禽雞抗蠕蟲藥臨床有效性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則概述

禽（雞）抗蠕蟲藥臨床有效性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則一\概述（-）定義與目的本指導(dǎo)原則適用于禽（雞）蠕蟲感染的抗蠕蟲藥物臨床有效性評價。禽（雞）用抗蠕蟲藥II期臨床有效性試驗?zāi)康氖橇私獠煌瑒┝康氖茉囁幬飳Π袆游锏目谷湎x效果，確定受試藥物的防治作用和劑量。禽（雞）用抗蠕蟲藥ni期臨床有效性試驗?zāi)康氖沁M(jìn)一步驗證受試藥物對目標(biāo)適應(yīng)證的防治作用和給藥方案，確定受試藥物對目標(biāo)適應(yīng)證的臨床效果，觀察受試藥物的不良反應(yīng)和制定防治措施。對偏離本指導(dǎo)原則的試驗研究，申請人應(yīng)進(jìn)行解釋說明。（二）一般要求抗蠕蟲藥擬用的所有寄生蟲的每種適應(yīng)證均需進(jìn)行臨床有效性試驗。在n期臨床有效性試驗中，由于自身對照試驗法在禽（雞）中不可靠，故只接受基于寄生蟲成蟲和/或幼蟲計數(shù)的空白對照試驗法。在ni期臨床有效性試驗中，推薦使用蟲卵計數(shù)和蟲種鑒別的方法對藥效進(jìn)行評價。在n期臨床有效性試驗中，一般采用人工誘發(fā)感染病例，條件不允許時也可選擇自然感染病例。幼蟲階段的研究只能使用人工誘發(fā)感染動物。對于罕見寄生蟲蟲種，也只能采取人工誘發(fā)感染來進(jìn)行試驗。人工誘發(fā)感染一般更傾向于選擇最新野外分離的蠕蟲株進(jìn)行誘導(dǎo)感染，因為最新野外分離株更能準(zhǔn)確地反映寄生蟲的流行和對藥物敏感性的實際狀況。對于罕見的蠕蟲蟲種可以使用實驗室保存的蠕蟲株進(jìn)行誘導(dǎo)感染?？梢酝瑫r用幾種確定的寄生蟲蟲種進(jìn)行混合人工誘發(fā)混合感染。在in期臨床有效性試驗中，應(yīng)采用自然感染病例。二、試驗設(shè)計（一）試驗動物.動物選擇標(biāo)準(zhǔn)試驗前制定試驗動物的選擇標(biāo)準(zhǔn)。從有試驗動物資質(zhì)證明的飼養(yǎng)單位購買。如果沒有資質(zhì)證明，動物應(yīng)來源清楚，飼養(yǎng)規(guī)范。避免使用近期用過相關(guān)驅(qū)蟲藥物（距離上次所用抗蠕蟲藥物的6個半衰期內(nèi)未再次用過抗蠕蟲藥物）的動物、

患過傳染病或可能過敏或中毒的動物。以成年動物為主，若藥物擬用于幼齡動物,則需要選擇幼齡動物。.自然感染病例選用符合受試藥物目標(biāo)適應(yīng)證的自然感染病例，應(yīng)與受試藥物申請應(yīng)用的動物種屬相同，品種不限，報告中需注明動物品種、體重、性別和年齡。蠕蟲感染大致種類可以通過檢測糞便中的蟲卵形態(tài)特征來確定；或者從試驗雞群中剖檢5-8只雞，分離其體內(nèi)的蠕蟲，進(jìn)行種屬鑒定。蠕蟲感染種類的確定需要提供相應(yīng)的寄生蟲照片。.人工誘發(fā)感染病例應(yīng)選擇臨床健康動物，且在與受試藥物靶動物的年齡、性別以及種屬中具有代表性的蠕蟲陰性禽（雞）。通常情況下，應(yīng)挑選對蠕蟲感染敏感的幼禽用于試驗。避免應(yīng)激（例如飲食不良）因素造成寄生蟲感染；禽舍條件應(yīng)能防止意外感染（即工人誘發(fā)感染以外的其它蠕蟲感染）。人工誘發(fā)感染試驗中推薦使用的寄生蟲種類與數(shù)量：表1所示為不同分離種的蟲卵/似囊尾螃的推薦感染蟲量。推薦使用能夠達(dá)到充分感染所需的最低數(shù)量感染性階段蟲體。表1,禽（雞）抗蠕蟲藥臨床有效性研究中達(dá)到充分感染所需的蟲卵/幼蟲/似囊尾坳數(shù)量范圍寄生蟲種屬 蟲卵/似囊尾蝸數(shù)量范圍（條）雞蛔蟲Asci打力4 200~500100?300200~30050~100200~600鴿毛細(xì)線蟲Capillariaohsignata雞異刺線蟲Heterakisgallinarum有輪賴?yán){蟲Raillietinacesticillus100?300200~30050~100200~600在最終報告中，應(yīng)記錄人工誘發(fā)感染所用的蟲卵/幼蟲/似囊尾蜘的最終數(shù)量和照片，說明試驗中用于人工誘發(fā)感染的寄生蟲的歷史背景。