柴胡揮發(fā)油的提取及對內(nèi)毒素所致家兔體溫升高的作用

柴胡揮發(fā)油的提取及對內(nèi)毒素所致家兔體溫升高的作用

柴胡作為一種常見的中藥，用于感冒、冷熱、肝郁氣滯。它具有解暑、舒肝、提陽洞的功效。2010年版中國藥典規(guī)定柴胡為傘形科植物BupleuurmchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWild.的干燥根?，F(xiàn)代研究表明,柴胡主要活性成分為柴胡皂苷類和揮發(fā)油。柴胡揮發(fā)油常用于制作柴胡注射劑,用于治療感冒發(fā)熱等癥,有顯著療效。王智華等對柴胡注射劑中的有效成分進(jìn)行了氣相色譜分析,劉群等對柴胡揮發(fā)油中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析,但其化學(xué)成分中哪類成分或哪種成分是柴胡解熱作用的有效成分并未見報道。且柴胡注射液中的指標(biāo)性成分一直未明確,這給藥品的質(zhì)量控制帶來困難。為探索柴胡揮發(fā)油中起解熱作用的有效部位,作者進(jìn)行了實驗研究。1設(shè)備和材料1.1色譜柱及試劑GC-MS儀(7890AGC/6410MS型美國安捷倫公司);HP-5MS毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm);電子天平(N24120型瑞士奧豪斯);色譜柱(Φ1cm重慶化學(xué)試劑玻璃儀器公司);中草藥粉碎機(jī)(RT-08型北京鑫環(huán)亞科技有限公司);高壓滅菌儀(MLS-3750型日本三洋電器)。1.2高效液相色譜法乙醚、甲醇、石油醚、乙酸乙酯(分析純,重慶川東化工有限公司);乙醚(色譜醇,重慶川東化工有限公司);濃硫酸(重慶川東化工有限公司);吐溫80(藥用級,上海晶純實業(yè)有限公司);薄層色譜硅膠G(青島海洋化工有限公司);柱色譜硅膠(300~400目,青島海洋化工有限公司);北柴胡(購于重慶市儲奇門中藥材市場,按2010年版中國藥典柴胡的鑒定方法,經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教授劉新鑒定為柴胡BupleurumChineseDC.的干燥根);新西蘭大白兔[購于重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心合格證號:SCXK(渝)2007-0001];美國Sigma公司精制大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS);柴胡注射劑(自制)2方法和結(jié)果2.1柴胡提取物的提取、分離和鑒定2.1.1提取權(quán)限稱取柴胡干燥根,粉碎,過20目篩,蒸餾水浸泡過夜,水蒸氣蒸餾6h,分取揮發(fā)油,出油率約0.03%。2.1.2酯的制備取柱色譜硅膠,110℃活化1h,干法裝柱。采用梯度洗脫,按照石油醚:乙酸乙酯為1∶0、18∶1、15∶1、11∶1、7∶1、5∶1、0∶1,最后甲醇洗脫的比例依次洗脫,收集的組分用薄層色譜檢識,香草醛硫酸試液顯色,110℃烘至斑點清晰。合并相同組分,得5種不同組分(1~5號),用CO2氣體吹去溶劑。2.1.3gc/ms色譜條件色譜條件:色譜柱:HP-5MS柱(Crosslinkeddimethylpolysiloxane,30m×0.25mm×0.25μm);柱溫:50℃,以3.5℃·min-1升至270℃;載氣:N2,0.9mL·min-1;分流比:10∶1;進(jìn)樣口溫度250℃;溫度:270℃;進(jìn)樣量:1μL。質(zhì)譜條件:在相同色譜條件下,電離方式EI,離子源溫度300℃,電子能量70eV;采集方式:掃描,掃描質(zhì)量范圍m/z10~800;載氣為He。供試品處理:取柴胡揮發(fā)油,用乙醚稀釋;另取“2.1.2”項下分離所得組分1~5,分別用乙醚稀釋。結(jié)果:柴胡揮發(fā)油GC-MS總離子流圖及分析結(jié)果見圖1、表1,組分1~5揮發(fā)油GC-MS總離子流圖及分析結(jié)果分別見圖2~6和表2~6。2.2柴胡提取物分離后的解熱效果研究2.2.1柴胡注射液的制備參照柴胡注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-3297-98)制備。得柴胡全揮發(fā)油注射液和柴胡揮發(fā)油單組分注射液(1~5號)。2.2.2肌肉注射給予大鼠進(jìn)行急性毒性實驗新西蘭大白兔,體重在2~2.5kg。每天定時測量體溫3次,每次間隔10min,連續(xù)測3d;選取體溫波動在±0.2℃以內(nèi)的動物隨機(jī)分為7組,于實驗前一晚開始禁食。實驗當(dāng)天,肌肉注射內(nèi)毒素200ng·kg-1,1h后,測體溫。第1組肌肉注射2mL柴胡揮發(fā)油注射液·只-1,第2~6組分別肌肉注射2mL1~5號柴胡揮發(fā)油單組分注射液·只-1,第7組肌肉注射2mL生理鹽水·只-1,并分別測量給藥后1、2、3、4、5h的體溫。統(tǒng)計各組兔體溫與其相應(yīng)基礎(chǔ)體溫之差,結(jié)果見表7。表7顯示,給藥5h后溫度基本降至基礎(chǔ)體溫。柴胡全揮發(fā)油注射液及組分2注射液在給藥后2h使實驗動物體溫下降,組分2的體溫下降速度比全揮發(fā)油快。3結(jié)論以內(nèi)毒素致兔體溫升高為實驗?zāi)Ｐ?顯示柴胡揮發(fā)油中具解熱作用的主要部位在組分2。4使用中藥及中西藥柴胡是傳統(tǒng)常用中藥,關(guān)于其皂苷和揮發(fā)油的提取方法和鑒定方法的報道很多?，F(xiàn)代藥理學(xué)證明其揮發(fā)油有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用。關(guān)于柴胡揮發(fā)油中退熱成分的研究尚缺乏較深入的研究,柴胡注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂也缺少依據(jù)。明確有效成分和臨床應(yīng)用對應(yīng)關(guān)系,對指導(dǎo)柴胡現(xiàn)代臨床應(yīng)用中藥及中西藥結(jié)合應(yīng)用有很大幫助。多種微生物感染的發(fā)熱反應(yīng)都與細(xì)菌內(nèi)毒素有關(guān),新西蘭白兔對內(nèi)毒素的致熱性非常敏感,是各國藥典規(guī)范使用的熱原檢定標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物,采用內(nèi)毒素致兔體溫升高模型考察柴胡揮發(fā)油的退熱作用是比較合理的。以內(nèi)毒素致兔體溫升高為模型的藥理實驗結(jié)果顯示,柴胡揮發(fā)油的主要解熱物質(zhì)在組分2,組分2的主要成分為月桂醛(相對含量為39.37%)、γ-古蕓烯(相對含量為19.22%)和2,4-癸二烯醛(相對含量為12.96%),其余7種成分單個的含量在4%以下。因此,在此基礎(chǔ)上有必要進(jìn)一步研究上述化學(xué)物