三角梅CHS基因的克隆及表達(dá)分析

三角梅CHSCHS摘要：三角梅是一種廣泛分布在熱帶、亞熱帶地區(qū)的常綠小喬木，具有艷麗的花朵和強(qiáng)烈的香氣，深受人們的喜愛?；ㄉ睾铣蛇^程是三角梅花彩色變化途徑中一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，花色素合成酶（CHS）色素生物合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶。本研究通過PCR技術(shù)從三角梅的花瓣RNA樣本中克隆獲得了CHS基因全長(zhǎng)cDNA序列，測(cè)序分析結(jié)果表明該基因全長(zhǎng)共包含1269bp，編421CHS基因編碼蛋白與其他植物CHS蛋白具有較高相似性。利用生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)顯示，該基因可能含有轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）、CpGCHS基因在花瓣、葉片和根中均有表達(dá)PCR結(jié)果表CHS基因在不同環(huán)境脅迫下的響應(yīng)情況，CHScDNA序列并分析三角梅（PlumeriarubraLinn.）是一種常綠小喬木，原產(chǎn)于熱帶、物合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶。目前對(duì)三角梅CHS基因的研究還較為有限，本研究旨在對(duì)三角梅CHS基因進(jìn)行克隆和表達(dá)分析，并探討其在三角梅MaterialsandRNADNaseI處理RNA樣本，將其轉(zhuǎn)化為cDNA為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。CHSPCR通過Blast檢索，從大麥全基因組序列中篩選出與三角梅CHS基因PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增條件：95°C預(yù)變性2min，95°Cdenaturation30s，55°Cannealing30s，72°Cextension30s35周期，72°Cextension10min。PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳BioEdit軟件進(jìn)行序列比對(duì)，同時(shí)進(jìn)行多序列比對(duì)，預(yù)測(cè)該基因可能含有TSS、CpG島、響應(yīng)元素等特定結(jié)構(gòu)和功能區(qū)域。SYBRPremixExTaq(Takara)7500PCR系統(tǒng)PCR實(shí)驗(yàn)，以β-actin作為內(nèi)部參照，分別檢測(cè)三角梅花瓣、葉片和根中CHS基因的表達(dá)量。低溫（4°C）、高鹽（200mMNaCl）和干旱（不加水）條件下培養(yǎng)，24h后收集樣本，用相同的方法檢測(cè)CHSCHS通過PCR技術(shù)，從三角梅的花瓣RNA樣本中克隆獲得CHS基因全長(zhǎng)cDNA序列，測(cè)序分析結(jié)果表明該基因全長(zhǎng)共包含1269bp，編碼421CHSCHS蛋白CHSTSS、CpG島、響應(yīng)元素等CHSCHS基因在花瓣、葉片和根中均