醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：實(shí)驗(yàn)二 免疫沉淀反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)二免疫沉淀反應(yīng)

沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在一定條件下出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，稱為沉淀反應(yīng)(precipitation)。單向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散免疫電泳可溶性抗原+相應(yīng)抗體→肉眼可見的沉淀凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)抗原性質(zhì)顆粒性抗原/可溶性抗原載體顆粒可溶性抗原反應(yīng)時(shí)間幾分鐘至十幾分鐘數(shù)小時(shí)至數(shù)天反應(yīng)產(chǎn)物凝集塊沉淀物沉淀反應(yīng)原理：將可溶性抗原與相應(yīng)分別放入凝膠（如瓊脂、瓊脂糖等）內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)散，形成濃度梯度，在抗原抗體濃度比例恰當(dāng)?shù)奈恢?，形成肉眼可見的免疫沉淀線、沉淀環(huán)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)分類：①單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(singlegeldiffusiontest)

②雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(doublegeldiffusiontest）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

將抗體與瓊脂混合制成瓊脂板，然后適當(dāng)位置打孔，加入待測(cè)抗原，孔內(nèi)抗原向四周擴(kuò)散，在與抗體比例合適處，形成肉眼可見的沉淀環(huán)。

沉淀環(huán)的直徑與抗原濃度呈正比。單向免疫擴(kuò)散(singleimmunodiffusion)

雙向擴(kuò)散試驗(yàn)將抗原和抗體分別加入瓊脂板相對(duì)應(yīng)的小孔中，二者相互擴(kuò)散、相遇，在比例合適處形成可見的沉淀線。(doubleimmunodiffusion)

對(duì)流免疫電泳當(dāng)抗原和抗體在瓊脂介質(zhì)中電泳時(shí)，由于抗體的PI比較高，在適當(dāng)?shù)膒H值下，抗體帶正電荷而抗原帶負(fù)電荷，故在電場(chǎng)中抗體向陰極方向移動(dòng)而抗原向陽(yáng)極運(yùn)動(dòng)，直至相遇后形成沉淀線

原理與雙向免疫擴(kuò)散相同，但方法簡(jiǎn)便、快速。免疫電泳

將待檢血清標(biāo)本進(jìn)行瓊脂凝膠電泳，使樣品中各抗原成分分為不同區(qū)帶，然后按沿電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)抗血清，與已分成區(qū)帶的各種抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在相應(yīng)位置形成沉淀弧

是一種對(duì)復(fù)雜樣本中抗原種類進(jìn)行分析的方法。

該法常用于分析血清蛋白種類。11(immunoelectrophoresis)3.

免疫比濁(immunonephelometry)

一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。用濁度計(jì)測(cè)量反應(yīng)體系的濁度，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)濁度推算樣品中抗原含量。

Immunology本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容--雙向免疫擴(kuò)散將抗原和抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向四周擴(kuò)散，在相遇處形成沉淀線。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：瓊脂糖雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)原理：含有電解質(zhì)的瓊脂中，抗原抗體分子互相彌漫擴(kuò)散，當(dāng)比例合適時(shí)出現(xiàn)弧形沉淀帶，可用于分析抗原成分，以及鑒定抗體的純度等。主要儀器：微波爐、冰箱、溫箱、電子天平、水浴鍋。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法：1.1-1.5%的鹽水瓊脂加熱溶化。2.取一潔凈載玻片，水平放置，將已溶化的瓊脂3-4ml傾注于玻片上制成厚薄均勻瓊脂糖凝膠板。（均勻、平整、無(wú)氣泡、布滿整個(gè)玻片。）3.瓊脂凝固后打梅花形孔，孔間距4-5mm。4.中心孔內(nèi)加抗IgG血清（約10ul）。5.1，3孔加入稀釋人IgG

（約10ul）。6.2，4孔加入待測(cè)Ag（約10ul），3，6孔中加生理鹽水（約10ul）。7.瓊脂凝膠板放濕盒中，置室溫（20℃以上或37℃溫箱中）24h后，取出觀察結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果多在24h以內(nèi)出現(xiàn)，若48h未出現(xiàn)沉淀線可判為陰性結(jié)果。操作步驟：鹽水瓊脂融解、制板打孔加樣Ab孵育24h觀察結(jié)果1234561、2：陽(yáng)性對(duì)照（人IgG10ul）3、4：待測(cè)標(biāo)本（10ul)5、6：陰性對(duì)照（10ul)注意事項(xiàng)：載玻片要潔凈，邊緣無(wú)破損。溶化后瓊脂的溫度要適宜（一般60℃）。膠不可過(guò)薄，最少0.5cm；制板一氣呵成，不留氣泡。小心打孔，勿使瓊脂層脫離玻片，或底層開裂；打孔要一次打到底，挑膠時(shí)要細(xì)心，最好一次性挑出。加樣加滿即可，勿使液體溢出。為使沉淀線保持清晰度，可將已形成的沉淀線瓊脂板放在4℃冰箱。21結(jié)果描述與分析可用手繪或拍照?qǐng)D示結(jié)果分別描述陽(yáng)性、陰性和待測(cè)孔與中央孔的反應(yīng)現(xiàn)象根據(jù)對(duì)照與待測(cè)的反應(yīng)現(xiàn)象，判斷實(shí)驗(yàn)成敗分析實(shí)驗(yàn)成敗原因結(jié)論根據(jù)結(jié)果及分析，得出檢測(cè)結(jié)論雙向免疫擴(kuò)散--人IgG檢測(cè)1、4