食品中病原微生物檢驗(yàn)技術(shù)-食品中沙門氏菌檢驗(yàn)技術(shù)

食品微生物與檢驗(yàn)沙門氏菌概述目錄Contents沙門氏菌食物中毒1沙門氏菌的從屬與分類2沙門氏菌的致病作用3沙門氏菌檢測(cè)流程434請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明一、沙門氏菌食物中毒

沙門氏菌是腸道桿菌科中最重要的病原菌，是引起人類和動(dòng)物發(fā)病、食物中毒的主要病原菌。

為G-短桿菌，無(wú)芽孢也無(wú)莢膜，周生鞭毛，兼性厭氧，最適溫度37℃。請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明一、沙門氏菌食物中毒引起食物中毒最常見的沙門氏菌：鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌易引起沙門氏菌中毒的食品：肉、蛋、乳類食品，低水分活度食品。中毒原因：①食用病畜禽的肉制品食品；②病畜禽、帶菌人和動(dòng)物使食品污染。ba腸桿菌科沙門氏菌屬，下設(shè)6個(gè)亞屬，常見的種有雞沙門氏菌和鼠傷寒沙門菌等；形態(tài)與染色：革蘭氏陰性，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，多數(shù)有鞭毛，有動(dòng)力，短小桿菌；培養(yǎng)特征：需氧或兼性厭氧，最適溫度37℃，pH7.2-7.4;營(yíng)養(yǎng)要求：不高，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。二、沙門氏菌的從屬與分類三、沙門氏菌的致病作用人類沙門氏菌感染的臨床類型：①傷寒型：由傷寒、副傷寒沙門氏菌引起；②敗血癥型：常由豬霍亂、鼠傷寒和腸炎沙門菌等引起。食品微生物與檢驗(yàn)沙門氏菌生化篩選和血清學(xué)鑒定目錄Contents生物化學(xué)篩選1血清學(xué)鑒定234請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明沙門氏菌檢測(cè)流程前增菌選擇性增菌平板分離生化篩選血清學(xué)鑒定34請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明沙門氏菌檢測(cè)流程目的是排除大多數(shù)非沙門氏菌。初步生化試驗(yàn)要做三糖鐵試驗(yàn)，主要是測(cè)定細(xì)菌對(duì)葡萄糖、乳糖和蔗糖的分解、產(chǎn)氣和產(chǎn)硫化氫情況。但只有斜面產(chǎn)酸并同時(shí)硫化氫陰性的菌株可以排除，因此需進(jìn)一步做幾項(xiàng)最低限度的生化試驗(yàn)。若硫化氫+、靛基質(zhì)-、尿素-、氰化鉀-、賴氨酸+，可判定為沙門氏菌屬。一、生物化學(xué)篩選原理：三糖利用（乳糖、蔗糖和葡萄糖）接種方法：穿刺劃線結(jié)果：產(chǎn)酸/堿，產(chǎn)氣，硫化氫一、生物化學(xué)篩選1.三糖鐵試驗(yàn)（TSI）a如果產(chǎn)生黑色沉淀，是分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和鐵鹽起反應(yīng)，生成黑色FeS沉淀。b發(fā)酵乳糖的細(xì)菌，產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。c葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。一、生物化學(xué)篩選1.三糖鐵試驗(yàn)（TSI）舉例：沙門氏菌：分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多產(chǎn)硫化氫，多數(shù)產(chǎn)氣。大腸桿菌：分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多能分解乳糖，不產(chǎn)硫化氫。志賀氏菌：分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫。一、生物化學(xué)篩選1.三糖鐵試驗(yàn)（TSI）目的：通過不同細(xì)菌對(duì)氨基酸的羰基分解能力來鑒別細(xì)菌。原理：細(xì)菌產(chǎn)生的脫羧酶可脫掉氨基酸的羧基，生成胺和CO2，使培養(yǎng)基的pH升高，指示劑顯色。結(jié)果：檢測(cè)培養(yǎng)基由黃色變?yōu)樽仙珵殛?yáng)性，黃色為陰性。對(duì)照（無(wú)氨基酸）為黃色。一、生物化學(xué)篩選2.賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^檢測(cè)尿素酶來進(jìn)行腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。原理：細(xì)菌產(chǎn)生的尿素酶分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基pH值升高，用酚紅指示劑測(cè)出。結(jié)果：培養(yǎng)基變紅為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮?。一、生物化學(xué)篩選3.尿素酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。結(jié)果：液面層為紅色為陽(yáng)性。一、生物化學(xué)篩選4.靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)原理：在半固體上穿刺接種后，細(xì)菌因具有鞭毛擴(kuò)散生長(zhǎng)。結(jié)果：陽(yáng)性——擴(kuò)散生長(zhǎng)；

