第十章 免疫系統(tǒng)及其功能的分析技術(shù)

第十章

免疫系統(tǒng)及其功能的分析技術(shù)免疫系統(tǒng)及其功能的分析技術(shù)第一節(jié)

免疫細胞的分離與保存第二節(jié)

免疫細胞及其功能測定第三節(jié)

免疫分子測定第四節(jié)機體免疫功能的研究和測定免疫系統(tǒng)及其功能的分析技術(shù)第一節(jié)

免疫細胞的分離與保存第二節(jié)

免疫細胞及其功能測定第三節(jié)

免疫分子測定第四節(jié)機體免疫功能的研究和測定第一節(jié)免疫細胞的分離與保存一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)二、各類免疫細胞的分離第一節(jié)免疫細胞的分離與保存一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)二、各類免疫細胞的分離1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)1.細胞密度差異人外周血細胞的密度為：紅細胞1.093，粒細胞1.092，單個核細胞1.075～1.090，血小板1.030～1.035。1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)細胞粘附差異分離方法

利用單核/巨噬細胞較強的粘附能力，從單個核細胞懸液中去除或者收集單核/巨噬細胞。粘附貼壁法：細胞粘附差異分離方法吸附柱過濾法利用單核/巨噬細胞所具有的吞噬能力，采用磁場、沉淀、熒光等方法對細胞進行分離。玻璃纖維或葡聚糖凝膠吸附，收集未吸附的淋巴細胞尼龍纖維吸附B細胞，游離細胞為T細胞細胞吞噬能力差異分離技術(shù)加入直徑為3um的羰基鐵顆粒或乳膠顆粒，待單核/巨噬細胞充分吞噬顆粒后，再用磁場吸附或通過密度梯度離心，獲得較純的淋巴細胞。1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)3.表面標志分子（1）E-玫瑰花環(huán)沉降法（2）親和淘洗法（3）補體介導的特異性細胞毒分離法（4）熒光激活細胞分離法（5）免疫磁珠分離法（1）E-玫瑰花環(huán)沉降法（Erosettesedimentation）（2）親和淘洗法（Biopanning）在補體的作用下裂解與抗體結(jié)合的細胞，從而分離出不能與此抗體結(jié)合的細胞亞群。這是一種負選性分離法，簡稱細胞毒法。（3）補體介導的特異性細胞毒分離法（4）熒光激活細胞分離法方法快速、特異、高效，分離效果可與FACS法媲美，對儀器的要求卻低得多。（5）免疫磁珠分離法（immunomagneticmicrobeads）1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)4.對低滲的敏感性紅細胞對低滲的敏感性要高于白細胞，故可用不損傷白細胞的溫和低滲液處理以除去紅細胞。

低滲裂解法：蒸餾水

氯化銨處理法：0.83%氯化銨1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)5.特異性促生長因子利用免疫細胞生長對細胞因子的特殊需求，對免疫細胞進行有針對性地培養(yǎng)。如：IL-2聯(lián)合特異性抗原刺激可制備特異性T細胞克??；IL-4加上GM-CSF可以誘導PBMC中DC細胞前體的生長和分化為成熟DC。1.細胞密度差異2.細胞粘附及吞噬差異表面標志分子對低滲的敏感性特異性促生長因子正選分離與負選分離一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)6.正選分離與負選分離正選分離（positivesorting）：利用細胞的特性將所要的細胞選擇性分離出來，其余的細胞丟棄不用。負性分離（negativesorting）：利用細胞的特性將不要的細胞選擇性分離除去，余下的細胞就是所要的細胞。第一節(jié)免疫細胞的分離與保存一、免疫細胞分離的原理與技術(shù)二、各類免疫細胞的分離二、各類免疫細胞的分離1.白細胞的分離自然沉降分離后，將紅細胞裂解2.單個核細胞和淋巴細胞的分離聚蔗糖－泛影葡胺密度梯度離心吸附法去除巨噬細胞3.T、B淋巴細胞的分離E花環(huán)沉降法尼龍毛柱分離法

4.NK細胞和LAK前體細胞的分離

Percoll密度梯度離心法分離

單核細胞去除法:粘附法

B淋巴細胞去除法:尼侖棉纖維

T淋巴細胞去除法:E-玫瑰花環(huán)沉降法5.單核/巨噬細胞的分離

Percoll密度梯度離心

粘附法純化單核/巨噬細胞二、各類免疫細胞的分離二、各類免疫細胞的分離6.樹突狀細胞的分離密度梯度離心法粘附法表面標志7.淋巴細胞亞群的分離免疫磁珠法FACS法親和板淘洗法細胞毒法分離免疫系統(tǒng)及其功能的分析技術(shù)第一節(jié)

免疫細胞的分離與保存第二節(jié)

免疫細胞及其功能測定第三節(jié)

免疫分子測定第四節(jié)機體免疫功能的研究和測定第二節(jié)免疫細胞及其功能測定一、免疫細胞表面標志和亞群測定二、淋巴細胞增殖試驗三、細胞介導的細胞毒試驗四、活性分子分泌功能的測定五、吞噬細胞功能測定六、抗原遞呈功能檢測第二節(jié)免疫細胞及其功能測定一、免疫細胞表面標志和亞群測定二、淋巴細胞增殖試驗三、細胞介導的細胞毒試驗四、活性分子分泌功能的測定五、吞噬細胞功能測定六、抗原遞呈功能檢測一、免疫細胞表面標志和亞群測定免疫熒光法酶免疫染色法花環(huán)形成試驗補體依賴的微量細胞毒試驗細胞粘附法MHC-肽四聚體技術(shù)1.免疫熒光法4.補體依賴的微量細胞毒試驗6.

MHC-肽四聚體技術(shù)第二節(jié)免疫細胞及其功能測定一、免疫細胞表面標志和亞群測定二、淋巴細胞增殖試驗三、細胞介導的細胞毒試驗四、活性分子分泌功能的測定五、吞噬細胞功能測定六、抗原遞呈功能檢測二、淋巴細胞增殖試驗3H-TdR摻入法MTT法形態(tài)學計數(shù)法1.3H-TdR摻入法（3H-TdRincorporationassay）第二節(jié)免疫細胞及其功能測定一、免疫細胞表面標志和亞群測定二、淋巴細胞增殖試驗三、細胞介導的細胞毒試驗四、活性分子分泌功能的測定五、吞噬細胞功能測定六、抗原遞呈功能檢測三、細胞介導的細胞毒試驗形態(tài)學觀察法細胞內(nèi)容物釋放法

51Cr釋放法

乳酸脫氫酶釋放法凋亡細胞檢測法

形態(tài)學觀察DNA凝膠電泳TUNELAnnexinV/PI線粒體跨膜電位檢測51Cr釋放法（51Crreleaseassay）AnnexinV/PI第二節(jié)免疫細胞及其功能測定一、免疫細胞表面標志和亞群測定二、淋巴細胞增殖試驗三、細胞介導的細胞毒試驗四、活性分子分泌功能的測定五、吞噬細胞功能測定六、抗原遞呈功能檢測四、活性分子分泌功能的測定酶聯(lián)免疫斑點法溶