應(yīng)說明所用的每一種實驗室分離株的特性，如來源、保種方法、藥物敏感性、培養(yǎng)方法、傳代次數(shù)和對宿主的感染速度等。對于野外分離株，同樣需要說明來源、日期、分離地點、對已有驅(qū)蠕蟲藥的暴露情況和保存方法等信息。.動物數(shù)量盡管試驗動物的數(shù)量需要根據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理來計算獲得，但是為了達(dá)到協(xié)調(diào)一致的目的，II期臨床有效性試驗應(yīng)確保每項適應(yīng)證每組不少于（含）6只（nN6）,III期臨床有效性試驗應(yīng)確保每項適應(yīng)證每組不少于（含）30只（n>30）o.確定禽（雞）充分感染的蟲量因為評價試驗用蠕蟲的屬、種、蟲株存在著差異，且不同試驗株也可能具有不同的易感性和病原特性，所以充分感染的定義不能用統(tǒng)一的公式表示。因此,在制定研究方案時，尤其是在統(tǒng)計學(xué)、寄生蟲學(xué)、每個對照動物的感染水平與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性、每種感染的對照動物數(shù)量時，應(yīng)對充分感染進(jìn)行定義。試驗方案中，必須根據(jù)所試驗地區(qū)的相關(guān)寄生蟲病流行情況、流行病史以及現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)，確定本研究中能產(chǎn)生寄生蟲充分感染的感染數(shù)量，并在試驗前應(yīng)對感染動物進(jìn)行檢查。試驗動物的感染水平及其分布應(yīng)符合有效性標(biāo)準(zhǔn)，滿足統(tǒng)計和生物置信限的要求。也可采用多重感染，但每種蠕蟲均需達(dá)到最低感染水平。在對照組所有動物均感染的情況下，計算對照組載蟲量幾何平均值的95%置信下限值。如果該值大于對照組載蟲量幾何平均值的10%,則認(rèn)為是充分感染。當(dāng)對照組中存在未感染動物（計數(shù)=0）時，可用中位值替代幾何平均值，并根據(jù)對照組載蟲量中位值計算95%置信限。關(guān)于蠕蟲充分感染的最小數(shù)量，根據(jù)統(tǒng)計學(xué)、歷史數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)綜述等確定并在最終報告中提交。用于支持標(biāo)簽中所標(biāo)示的某項適應(yīng)證成立時，禽（雞）充分感染的成蟲數(shù)量，可因蟲種不同而不同。一般來講，雞充分感染雞蛔蟲成蟲的平均數(shù)量為20條，充分感染雞異刺線蟲、鴿毛細(xì)線蟲、有輪賴?yán){蟲的平均數(shù)量可以降低。結(jié)合試驗動物的病史、寄生蟲學(xué)檢查結(jié)果以及統(tǒng)計標(biāo)準(zhǔn)，所有試驗禽（雞）應(yīng)感染過足量的寄生蟲。.試驗動物管理試驗動物的動物設(shè)施、飼養(yǎng)及護(hù)理需要嚴(yán)格遵照動物福利的要求來進(jìn)行，包括按照試驗場的免疫程序進(jìn)行疫苗免疫等，并在最終報告中記錄相關(guān)信息。建議試驗動物在抵達(dá)試驗點后進(jìn)行最少10天的適應(yīng)期。試驗過程中，應(yīng)因地提供充足的飼養(yǎng)空間、飼料和飲水。試驗期間，需要每天定時觀察試驗動物，及時發(fā)現(xiàn)藥物相關(guān)的不良反應(yīng)。每個試驗組的每只動物應(yīng)當(dāng)加以標(biāo)記，療效評價各項指標(biāo)按每只動物進(jìn)行測定，并在最終的報告中標(biāo)明。.病例淘汰標(biāo)準(zhǔn)未按推薦療程給藥的動物；因伴發(fā)其他疾病或需要聯(lián)合用藥，或中斷試驗的動物，均應(yīng)予以淘汰。（-）試驗藥物.受試藥物受試藥物應(yīng)與擬上市的制劑完全一致，有完整的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有合乎規(guī)定格式的說明書。