陰性——沿穿刺線生長(zhǎng)注意：培養(yǎng)基溫度、劇烈運(yùn)動(dòng)可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。一、生物化學(xué)篩選5.動(dòng)力試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的本質(zhì)就是利用生化試驗(yàn)的方法，檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種物質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，常用于細(xì)菌的鑒別。使用生化鑒定試劑盒和全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)一、生物化學(xué)篩選5.動(dòng)力試驗(yàn)原理：相應(yīng)的抗原(細(xì)菌)與抗體(免疫球蛋白)在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在微生物檢驗(yàn)中，常用血清學(xué)反應(yīng)來鑒定分離到的細(xì)菌，以最終確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果?？贵w攻擊抗原（居中者）抗原—抗體結(jié)合物二、血清學(xué)鑒定ACBO抗原（菌體）：O1…O67共58種，一種菌可能含1種或多種O-Ag，含相同O-Ag的歸為一個(gè)血清群。有A、B、…Z、O57~63，O65~67，多為A~F群，故先要用此多價(jià)血清初篩。H抗原（鞭毛）：特異相（a~z，z1~z55），非特異性相（1，2…l，w），多為雙相菌，可發(fā)生相位變異。Vi抗原（表面）：可阻止O抗原與抗體反應(yīng)，加熱可消除。二、血清學(xué)鑒定食品微生物與檢驗(yàn)沙門氏菌增菌與分離目錄Contents前增菌2選擇性增菌3選擇性平板分離4沙門氏菌檢測(cè)流程134請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明一、沙門氏菌檢測(cè)流程前增菌選擇性增菌平板分離生化篩選血清學(xué)鑒定34請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明一、沙門氏菌檢測(cè)流程34請(qǐng)輸入您的文字對(duì)實(shí)際情況進(jìn)行說明二、前增菌LOREM使樣品在非選擇性培養(yǎng)基中增菌，，即不加任何抑菌劑的緩沖蛋白胨水（BPW）中増菌，使在食品加工過程中受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。一般食品增菌時(shí)間為8h-18h，時(shí)間過長(zhǎng)雜菌也會(huì)增多，干擾鑒定結(jié)果。增菌后的檢樣或未經(jīng)加工的食品檢樣需在含選擇性抑制劑的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。此培養(yǎng)基使沙門氏菌得以持續(xù)增殖，而大多數(shù)其他細(xì)菌受到抑制。直接進(jìn)行選擇性增菌的食品應(yīng)制成1:1稀釋液，因?yàn)槭称分械纳抽T氏菌較少，1:1稀釋液可提高檢出率。注意事項(xiàng)三、選擇性增菌亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液亞硒酸鹽抑制G+和非沙門氏菌的大多數(shù)G-腸道菌。尤其適合傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌。四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液膽鹽抑制G+；四硫磺酸鈉抑制腸道共生菌。適合其他沙門氏菌的生長(zhǎng)。采用SC+TBT雙增菌液以防漏檢三、選擇性增菌進(jìn)一步采用鑒別培養(yǎng)基，抑制非沙門氏菌的生長(zhǎng)，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識(shí)別。四、選擇性平板分離指示系統(tǒng)：葡萄糖+H2S指示效果及可疑菌落特點(diǎn)：黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。四、選擇性平板分離1.亞硫酸鉍（BS）瓊脂指示系統(tǒng)：乳糖+H2S指示效果及可疑菌落特點(diǎn)：粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色