a淀粉酶高產(chǎn)菌株篩選實驗

II平板中，每個板接8～10株，培育1-2天后，選擇4-5株高產(chǎn)菌株保藏備份并分別進(jìn)行搖瓶培育，進(jìn)行酶活測定.五、酶活測定方法（1）DNS法篩選出高酶活菌株。標(biāo)本本實驗設(shè)定40℃時在5min內(nèi)水解淀粉釋放1mg麥芽糖所需的酶量為1個酶活力單位（U）。計算酶活力的公式為：酶活力單位=C酶×V酶×n。式中C酶為酶液中麥芽糖的濃度;V酶為提取酶液的總體積；n為酶液的稀釋倍數(shù)。利用麥芽糖梯度標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用SPSS12.0統(tǒng)計軟件包計算回歸方程，求出相關(guān)系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤注：DNS法測還原糖-DNS—二硝基水楊酸還原糖發(fā)生HYPERLINK”/wiki/氧化還原反應(yīng)"氧化還原反應(yīng)，生成3—氨基—5-硝基水楊酸，該產(chǎn)物在煮沸條件下顯棕紅色，且在肯定濃度范圍內(nèi)顏色深淺與還原糖含量成比例關(guān)系的原理,用比色法測定還原糖含量的。因其顯色的深淺只與糖類游離出還原基團的數(shù)量有關(guān)，而對還原糖的種類沒有選擇性，故DNS方法適合用在多糖（如纖維素、HYPERLINK”/wiki/半纖維素"半纖維素和HYPERLINK”http：///wiki/淀粉”淀粉等)水解產(chǎn)生的多種還原糖體系中。DNS法測還原糖-DNS試劑的制備將6。3克DNS和262ml2mol/L氫氧化鈉，加到500ml含有182克HYPERLINK”/wiki/酒石酸鉀鈉”酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉,攪拌溶解，冷卻后加水定容到1000ml，即制成3，5-二硝基水楊酸HYPERLINK”http：///wiki/試劑”試劑，貯于棕色瓶中備用。DNS法測還原糖—葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（1mg/ml）0、0.2、0。4、0。6、0。8、1.0ml于25ml試管中，分別精準(zhǔn)加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min，流水冷卻，用水補足到15ml刻度。在540nm波長下測定http：///yp/product-list-56.html"水浴鍋2．恒溫振搖儀三、實驗試劑1.5%戊二醛2。甲殼素3.碘原液：稱取碘1.1g.碘化鉀2。2g,置于小HYPERLINK”/yp/product-list—912。html”燒杯中,加10ml蒸餾水使之溶解，然后轉(zhuǎn)入HYPERLINK”http：///yp/product—list—947.html"容量瓶中。再加少量的HYPERLINK”http：///yp/product-list-67.html”蒸餾水洗滌燒杯數(shù)次,洗滌液均轉(zhuǎn)入HYPERLINK”http：///yp/product-list—947。html"容量瓶中，最后定容至50ml。搖均后放于棕色吸管取1ml的標(biāo)準(zhǔn)終點色溶液，加至白瓷板的空穴內(nèi)，作為終點參照的標(biāo)準(zhǔn).2。固定前總酶活力測定：取20ml2%的可溶淀粉液與5mLpH6的磷酸氫二鈉——檸檬酸緩沖液，加入一支大水浴5分鐘。然后加入前面制備的酶液0.5ml。搖勻后，立即用秒表記錄時間。此后,每經(jīng)一段時間，用HYPERLINK”http：///yp/product-list-963。html”吸管吸出0。2ml反應(yīng)液，加入預(yù)先盛入稀碘液的白瓷板中。當(dāng)穴內(nèi)顏色反應(yīng)由紫色逐漸變?yōu)榧t棕色并與標(biāo)準(zhǔn)色相同時，即為反應(yīng)終點，記錄反應(yīng)到達(dá)終點時的時間。3.固定化酶活力測定：取20ml2％的可溶淀粉液與5mLpH6的磷酸氫二鈉-—檸檬酸緩沖液，加入一支大試管中。將試管置于60℃水浴5分鐘。然后加入前面制備的固定化酶。搖勻后，立即用秒表記錄時間。此后，不斷振搖，每經(jīng)一段時間，用吸管吸出0.2ml反應(yīng)液，加入預(yù)先盛入稀碘液的白瓷板中。當(dāng)穴內(nèi)顏色反應(yīng)由紫色逐漸變?yōu)榧t棕色并與標(biāo)準(zhǔn)色相同時,即為反應(yīng)終點，記錄反應(yīng)到達(dá)終點時的時間。4.酶活力計算：以60℃、pH6的條件下，每小時水解1g淀粉的酶量為一個活力單位。固定前原酶活力單位=60/T×20×2%×n/0.5固定后的酶活力單位=60/T×20×2％×n/10T:反應(yīng)到終點時的時間(分)n:酶粉稀釋的倍數(shù)5.固定化后酶活力