受試藥物應(yīng)來源于同一批號，由申報單位自行研制并在GMP驗收合格的車間生產(chǎn)的樣品，并提供中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或農(nóng)業(yè)農(nóng)村部認(rèn)定的其他獸藥檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。.對照藥物對照藥物應(yīng)當(dāng)是已經(jīng)在我國批準(zhǔn)上市，與受試藥物作用相似、適應(yīng)證相同的藥物。由申報單位提供，并提供中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或農(nóng)業(yè)農(nóng)村部認(rèn)定的其他獸藥檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗合格報告。（三）給藥方案應(yīng)在預(yù)試驗或相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上選擇有效劑量的劑量范圍，并提供劑量選擇依據(jù)。按照受試藥物擬在臨床推薦的給藥方案給藥，包括給藥方法、給藥劑量、多次給藥的給藥間隔時間和療程等。對照藥物應(yīng)嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的說明書給藥。對于混飼給藥的，需要進(jìn)行適口性/采食量研究。加藥后的飲水和或混藥后的飼料均應(yīng)采樣檢測，檢測后驗證樣品中的藥物濃度。應(yīng)記錄試驗中每只試驗禽（雞）所消耗的藥物量，以確定試驗治療劑量是否符合標(biāo)簽所推薦的治療劑量。（四）試驗周期對于人工感染成蟲的試驗，給藥通常不能早于每種蠕蟲的潛在（隱）期（prepatentperiod）,一般在感染后28天。在給藥前，推薦至少使用6只哨兵動物對寄生蟲種類進(jìn)行鑒別和定量。對于人工感染第四期幼蟲的試驗，針對大多數(shù)蟲種，宜在感染后7天給藥；針對雞蛔蟲和雞異刺線蟲，應(yīng)在感染后16天給藥。對于自然感染病例，根據(jù)蠕蟲的生活周期及藥物針對的寄生蟲生活史階段，確定抗蠕蟲藥物的給藥時間和試驗周期。（五）試驗分組試驗動物應(yīng)隨機分組。根據(jù)試驗禽（雞）的體重、性別、年齡和/或暴露于寄生蟲的情況進(jìn)行隨機分組，有助于減少系統(tǒng)誤差。也可以通過糞便中蟲卵計數(shù)對試驗動物進(jìn)行隨機分組。各試驗組的禽（雞）在體重、年齡、品種、性別和背景上相同。每組試驗動物的年齡、體型大小、體重范圍、性別等應(yīng)盡量一致。.II期臨床有效性試驗（1）選用人工誘發(fā)感染病例試驗要求分成以下六組：不感染不給藥組、空白對照組（感染不給藥）、受試藥物推薦劑量加倍組、受試藥物推薦劑量組、受試藥物推薦劑量減半組、藥物對照組。（2）選用自然感染病例試驗要求分成以下五組：空白對照組（不給藥）、受試藥物推薦劑量加倍組、受試藥物推薦劑量減半組、受試藥物推薦劑量組、藥物對照組。.m期臨床有效性試驗選用自然感染病例，一般試驗要求分成以下三組：空白對照組（不給藥）、受試藥物組、藥物對照組。若無批準(zhǔn)的相同適應(yīng)證的藥物，則不需要藥物對照組。（六）觀察指標(biāo)詳細(xì)觀察并記錄試驗開始前、試驗開始后、給藥過程中和停藥后各個階段受試動物的生理狀態(tài)、臨床癥狀，以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、消失和轉(zhuǎn)歸情況；并按照試驗設(shè)計，檢測必要的血液常規(guī)指標(biāo)和生化指標(biāo)；檢測與抗蠕蟲效果有關(guān)的指標(biāo)，并盡量使用定量指標(biāo)來評估藥效。.臨床檢查：觀察飲水情況、采食情況等，觀察給藥后臨床癥狀的消失和轉(zhuǎn)歸情況。.糞便蠕蟲成蟲和蟲卵檢查：在試驗前后分別檢查每只動物糞便中排出的蠕蟲數(shù)量、每克糞便中蟲卵的數(shù)量（EPG）等，計算蟲卵減少率，提供蟲卵照片。.體內(nèi)成蟲和幼蟲的檢查：對n期臨床、25%m期臨床的試驗動物，應(yīng)根據(jù)蠕蟲感染特點，對寄生的組織或臟器在給藥后10天內(nèi)進(jìn)行剖檢，觀察體內(nèi)蟲體感染情況，提供蟲體照片和蟲種鑒定照片。.