiàn)CLB的高效現(xiàn)場檢測。所以運用D1GFA技術(shù)將是一種較理想、很有發(fā)展前景及研究價值的檢測CLB技術(shù)。2、生物傳感器技術(shù)(BS)生物傳感器技術(shù)也是。邁向21世紀的醫(yī)學檢驗技術(shù)”之一。生物傳感器是近30年來發(fā)展起來的一項新型、高效的分析技術(shù)。所謂生物傳感器即由生物活性物質(zhì)作為敏感元件，即生物識別系統(tǒng)(感受器)，再配上適當?shù)膿Q能器及輸出顯示裝置所構(gòu)成的分析工具。其原理為分子識別部分與被識別物質(zhì)相接觸，可發(fā)生化學變化、熱變化、光變化以及直接誘導電信號，而后利用電學測量方法進行檢測和控制及顯示輸出。生物傳感器的種類包括離子選擇電極傳感器、氣敏電極傳感器、酶免疫傳感器、壓電晶體傳感器等，可測定離子、氣體、底物、酶、抗生素、維生素等物質(zhì)。最早研制成功的是l967年updike等研制的葡萄糖傳感器，它是一種酶傳感器。原理是將肛n葡萄糖氧化酶(GOD)固定在聚丙烯酰胺凝膠固定化膜上，以氧電極作為換能器，將此驥固定在氧電極上．D一葡萄糖在GOD的作用下消耗氧生成葡萄糖內(nèi)酯和水，在此過程中產(chǎn)生化學變化，用氧電極將此化學變化轉(zhuǎn)化為電信號并顯示輸出葡萄糖的含量。國外已有用生物傳感器技術(shù)檢測CLB殘留的資料報道，如PlzzarieIloAndrea應(yīng)用分子印跡聚合膜(MIP)作為分子識別系統(tǒng)，選擇固相基質(zhì)復(fù)合電報(SBMCE)作為換能器，微分脈沖電壓電流表(DPV)作為輸出顯示裝置檢測牛肝臟中CLB殘留，結(jié)果此方法特異性強，與其他同類物質(zhì)交叉反應(yīng)低，缺點是反應(yīng)時間較長，靈敏度還有待于提高”】。酶標免疫傳感技術(shù)是酶標免疫技術(shù)與光電分析技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一種電化學免疫分析技術(shù)，是利用生物傳感器進行免疫測定的一種實驗手段。其特點是利用酶的化學放大作用，通過測定抗原或抗體標記酶作為示蹤酶，將酶與底物反應(yīng)的化學變化用換能器轉(zhuǎn)化為電信號，從而輸出待測物質(zhì)的含量。目前酶免疫傳感器的靈敏度最高可達0.01μg／g，而且可在幾分鐘之內(nèi)完成檢測全過程，比EUSA法更靈敏、更簡便和快速，而且可用于各種抗原物質(zhì)的測定，尤其對體液中的藥物和激素的檢測更為適用。所以，如果研制成功測定CLB殘留的酶免疫傳感器，則可使CLB的監(jiān)測及檢測工作變得簡單、高效。所以研制和開發(fā)測定CLB殘留的生物傳感器是完成CLB殘留監(jiān)控規(guī)劃的一項理想的方案。綜上所述．由于已經(jīng)禁止在動物生產(chǎn)中應(yīng)用CLB，所以在許多國家并沒有確定動物性產(chǎn)品中CLB的最大殘留限量(MRL)。荷蘭規(guī)定牛、馬肝臟中CLB的MRL值為0.5μg／g，英國規(guī)定可食性組織中MRL值為0.1μg/g，有人建議應(yīng)定為0.08μg／g。上述四種檢測CLB的方法中，HPLC，GC·Ms、CE的最低檢測限都在0.5μg／g以上，而且檢測過程煩瑣、檢測時間長，需貴重儀器、難于操作，不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測；EIA法最低檢測限可達O.05μg/g．靈敏度和精確度都符合標準，但假陽性率高而且也不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測。如果研制成功檢測CLB殘留的D1GFA試紙條和酶免疫傳感器，則可克服上述方法的缺點，并且從定性和定量兩個方面實現(xiàn)CLB殘留的現(xiàn)場監(jiān)測。所以，研制高效、方便、迅速的DIGFA試紙條和酶免疫傳感器是檢測CLB殘留的較為理想的方法和途徑，值得探人探討和開發(fā)。致謝在本論文設(shè)計過程中，感謝胡老師給了我鍛煉的機會。從選題指導到細節(jié)修改，胡老師都給予了我認真的指導，提出了很多寶貴的意見與建議；在論文的寫作工程中，胡老師經(jīng)常詢問論文進程，并為我解答疑問。因此，我的論文里不僅凝聚著自己對知識的總結(jié)，還包含著胡老師的認真負責、兢兢業(yè)業(yè)求真態(tài)度。胡老師治學態(tài)度嚴謹、對待工作精益求精；他視野開闊，思維敏銳，給了我深深的啟迪。同時胡老師還在思想、生活上給予我啟發(fā)，在此向胡老師致以崇高的敬意和誠摯的謝意。感謝黃河水院環(huán)境與化學工程系的老師們，特別是胡曉冰老師、王振偉老師、陳希良老師、王愷老師武琳琳老師以及其他對我?guī)椭^的任課老師。他們一絲不茍的作風，嚴謹求實的態(tài)度，一直是我工作、學習的榜樣；他們循循善誘的教導和不拘一格的思路，不僅授我以知識，而且教我做人，給予我無盡的啟迪。對我專業(yè)思維及專業(yè)技能的教育培養(yǎng)，以及在學業(yè)上的細心指導，為我工作和繼續(xù)學習打下了良好的基礎(chǔ)。在此，向諸位老師致以我最崇高的敬意和最真誠的謝意！感謝陪我一起愉快度過三年大學生活的生物技術(shù)及應(yīng)用1101班的各位同學們，正是由于你們對我的學習、生活和工作的關(guān)心、幫助和支持，我才能克服一個一個的困難和疑惑，直至本文的順利完成。是你們給予我不少的幫助。三年來我們真心相待，和睦共處，不是兄弟姐妹勝似兄弟姐妹！正是一路上有你們，我的求學生涯才不會感到孤獨，馬上就要各奔前程了，希望你們有好的前途。感謝我的爸爸媽媽，辛辛苦苦的把我培養(yǎng)這么大，對于父母的養(yǎng)育之情無法用言語表達。在以后的生活中我會更加的關(guān)心體貼我的爸爸媽媽，成為一個讓你們值得驕傲的孩子！感謝所有授我專業(yè)的老師，課堂上傳授給了我們各種專業(yè)知識，正是有了這些知識的學習，我才能寫出現(xiàn)在的總結(jié)。感恩之余，誠懇地請各位老師對我的論文多加批評指正，使我及時完善論文的不足之處。謹以此致謝，最后，我要向百忙之中抽時間對本文進行審閱的各位老師表示衷心的感謝。