革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)課件_第1頁
革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)課件_第2頁
革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)課件_第3頁
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革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)課件_第5頁
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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)二革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)要求堅(jiān)持課前預(yù)習(xí)不遲到,不早退,更不能無故缺課嚴(yán)格按照正確規(guī)范實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),作好記錄保持實(shí)驗(yàn)室整潔注意安全實(shí)事求是、獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程導(dǎo)入觀察上次實(shí)驗(yàn)課細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果菌落觀察:37℃孵育18~24h后觀察1.大小2.形狀3.表面(光滑?濕潤?)4.邊緣(整齊?)5.透明?6.顏色(色素?)手指皮膚細(xì)菌菌落形態(tài)教學(xué)目標(biāo):1.鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用2.學(xué)習(xí)細(xì)菌革蘭氏染色的原理和方法3.學(xué)會(huì)顯微鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)3.對(duì)人體微生物染色檢查,初步建立無菌操作的概念顯微鏡的使用油鏡頭的識(shí)別和重要參數(shù)油鏡的工作原理油鏡的使用方法和注意事項(xiàng)油鏡頭的識(shí)別和重要參數(shù)放大倍數(shù)數(shù)值口徑工作距離油鏡的工作原理使用油質(zhì)作為玻片與物鏡之間的介質(zhì)——油浸系可以增加顯微鏡的放大倍數(shù)可以增加事業(yè)的照明度可以增加顯微鏡的分辨率油鏡的使用方法和注意事項(xiàng)1.用低倍鏡對(duì)光。2.低倍鏡觀察(尋找觀察目標(biāo)),適當(dāng)縮小光圈。3.油鏡觀察,低倍鏡找到目標(biāo)后,物鏡轉(zhuǎn)成八字形,在載玻片上滴加一滴香柏油,直接轉(zhuǎn)至油鏡,調(diào)節(jié)細(xì)焦準(zhǔn)螺旋,使物象清晰,觀察記錄。最大光圈4.觀察完畢,上升鏡筒,轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器,使油鏡偏位,用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油跡,再取一張擦鏡紙滴加2~3滴酒精乙醚擦去鏡頭上殘留的香柏油,最后再用一張干凈擦鏡紙擦去殘留的酒精乙醚。5.將顯微鏡各部分還原,放回。革蘭氏染色——原理1).細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小,通透性降低,因此細(xì)菌保留初染時(shí)的顏色。革蘭氏染色——原理

G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì),而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低,故用乙醇脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì),增加了細(xì)胞壁的通透性,使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出,結(jié)果細(xì)菌就被脫色了,再經(jīng)復(fù)染后就倍染成了紅色。對(duì)比圖:革蘭氏染色——原理2).等電點(diǎn)不同G+菌的等電點(diǎn)低(pI2~3),G-菌等電點(diǎn)較高(pI4~5),在相同pH條件下,G+菌所帶的負(fù)電荷比G-菌多,與帶正電荷的結(jié)晶紫燃料結(jié)合較牢固且不易脫色。3).形成的復(fù)合物不同G+菌細(xì)胞內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽,可與結(jié)晶紫和碘牢固地結(jié)合成大分子復(fù)合物,不易被乙醇脫色;而G-菌細(xì)胞內(nèi)含極少量的核糖核酸鎂鹽,吸附染料量少,形成的復(fù)合物分子也較小,故易被乙醇脫色。實(shí)驗(yàn)材料1.標(biāo)本:培養(yǎng)18~24h的學(xué)生手指皮膚表面細(xì)菌;2.染色液和試劑:結(jié)晶紫,碘液,95%乙醇,稀釋石碳酸復(fù)紅,生理鹽水,香柏油,酒精乙醚;3.器材:載玻片,接種環(huán),酒精燈,顯微鏡,打火機(jī),擦鏡紙等。革蘭染色——方法與步驟1.制片:1).涂片:取一潔凈載玻片,按無菌操作方法,接種環(huán)滅菌后取生理鹽水1~2環(huán)于載玻片中央,接種環(huán)再次滅菌,冷卻后選取平板上單個(gè)菌落涂于生理鹽水,并用接種環(huán)混合均勻,制成薄涂片。2).干燥:涂片自然干燥或在酒精燈上方烘干,切忌緊靠火焰,以免標(biāo)本烤焦,損壞細(xì)菌結(jié)構(gòu),影響鏡檢。3).固定:手持玻片一端,讓菌膜朝上,通過火焰2~3次。(以不燙手為宜)。注意:操作過程中始終貫穿無菌操作觀念,要把生物安全放在心里。在新冠疫情的環(huán)境下,作為醫(yī)學(xué)生更應(yīng)該牢記生物安全。方法與步驟2.染色初染1min媒染1min脫色(結(jié)晶紫)水洗(碘液)水洗(95%乙醇)

30s~1min

水洗

自然干燥30s復(fù)染觀察水洗(稀釋石碳酸復(fù)紅)方法與步驟3.觀察

紫色:G+1)看顏色

紅色:G-

圓形:球菌

2)看形態(tài)

桿形:桿菌

弧形:弧菌結(jié)果:G+球菌/G+桿菌/G+弧菌;G-球菌/G-桿菌/G-弧菌。不偽造和編造結(jié)果,做人做事實(shí)事求是,學(xué)術(shù)誠信。革蘭氏陽性球菌革蘭氏陰性球菌霍亂弧菌副溶血性弧菌示教學(xué)生操作問題總結(jié)分析1.涂片過厚,導(dǎo)致結(jié)果不易觀察;2.干燥時(shí)注意標(biāo)本烤枯,不要忘記標(biāo)本固定;3.脫色時(shí)間是關(guān)鍵;4.菌齡不易太老,以18~24h為宜;5.學(xué)生提問,解答。實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名、班級(jí)和學(xué)號(hào)實(shí)驗(yàn)題目實(shí)驗(yàn)原理(略寫)實(shí)驗(yàn)操作(略寫)實(shí)驗(yàn)結(jié)果——畫圖——文字描述分析和討論

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