病理剖檢：應(yīng)對II期臨床、25%m期臨床和死亡的試驗動物進(jìn)行病理剖檢,并進(jìn)行相關(guān)的組織病理學(xué)檢查，并提供剖檢與組織病理學(xué)觀察的照片，以確定藥物的毒副作用以及死亡與藥物之間是否存在一定關(guān)系。in期臨床有效性試驗，應(yīng)保留臨床觀察結(jié)果、生產(chǎn)性能指標(biāo)和死亡記錄，并與購買的飼養(yǎng)單位的歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。（七）統(tǒng)計分析應(yīng)在數(shù)據(jù)分析前的方案設(shè)計階段確定所采用的統(tǒng)計分析類型，如參數(shù)統(tǒng)計或非參數(shù)統(tǒng)計。選擇合適的統(tǒng)計分析程序，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。將受試藥物組間、受試藥物組與對照組（包括空白對照組、藥物對照組或感染不給藥對照組）進(jìn)行顯著性檢驗，確定受試藥物的治療效果及其劑量。（八）結(jié)果評價治療組和空白對照組的寄生蟲計數(shù)結(jié)果需要在統(tǒng)計學(xué)具有顯著性差異（p<0.05）。臨床有效性可采用一些反映治療效果的寄生蟲參數(shù)進(jìn)行評價，包括糞便中蟲卵計數(shù)和蟲體計數(shù)以及體內(nèi)蟲體計數(shù)。無論采用幾何平均值還是算術(shù)平均值，均能表示有效性的差異。由于蟲體數(shù)或蟲卵數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換比未經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換的數(shù)值更易趨于正態(tài)分布，因此幾何平均值比算術(shù)平均值更適用于集中趨勢的評估，以減少誤判。本指導(dǎo)原則要求采用幾何平均值計算有效百分率。數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為幾何平均數(shù)后，計算藥物的臨床有效性，必須達(dá)到或者高于90%,方可判定該產(chǎn)品有效。幾何平均值是基于對照組所有數(shù)據(jù)進(jìn)行計算的，如對照組中計數(shù)為零的數(shù)據(jù)可刪除，但相應(yīng)給藥組計數(shù)為零的數(shù)據(jù)則不允許刪除。藥物的臨床有效性=［（空白對照組蟲體數(shù)或蟲卵數(shù)的GM）-（給藥組動物蟲體數(shù)或蟲卵數(shù)的GM）］引空白對照組蟲體數(shù)或蟲卵數(shù)的GM］（GM:幾何平均值）X100%。三、術(shù)語充分感染（adequateinfection）：在試驗方案中定義的自然感染或人工感染水平，當(dāng)比較給藥動物和空白對照動物的寄生蟲參數(shù)（如寄生蟲數(shù)量）時，用以評價藥物的治療有效性。適應(yīng)證（claim）：標(biāo)簽上所列的對某種驅(qū)蠕蟲藥敏感（90%或更高的有效性）的寄生蟲種屬（成蟲和/或幼蟲）。空白對照試驗（controlledtest）：采用多個試驗組進(jìn)行藥物有效性研究，1個試驗動物空白對照組（不給藥），至少1個試驗動物給藥組。各給藥組和空白對照組的試驗動物均為寄生蟲充分感染的動物；給藥后經(jīng)一定的時間，將試驗動物剖檢，對寄生蟲進(jìn)行鑒定和計數(shù)。藥物的有效性按下式計算：寄生蟲或特定生命期的驅(qū)蟲率％=100［（空白對照組蟲體數(shù)的GM）-（給藥組動物蟲體數(shù)的GM）］日空白對照組蟲體數(shù)的GM］（6乂=幾何平均值）。當(dāng)樣本數(shù)量相同時通常采用此計算方法。自身對照試驗（criticaltest）：試驗動物給藥后排出的寄生蟲蟲體數(shù)，加上尸檢時腸道內(nèi)蟲體數(shù)作為給藥期間動物體內(nèi)寄生蟲的總數(shù)。如有效性試驗按下式計算：各試驗動物的有效性％=［排出的蟲體數(shù)］引（排出的蟲體數(shù)）+（殘存的蟲體數(shù)）］o有效性（effectiveness）：標(biāo)簽上生產(chǎn)商聲稱的、已有數(shù)據(jù)支持的有效程度，