文獻1.邱建琴.左曉磊畜產(chǎn)品中萊克多巴胺殘留的快速檢測[期刊論文]-畜牧獸醫(yī)科技信息[J]2010(5)2.李前勇.王忠翊.張德志.王慶華犬實驗性"瘦肉精"中毒的臨床病理學觀察-上海畜牧獸醫(yī)通訊[J]2009(4)3.劉維紅動物產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅殘留危害及檢測方法-安徽農(nóng)學通報[J]2009(23)4.張群.劉燁固相萃取-反相高效液相色譜法測定鮮肉中鹽酸克倫特羅殘留量的條件優(yōu)化-現(xiàn)代食品科技[J]2009(3)5.徐青萍.易水生內(nèi)標加入順序?qū)y定豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的影響-中國衛(wèi)生檢驗雜志2008(2)6.嵇大圣.熊漢國.付自政.孫明導納米技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用研究進展-中國食品添加劑2008(1)7.徐少平鹽酸克倫特羅(CL)(瘦肉精)的危害與檢測方法-吉林農(nóng)業(yè)科技學院學報[J]2006(4)8.謝芳豬肉質(zhì)量安全研究進展-肉類研究[J]2006(11)9.左曉磊.張峰.褚素巧.劉海生應(yīng)用ELISA對畜產(chǎn)品瘦肉精殘留的快速篩選-河北農(nóng)業(yè)科學[J]2006(3)10.時瑾鹽酸克倫特羅時間分辨熒光免疫分析方法的建立[D]碩士200611.張清安.范學輝動物性食品中殘留鹽酸克倫特羅的研究進展-食品科學[J]2005(5)12.劉平年HPLC-DAD法測定豬肝中的鹽酸克倫特羅-化學分析計量[J]2005(5)13.賀利民.蘇貽娟.張嘉慧氣相色譜-質(zhì)譜法測定動物組織及飼料中克倫特羅[J]-質(zhì)譜學報2005(3)14.高燕紅.梁春穗.魯琳食物中毒樣品中克倫特羅檢測方法的比較[J]-中國食品衛(wèi)生雜志2005(2)15.陶燕飛.劉登才.馬素英.袁宗輝.范盛先.王玉蓮.陳冬梅衍生固相萃取GC-MS檢測?？墒辰M織中克倫特羅的殘留量[J]-分析測試學報2004(z1)16.賀鐵明.胥傳來.王武康鹽酸克倫特羅免疫原的合成與鑒定[J]-中國糧油學報2004(2)17.張清安.范學輝動物性食品中鹽酸克倫特羅(瘦肉精)殘留危害及其檢測方法研究進展[J]-食品與發(fā)酵工業(yè)2004(9)18.胥傳來.王武康.賀鐵明食品中殘留鹽酸克倫特羅免疫原的合成與鑒定[J]-食品科學2004(12)19.陳存社.呂會田.劉玉峰飼料中鹽酸克倫特羅的氣相色譜-質(zhì)譜法測定分析[J]-飼料工業(yè)2004(5)20.劉見免疫金試紙法快速檢測鹽酸克倫特羅[J]-上海交通大學學報（農(nóng)業(yè)科學版）2004(4)21.甘賓賓.蔣世瓊畜禽產(chǎn)品中鹽酸克侖特羅的檢測[J]-生命科學儀器2004(2)22.裴艷濤.孫繼國.林密.蘇小庚動物性產(chǎn)品中"瘦肉精"殘留的檢測方法研究進展[J]-動物科學與動物醫(yī)學2004(1)23.王海花.黃素珍鹽酸克倫特羅的危害性與檢測[J]-動物醫(yī)學進展2003(4)

請刪除以下內(nèi)容，O(∩_∩)O謝謝?。?！TheoriginoftaxationintheUnitedStatescanbetracedtothetimewhenthecolonistswereheavilytaxedbyGreatBritainoneverythingfromteatolegalandbusinessdocumentsthatwererequiredbytheStampTax.Thecolonists'disdainforthistaxationwithoutrepresentation(so-calledbecausethecolonieshadnovoiceintheestablishmentofthetaxes)gaverisetorevoltssuchastheBostonTeaParty.However,evenaftertheRevolutionaryWarandtheadoptionoftheU.S.Constitution,themainsourceofrevenueforthenewlycreatedstateswasmoneyreceivedfromcustomsandexcisetaxesonitemssuchascarriages,sugar,whiskey,andsnuff.IncometaxfirstappearedintheUnitedStatesin1862,duringtheCivilWar.Atthattimeonlyaboutonepercentofthepopulationwasrequiredtopaythetax.Aflat-rateincometaxwasimposedin1867.Theincometaxwasrepealedinitsentiretyin1872.IncometaxwasarallyingpointforthePopulistpartyin1892,andhadenoughsupporttwoyearslaterthatCongresspassedtheIncomeTaxActof1894.Thetaxatthattimewastwopercentonindividualincomesinexcessof$4,000,whichmeantthatitreachedonlythewealthiestmembersofthepopulation.TheSupremeCourtstruckdownthetax,holdingthatitviolatedtheconstitutionalrequirementthatdirecttaxesbeapportionedamongthestatesbypopulation(pollockv.farmers'loan&trust,158U.S.601,15S.Ct.912,39L.Ed.1108[1895]).Aftermanyyearsofdebateandcompromise,thesixteenthamendmenttotheConstitutionwasratifiedin1913,providingCongresswiththepowertolayandcollecttaxesonincomewithoutapportionmentamongthestates.Theobjectivesoftheincometaxweretheequitabledistributionofthetaxburdenandtheraisingofrevenue.Since1913theU.S.incometaxsystemhasbecomeverycomplex.In1913theincometaxlawswerecontainedineighteenpagesoflegislation;theexplanationofthetaxreformactof1986wasmorethanthirteenhundredpageslong(Pub.L.99-514,Oct.22,1986,100Stat.2085).CommerceClearingHouse,apublisheroftaxinformation,releasedaversionoftheInternalRevenueCodeintheearly1990sthatwasfourtimesthickerthanitsversionin1953.Changestothetaxlawsoftenreflectthetimes.Theflattaxof1913waslaterreplacedwithagraduatedtax.AftertheUnitedStatesenteredworldwari,theWarRevenueActof1917imposedamaximumtaxrateforindividualsof67percent,comparedwitharateof13percentin1916.In1924SecretaryoftheTreasuryAndrewW.Mellon,speakingtoCongressaboutthehighleveloftaxation,stated,Thepresentsystemisafailure.Itwasanemergencymeasure,adoptedunderthepressureofwarnecessityandnottobecounteduponasapermanentpartofourrevenuestructure….Thehighratesputpressureontaxpayerstoreducetheirtaxableincome,tendtodestroyindividualinitiativeandenterprise,andseriouslyimpedethedevelopmentofproductivebusiness….Wayswillalwaysbefoundtoavoidtaxessodestructiveintheirnature,andtheonlywaytosavethesituationistoputthetaxesonareasonablebasisthatwillpermitbusinesstogoonandindustrytodevelop.Consequently,theRevenueActof1924reducedthemaximumindividualtaxrateto43percent(RevenueActs,June2,1924,ch.234,43Stat.253).In1926theratewasfurtherreducedto25percent.TheRevenueActof1932wasthefirsttaxlawpassedduringtheGreatDepression(RevenueActs,June6,1932,ch.209,47Stat.169).Itincreasedtheindividualmaximumratefrom25to63percent,andreducedpersonalexemptionsfrom$1,500to$1,000forsinglepersons,andfrom$3,500to$2,500formarriedcouples.Thenationalindustrialrecoveryactof1933(NIRA),partofPresidentfranklind.roosevelt'snewdeal,imposedafivepercentexcisetaxondividendreceipts,imposedacapitalstocktaxandanexcessprofitstax,andsuspendedalldeductionsforlosses(June16,1933,ch.90,48Stat.195).Therepealin1933oftheeighteenthamendment,whichhadprohibitedthemanufactureandsaleofalcohol,broughtinanestimated$90millioninnewliquortaxesin1934.Thesocialsecurityactof1935providedforawagetax,halftobepaidbytheemployeeandhalfbytheemployer,toestablishafederalretirementfund(OldAgePensionAct,Aug.14,1935,ch.531,49Stat.620).TheWealthTaxAct,alsoknownastheRevenueActof1935,increasedthemaximumtaxrateto79percent,theRevenueActsof1940and1941increaseditto81percent,theRevenueActof1942raiseditto88percent,andtheIndividualIncomeTaxActof1944raisedtheindividualmaximumrateto94percent.Thepost-WorldWarIIRevenueActof1945reducedtheindividualmaximumtaxfrom94percentto91percent.TheRevenueActof1950,duringthekoreanwar,reduceditto84.4percent,butitwasraisedthenextyearto92percent(RevenueActof1950,Sept.23,1950,ch.994,Stat.906).Itremainedatthisleveluntil1964,whenitwasreducedto70percent.TheRevenueActof1954revisedtheInternalRevenueCodeof1939,makingmajorchangesthatwerebeneficialtothetaxpayer,includingprovidingforchildcaredeductions(laterchangedtocredits),anincreaseinthecharitablecontributionlimit,ataxcreditagainsttaxableretirementincome,employeedeductionsforbusinessexpenses,andliberalizeddepreciationdeductions.From1954to1962,theInternalRevenueCodewasamendedby183separateacts.In1974theemployeeretirementincomesecurityact(ERISA)createdprotectionsforemployeeswhoseemployerspromisedspecifiedpensionsorotherretirementcontributions(Pub.L.No.93-406,Sept.2,1974,88Stat.829).ERISArequiredthattobetaxdeductible,theemployer'splancontributionmustmeetcertainminimumstandardsastoemployeeparticipationandvestingandemployerfunding.ERISAalsoapprovedtheuseofindividualretirementaccounts(IRAs)toencouragetax-deferredretirementsavingsbyindividuals.TheEconomicRecoveryTaxActof1981(ERTA)providedthelargesttaxcutuptothattime,reducingthemaximumindividualratefrom70percentto50percent(Pub.L.No.97-34,Aug.13,1981,95Stat.172).ThemostsweepingtaxchangessinceworldwariiwereenactedintheTaxReformActof1986.ThisbillwassignedintolawbyPresidentronaldreaganandwasdesignedtoequalizethetaxtreatmentofvariousassets,eliminatetaxshelters,andlowermarginalrates.Conservativeswantedtheacttoprovideasingle,lowtaxratethatcouldbeappliedtoeveryone.Althoughthissingle,flatratewasnotincludedinthefinalbill,taxrateswerereducedto15percentonthefirst$17,850ofincomeforsinglesand$29,750formarriedcouples,andsetat28to33percentonremainingincome.Manydeductionswererepealed,suchasadeductionavailabletotwo-incomemarriedcouplesthathadbeenusedtoavoidthe"marriagepenalty"(agreatertaxliabilityincurredwhentwopersonsfiledtheirincometaxreturnasamarriedcoupleratherthanasindividuals).Althoughthepersonalexemptionexclusionwasincreased,anexemptionforelderlyandblindpersonswhoitemizedeductionswasrepealed.Inaddition,aspecialcapitalgainsratewasrepealed,aswasaninvestmenttaxcreditthathadbeenintroducedin1962byPresidentjohnf.kennedy.TheOmnibusBudgetReconciliationActof1993,thefirstbudgetandtaxactenactedduringtheClintonadministration,wasvigorouslydebated,andpassedwithonlytheminimumnumberofnecessaryvotes.Thislawprovidedforincometaxratesof15,28,31,36,and39.6percentonvaryinglevelsofincomeandforthetaxationofsocialsecurityincomeifthetaxpayerreceivesotherincomeoveracertainlevel.In2001CongressenactedamajorincometaxcutattheurgingofPresidentgeorgew.bush.Overthecourseof11yearsthelawreducesmarginalincometaxratesacrossalllevelsofincome.The36percentratewillbeloweredto33percent,the31percentrateto28percent,the28percentrateto25percent.Inaddition,anewbottom10percentratewascreated.Sincetheearly1980s,aflat-ratetaxsystemratherthanthegraduatedbracketedmethodhasbeenproposed.