白藜蘆醇納米乳的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

白藜蘆醇納米乳的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

近年來(lái)，植物提取物的腫瘤作用引起了人們的廣泛關(guān)注。白藜蘆醇是一種植物抗毒素,具有廣泛的生物學(xué)活性,如抗氧化、保護(hù)肝臟、免疫調(diào)節(jié)等,隨后又發(fā)現(xiàn)其具有很強(qiáng)的抗腫瘤功效,且對(duì)正常的人體細(xì)胞無(wú)損傷,被認(rèn)為是最有潛力的天然化學(xué)防癌劑之一。但白藜蘆醇難溶于水,化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,易被氧化分解,制約了其廣泛應(yīng)用。納米乳是一種新型的藥物載體,對(duì)易氧化、水解的藥物能起到很好的保護(hù)作用,可提高藥效和生物利用度。本試驗(yàn)將白藜蘆醇制成一種O/W型納米乳,對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià),旨在開發(fā)一種使白藜蘆醇物理性質(zhì)更加穩(wěn)定、療效更顯著的新劑型。1材料和方法1.1丙酯ipp白藜蘆醇購(gòu)自陜西飛達(dá)科技有限公司;聚氧乙烯氫化蓖麻油(RH-40,德國(guó)BASF公司);蓖麻油聚氧乙烯醚(EL-40)、肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、棕櫚酸異丙酯(IPP)購(gòu)自杭州高綺香精公司;乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、丙二醇、1,3-丁二醇(均為分析純,西安化學(xué)試劑廠)亞甲基藍(lán)和蘇丹紅等均購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司;蒸餾水由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)室自制。BS224S電子天平(德國(guó)Satorius公司);TGL-16B型臺(tái)式高速離心機(jī)(湖南星科科學(xué)儀器有限公司);JEM-1230型透射電子顯微鏡(日本電子);Nicomp388/ZetaPALS激光粒度測(cè)定儀(ParticleSizingSystem,USA)。1.2方法1.2.1油包水型納米乳的制備以RH-40、EL-40為表面活性劑,無(wú)水乙醇、丙二醇、1,3-丁二醇為助表面活性劑,IPM、IPP、乙酸乙酯為油相,按9∶1~1∶9的比例改變表面活性劑和油的比例,配制9種混合液,再向9種混合液中加入含有白藜蘆醇的助表面活性劑,攪拌均勻,邊加蒸餾水邊攪拌,此時(shí)為油包水型納米乳,隨著蒸餾水量的增加,體系突然變黏稠,此時(shí)體系出現(xiàn)液晶態(tài),繼續(xù)滴加蒸餾水,當(dāng)體系變稀時(shí),此時(shí)產(chǎn)生的即是穩(wěn)定的無(wú)色透明納米乳,形成納米乳后可用蒸餾水無(wú)限稀釋。1.2.2納米乳中兩種染色劑的擴(kuò)散速度通過染色法鑒定該納米乳的類型。將水溶性的亞甲基藍(lán)和油溶性的蘇丹紅溶液分別滴加到納米乳中,觀察兩種染色劑在納米乳中的擴(kuò)散速度。如果亞甲基藍(lán)的擴(kuò)散速度快,則納米乳為水包油(O/W)型;如果蘇丹紅的擴(kuò)散速度快,則為油包水(W/O)型;兩者擴(kuò)散速度相同則為雙連續(xù)型。1.2.3磷集中物電鏡觀察取適量白藜蘆醇納米乳樣品,用蒸餾水稀釋10倍后,將銅網(wǎng)浸入其中,數(shù)分鐘后,取出,經(jīng)20g/L的磷鎢酸染色后,自然晾干,電鏡觀察。1.2.4白俄羅斯醇納米乳液的粒度分析取白藜蘆醇納米乳20mL,用蒸餾水稀釋5倍,激光粒度分析儀測(cè)定其粒徑分布。1.2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取白藜蘆醇(含量>98%)對(duì)照品5.0mg,置50mL容量瓶中,用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別吸取此溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL于10mL容量瓶中,加乙酸乙酯稀釋至刻度,搖勻,以乙酸乙酯為空白,在分光光度計(jì)上測(cè)定各自溶液在306nm波長(zhǎng)的吸收值,以A對(duì)濃度C作標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。白藜蘆醇含量的測(cè)定取1.0g樣品于1000mL容量瓶中,加蒸餾水稀釋定容至刻度,搖勻,306nm處測(cè)樣品液的吸光度(A0)。取1.0g空白納米乳于1000mL容量瓶中,加蒸餾水稀釋定容至刻度,搖勻,306nm處測(cè)樣品液的吸光度(A1),計(jì)算△A=A0-A1。