食品微生物快速檢測(cè) 金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)《食品安全快速檢測(cè)技術(shù)》

金黃色葡萄球菌介紹一金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法二金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)三

目錄

介紹金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)也稱“金葡菌”，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌代表，為一種常見的食源性致病微生物。該菌最適宜生長溫度為37℃，pH為7.4，耐高鹽，可在鹽濃度接近10%的環(huán)境中生長。金黃色葡萄球菌常寄生于人和動(dòng)物的皮膚、鼻腔、咽喉、腸胃、癰、化膿瘡口中，空氣、污水等環(huán)境中也無處不在。

介紹金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生多種致病性物質(zhì)，如腸毒素及凝固酶等。金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問題，據(jù)美國疾病預(yù)防控制中心報(bào)告，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒僅次于大腸埃希菌，居第2位，占細(xì)菌性食物中毒的33％，加拿大的發(fā)生率更高，占細(xì)菌性食物中毒的45％。

限量標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌

我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多，國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)于2013年發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》(GB29921-2013)，在國標(biāo)中制定了金黃色葡萄球菌的限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定熟肉制品、熟制水產(chǎn)品、熟制糧食制品等8大類食品中，同批次采集5份樣品，每份樣品中的金黃色葡萄球菌濃度均不得超出1000CFU/g，僅允許其中1份樣品在100~1000CFU/g之間。

檢測(cè)方法金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法目前，金葡菌的檢測(cè)方法主要有傳統(tǒng)生化鑒定方法、免疫學(xué)、分子生物學(xué)快速檢測(cè)方法等。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡單，穩(wěn)定性強(qiáng)，成本低，是目前最常用的鑒定方法。

方法金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法免疫學(xué)檢測(cè)方法主要是基于免疫學(xué)理論研究，其是通過設(shè)計(jì)的抗原、抗體和免疫細(xì)胞，檢測(cè)抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的，從而達(dá)到檢測(cè)目的一種實(shí)驗(yàn)方法。該技術(shù)方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等

方法金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法

方法金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）技術(shù)，核酸探針技術(shù)，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等技術(shù)。

方法金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法試劑盒法：試劑盒法通常將十多種，甚至幾十種培養(yǎng)基或成分集中在特定微型裝置內(nèi)，通過觀察微生物的生長和代謝過程的某些產(chǎn)物或現(xiàn)象，對(duì)試驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行分析，將傳統(tǒng)試驗(yàn)中多次試驗(yàn)通過一次完成，縮短了檢測(cè)時(shí)間。此法可大大縮短測(cè)試時(shí)間，在24h內(nèi)得出結(jié)果，甚至某些可縮短至4h內(nèi)。目前，用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的成品試劑盒有API、MIS等

測(cè)試片的原理金黃色葡萄球菌測(cè)試片本試驗(yàn)利用金黃色葡萄球菌自身生化特性優(yōu)化培養(yǎng)基，通過代謝而產(chǎn)生特異性酶或其他特異性物質(zhì)，在培養(yǎng)基中添加相應(yīng)的顯色底物，使菌落呈現(xiàn)特定的顏色實(shí)現(xiàn)分離和鑒別。通過無紡布、冷凝膠、塑料薄膜等作為培養(yǎng)基的載體，將以上材料組裝成金黃色葡萄球菌的測(cè)試片，縮短了檢測(cè)時(shí)間、降低了勞動(dòng)強(qiáng)度、節(jié)約成本。

檢測(cè)原理金黃色葡萄球菌測(cè)試片金黃色葡萄球菌測(cè)試片（FilmplateTMStaphylococcusaureusBT206)含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，一步培養(yǎng)15~24h就可確認(rèn)是否有病原菌的存在，大大地簡化了檢測(cè)程序。金黃色葡萄球菌測(cè)試片

適用范圍金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)本產(chǎn)品適用于各類生、熟食制品，飲料，糕點(diǎn)類，調(diào)味品，乳制品等的快速檢測(cè)。

樣品處理金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.0~8.0。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，每次換一支吸管。

接種一般食品選2~3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，將金黃色葡萄球菌測(cè)試片（BT206)置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右，使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)稀釋度接種兩片。做一片空白陰性對(duì)照。金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

培養(yǎng)將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h。金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

培養(yǎng)后測(cè)試片現(xiàn)象測(cè)試片上紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。

出現(xiàn)陽性菌落的樣本，最好用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

結(jié)果判讀（1）選擇菌落數(shù)在20~200個(gè)之間的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)。（2）若兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均在20~200之間，則取其平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升（或每克）樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。（3）如果所有稀釋度的測(cè)試片上的菌落數(shù)都小于20,則計(jì)數(shù)稀釋度最低的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之；如果所有稀釋度的測(cè)試片上均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

結(jié)果判讀

（4）如果所有稀釋度的菌落數(shù)都大于200，計(jì)數(shù)最高稀釋度的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于200的測(cè)試片時(shí)，也可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個(gè)方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以20(濾紙區(qū)面積為20cm2)，即為測(cè)試片上估算的菌落數(shù)。報(bào)告單位以CFU/mL(或CFU/g)表示。金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)