不同產(chǎn)地半夏總生物堿含量測(cè)定

不同產(chǎn)地半夏總生物堿含量測(cè)定

半夏來(lái)自天南星科植物半夏屬（thunb.）的干燥塊根。其作為一味常用中藥,不僅供中醫(yī)臨床配方使用,也是多種中成藥的原料,其綜合利用價(jià)值高,開(kāi)發(fā)前景廣闊。而且近幾年來(lái),隨著世界各國(guó)對(duì)半夏研究的不斷深入,以半夏為主原料的產(chǎn)品源源不斷地推入國(guó)際市場(chǎng),故半夏具有巨大的市場(chǎng)潛力。我國(guó)半夏資源分布廣泛,國(guó)內(nèi)除內(nèi)蒙、吉林、黑龍江、新疆、青海、西藏外,其余省區(qū)均有分布。而半夏種莖的質(zhì)量是半夏藥材品質(zhì)及質(zhì)量控制研究的關(guān)鍵,為了評(píng)價(jià)全國(guó)不同產(chǎn)地半夏尤其是四川片區(qū)半夏種莖的質(zhì)量,本研究收集川產(chǎn)半夏與其他產(chǎn)區(qū)的野生和栽培半夏,對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分的比較研究。半夏總生物堿具有止嘔、抗炎作用,這些藥理作用反映了半夏止嘔、鎮(zhèn)咳的功能與主治,故以半夏總生物堿成分為檢測(cè)指標(biāo),采用紫外分光光度法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。現(xiàn)報(bào)道如下。1實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備1.1地研究對(duì)象本研究共收集了全國(guó)不同產(chǎn)地半夏8省22地共22個(gè)種質(zhì)資源樣品作為研究對(duì)象,樣品均系成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定。材料來(lái)源詳見(jiàn)表1。1.2試劑的配制鹽酸麻黃堿購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH5.4)、溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液均在臨用前配制,其余所用試劑均為分析純。7530G紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(安捷倫上海分析儀器有限公司)。2方法和結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10.0mg,置50mL容量瓶中,加蒸餾水制成每1mL含0.2mg鹽酸麻黃堿溶液,即得對(duì)照品溶液。2.2聲、氯的提取精密稱(chēng)取半夏樣品粉末0.5g,置50mL三角瓶中,加濃氨水1mL,濕潤(rùn)后,加氯仿10mL,稱(chēng)定重量。冷浸3h后分別超聲提取60min,加氯仿補(bǔ)足減失的重量,過(guò)濾,殘?jiān)?0mL氯仿分3次洗滌,合并濾液與洗液,40℃以下回收氯仿至干。加入8mL氯仿使溶解并轉(zhuǎn)移至25mL分液漏斗中,再依次加入10mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液和1mL溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液,充分振搖后,靜置15min,分取氯仿層,水層再用氯仿同法萃取兩次,每次8mL。合并氯仿層,用氯仿定容于25mL容量瓶?jī)?nèi),即得供試品溶液。2.3界定波長(zhǎng)的確定按供試品溶液的制備方法,不稱(chēng)取半夏樣品粉末制備空白對(duì)照液。將對(duì)照品溶液、樣品供試液和空白對(duì)照液在200～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)光譜掃描。以對(duì)照品溶液和樣品供試液均有最大吸收,而空白對(duì)照液無(wú)干擾處作為測(cè)定波長(zhǎng)。結(jié)果半夏樣品供試液和對(duì)照品溶液在418nm處都有最大吸收,故本含量測(cè)定最終確定418nm波長(zhǎng)作為半夏總生物堿含量的測(cè)定波長(zhǎng)。見(jiàn)圖1、圖2。2.4制備空白的制備分別精密吸取一定量的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液至分液漏斗中,加蒸餾水至2.0mL,加入8mL氯仿,再依次加入10mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液和1mL溴麝香草酚藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)液,充分振搖后,靜置15min,分取氯仿層,水層再用氯仿同法萃取兩次,每次8mL。合并氯仿層,用氯仿定容于25mL容量瓶?jī)?nèi),即得。以相應(yīng)的試劑同法制作空白。照紫外-分光光度法,在418nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度A為縱坐標(biāo),對(duì)照品濃度C為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程:A=25.853C+0.0767,r=0.9982。結(jié)果表明鹽酸麻黃堿在0.0016mg/mL～0.0160mg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖3。2.5樣品溶液的制備精密稱(chēng)取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項(xiàng)下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對(duì)照液。在418nm處測(cè)定其吸收度,重復(fù)測(cè)定5次,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明:儀器精密度良好。2.6樣品溶液的制備精密稱(chēng)取取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項(xiàng)下確定的方法平行制備供試品溶液5份。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對(duì)照液。在418nm處測(cè)定其吸收度,重復(fù)測(cè)定5次,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明:該方法重現(xiàn)性良好。2.7樣品溶液的制備精密稱(chēng)取取半夏樣品粉末0.5g,按照2.2項(xiàng)下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對(duì)照液。于不同時(shí)間在418nm處測(cè)定其吸收度,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明:供試品溶液在3h內(nèi)保持穩(wěn)定。2.8空白對(duì)照液制備照2.2項(xiàng)下確定的方法制備供試品溶液。取氯仿8mL,同法操作,作為空白對(duì)照液。在418nm處測(cè)定其吸收度,并計(jì)算其含量,不同產(chǎn)地半夏總生物堿測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。3川、川產(chǎn)夏的總生物含量3.122個(gè)不同產(chǎn)地半夏種莖的總生物堿平均含量為0.03891%,其中最高為0.07270%,最低為0.01194%,相差約4倍,不同產(chǎn)地半夏種莖總生物含量差異較大。說(shuō)明雖然半夏是一種分布很廣的植物,但是其質(zhì)量各地差異極大,急需建立半夏的種子種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),提供半夏高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種子,從源頭上控制半夏的質(zhì)量。3.2四川半夏種莖中總生物堿含量在0.03028%～0.06843%,平均值為0.0489%;省外半夏種莖的總生物堿含量范圍在0.01194%～0.0727%,平均值為0.0342%。川產(chǎn)半夏的總生物堿含量較省外半夏高,并且省外半夏中以重慶半夏的總生物堿含量最高,而重慶的氣候、地理環(huán)境與四川極其相近,說(shuō)明環(huán)境因素對(duì)半夏總生物堿含量影響較大,并且半夏作為川產(chǎn)道地藥材是有其依據(jù)的。3.3通過(guò)全國(guó)范圍收集半夏,發(fā)現(xiàn)栽培半夏直徑遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)藥典規(guī)定,外形與天南星極為相似,與傳統(tǒng)的野生半夏經(jīng)驗(yàn)鑒別大相徑庭,急需一種全面評(píng)價(jià)栽培和野生半夏內(nèi)在品質(zhì)差異的方法以控制半夏的質(zhì)量,保證臨床用藥