1.2.6納米乳外觀測(cè)定熱穩(wěn)定性試驗(yàn)取納米乳適量,于相對(duì)濕度75%、溫度分別為-4℃、25℃、40℃、60℃條件下保存,分別于5、10d后取樣考察。取納米乳適量于離心試管中,15000r·min-1離心20min,觀察其外觀。恒溫加速試驗(yàn)分別取白藜蘆醇納米乳適量、白藜蘆醇原料藥(乙酸乙酯溶解),于相對(duì)濕度在75%、溫度分別為70℃條件下每隔2h取樣(n=5),測(cè)其含量。2結(jié)果與分析2.1表面活性劑和助表面活性劑的比例對(duì)納米乳的形成結(jié)果顯示,以RH-40為表面活性劑、乙醇為助表面活性劑、IPM為油相所制備的納米乳外觀透明、黏度小,性質(zhì)最穩(wěn)定。表面活性劑與油的比例為9∶1、8∶2,助表面活性劑與油的比例為2∶1、1∶1和1∶2時(shí)均能形成納米乳。其中表面活性劑與油的比例為9∶1、助表面活性劑與油的比例為2∶1時(shí),制備的納米乳粒徑最小、性質(zhì)最穩(wěn)定,白藜蘆醇量最高,故選用此配方。2.2白俄羅斯醇納米乳的鑒定亞甲基藍(lán)在納米乳中的擴(kuò)散速度明顯快于蘇丹紅,表明所制備的納米乳為水包油(O/W)型。2.3通過白俄羅斯醇納米乳的形態(tài)觀察白藜蘆醇納米乳在透射電子顯微鏡下呈球形,見圖1。2.4材料5nm白藜蘆醇納米乳平均粒徑為16.5±1.5nm。粒度分析表明>10nm粒子占98%,>20nm占30%,粒度分布在10~20nm占70%(圖2)。2.5白堊系黃農(nóng)民回收率測(cè)定結(jié)果`圖3表明,白藜蘆醇濃度C與其吸光度A呈線性關(guān)系,回歸方程為:A=0.1332C+0.0413(n=5),r=0.9990,測(cè)得白藜蘆醇的濃度為6.184±0.110mg/mL,平均回收率為95.8%。2.6納米乳的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,白藜蘆醇納米乳在低溫、高溫、離心條件下均未見分層現(xiàn)象,仍為無(wú)色、透明、穩(wěn)定、均一的體系,說(shuō)明制備的納米乳性質(zhì)穩(wěn)定。從圖4可看出,白藜蘆醇原料藥中白藜蘆醇的含量隨時(shí)間下降的速度明顯比白藜蘆醇納米乳中白藜蘆醇的含量下降的快,表明納米乳基質(zhì)對(duì)白藜蘆醇具有很好的保護(hù)作用。3討論3.1助表面活性劑的選用根據(jù)納米乳的形成機(jī)理,當(dāng)表面活性劑的親水親油平衡(HLB)值與油所需的HLB值相等或接近時(shí),容易形成物化性質(zhì)非常穩(wěn)定的納米乳。本研究根據(jù)此原理選用毒性相對(duì)較小,不易受電解質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽類及酸堿的影響且與其他表面活性劑的相容性好的非離子型表面活性劑。使用RH-40制備的納米乳中白藜蘆醇的性質(zhì)比EL-40中的更加穩(wěn)定,故選用RH-40。助表面活性劑是用來(lái)調(diào)節(jié)表面活性劑的HLB值,使表面活性劑與油更容易形成納米乳。本試驗(yàn)不僅用助表面活性劑來(lái)調(diào)節(jié)HLB值,而且是白藜蘆醇很好的溶劑,使用無(wú)水乙醇作表面活性劑比使用丙二醇、1,3-丁二醇使用量小,故選用無(wú)水乙醇。乙酸乙酯的氣味比較強(qiáng)烈,所以選用IPM作油相。3.2穩(wěn)定性增強(qiáng)試驗(yàn)非離子型表面活性劑形成的納米乳,溫度的改變會(huì)影響非離子型表面活性劑親水基的水化度,隨著溫度的升高,非離子型表面活性劑親水基的水化度降低,親水性下降,納米乳從水包油型向油包水型轉(zhuǎn)化,表面活性劑從體系中析出,納米乳表現(xiàn)出分層或者渾濁現(xiàn)象。本試驗(yàn)制備的復(fù)方納米乳在60℃時(shí)還能保持穩(wěn)定,是因?yàn)楸驹囼?yàn)加了助表面活性劑無(wú)水乙醇,它能夠調(diào)節(jié)RH-40的HLB值,使RH-40親水性增加,納米乳穩(wěn)定性增強(qiáng)。白藜蘆醇又稱芪三酚,化學(xué)名稱為3,4′,5-三羥基二苯乙烯,它是含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮類多酚化合物,具有很強(qiáng)的還原性,化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,易被氧化,70~80℃下加熱30min,有部分分解。本試驗(yàn)制備的納米乳基質(zhì)能夠使藥物物理性質(zhì)更加穩(wěn)定,其原因可能是由于藥物溶于分散相(油相),避免了與連續(xù)相(水相)的接觸,從而減少水中所含的氧氣對(duì)藥物的氧化,對(duì)藥物起到了保護(hù)作用。而分散在水中的白藜蘆醇,在70℃下放置30min,上清液就已變黃,藥物被氧化,藥物含量明顯降低。4透射電鏡及粒度分析以RH-40為表面活性劑、無(wú)水乙醇為助表面活性劑、IPM為油相所