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文檔簡介

TailGenDNABuffer15Buffer15Buffer13Buffer15Buffer1525ProteinaseKStorage1.25SpinColumn本試劑盒適用于從新鮮或冷凍的小鼠或大鼠鼠尾中提取高純度的總DNA。該試劑盒提供的方法簡單易行,純化過程無需苯酚或氯仿抽提,可獲得最大為0b的DNA0尾樣本,優(yōu)化的緩沖體系使裂解鼠尾后產(chǎn)生的DNA高效結(jié)合到硅基質(zhì)吸附柱上,而其他污染物可流過膜;PCR和其他酶促反應的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除,最后使用低鹽緩沖液或水洗脫,即可得到高純度的DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、、e、文庫構(gòu)建、enBlot、分子標記等下游實驗。向ProteinaseK中加入1.25mlProteinaseKStorageBuffer使其溶解,-20℃保存。配制好的ProteinaseK勿長時間室溫放置,避免反復凍融,以免影響其活性。RNaseA(100mg/ml),RNaseA本試劑盒并未提供,如需要可單獨向本公司訂心管(自備)中。加入180μlBufferGTT,振蕩混勻。 注意:1)如果孵育和渦旋震蕩后仍然有膠狀物質(zhì),必要時過夜消化或再加入20μlProteinaseK消2)如需去除RNA,在上述步驟完成后加入4μl100mg/ml的RNaseA溶液(貨號:CW0601),加入200μlBufferGL,渦旋震蕩,充分混勻。加入200μl無水乙醇將步驟5中所得溶液全部加入到已裝入收集管(CollectionTube)的吸附柱(SpinColumnDM)中,若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。10,000rpm(~11,500 注意:1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感,可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)

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