(Thegraduatedbracketedmethodistheonethathasbeenusedsincegraduatedtaxeswereintroduced:thepercentageoftaxdiffersbasedontheamountoftaxableincome.)Theflat-ratesystemwouldimposeonerate,suchas20percent,onallincomeandwouldeliminatespecialdeductions,credits,andexclusions.Despitefirmsupportbysome,theflat-ratetaxhasnotbeenadoptedintheUnitedStates.Regardlessofthechangesmadebylegislatorssince1913,thebasicformulaforcomputingtheamountoftaxowedhasremainedbasicallythesame.Todeterminetheamountofincometaxowed,certaindeductionsaretakenfromanindividual'sgrossincometoarriveatanadjustedgrossincome,fromwhichadditionaldeductionsaretakentoarriveatthetaxableincome.Oncetheamountoftaxableincomehasbeendetermined,taxratechartsdeterminetheexactamountoftaxowed.Iftheamountoftaxowedislessthantheamountalreadypaidthroughtaxprepaymentorthewithholdingoftaxesfrompaychecks,thetaxpayerisentitledtoarefundfromtheIRS.Iftheamountoftaxowedismorethanwhathasalreadybeenpaid,thetaxpayermustpaythedifferencetotheIRS.CalculatingthegrossincomeofrestaurantemployeeswhoseincomeispartiallyderivedfromgratuitiesleftbycustomershasledtodisputeswiththeIRSandemployersoverhowmuchtheyshouldcontributeinfederalinsurancecontributionact(fica)taxes.Althoughcustomerspaythesetipsdirectlytoemployees,federallawdeemsthetipstohavebeenwagespaidbytheemployerforFICAtaxpurposes.Employersareimputedtohavepaidlargesumsofmoneytheyneverhandledandforwhichtheynowayofascertainingtheexactamount.TheSupremeCourt,in

UnitedStatesv.FiorD'Italia,536U.S.238,122S.Ct.2117,153L.Ed.2d280(2002),upheldtheIRS"aggregatemethod"ofreportingtipincome.InsteadofrequiringtheIRStomakeindividualdeterminationsofunreportedtipsforeachemployeewhencalculatingFICAtax,theCourtheldthattheIRScouldmakeemployersreporttheirgrosssalesonamonthlystatementtohelpdeterminetipincome.Employeesalsomustreporttheirtipincomemonthlyonaform.TheIRSthenusesthesetwopiecesofinformationtocalculatewhattheemployerneedstocontributeinFICAtax.基于C8051F單片機直流電動機反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計與研究基于單片機的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機的通用控制模塊的研究基于單片機實現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟停自校正（STR）調(diào)節(jié)器單片機控制的二級倒立擺系統(tǒng)的研究基于增強型51系列單片機的TCP/IP協(xié)議棧的實現(xiàn)基于單片機的蓄電池自動監(jiān)測系統(tǒng)基于32位嵌入式單片機系統(tǒng)的圖像采集與處理技術(shù)的研究基于單片機的作物營養(yǎng)診斷專家系統(tǒng)的研究基于單片機的交流伺服電機運動控制系統(tǒng)研究與開發(fā)基于單片機的泵管內(nèi)壁硬度測試儀的研制基于單片機的自動找