《NIPT項目介紹》資料課件

胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)基因檢測

(NIPT)——深圳市核子基因科技有限公司實用文檔2背景知識1臨床產(chǎn)前篩查與診斷方法2無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測3主要內(nèi)容簡介具體操作流程4實用文檔3背景知識1實用文檔4名稱病因發(fā)病率常染色體唐氏綜合征21-3體1/600-800Edward綜合征18-3體1/3500-8000Patau綜合征13-3體1/7000-20000性染色體Turner綜合征XO1/2500-5000(♀)克氏綜合征XXY1/1000(♂)XXX綜合征XXX1/1000(♀)常見染色體疾病實用文檔5唐氏綜合征(Down’ssyndrome)又稱“21-三體綜合征”或“先天愚型”，主要是由于細(xì)胞中多出一條21號染色體所導(dǎo)致的疾病。正常人核型唐氏綜合征核型唐氏綜合征概述實用文檔6典型面容

先天性智力低下、精神遲鈍心臟、消化系統(tǒng)、五官的發(fā)育異常骨骼及肌肉發(fā)育不全，肌肉無力，身材矮小唐氏綜合征臨床表現(xiàn)實用文檔7多發(fā)畸形：容貌特殊，枕骨突出，95%以上伴有心臟畸形，胸骨過短，手指重疊、扭曲等；發(fā)育障礙：新生兒常為過期生產(chǎn)，對聲響反應(yīng)微弱，骨骼和肌肉發(fā)育不良；存活困難：一半以上胎死腹中， 20%新生兒存活超過兩個月，

只有5-10%能夠存活一年以上。7愛德華氏綜合征（T18）臨床特點實用文檔8嚴(yán)重畸形：患兒的畸形和臨床表現(xiàn)要比21三體性嚴(yán)重得多，顱面、腦和內(nèi)臟畸形非常普遍。前額、前腦發(fā)育缺陷，如無嗅腦，心室或心房間隔缺損，多囊腎等；智力障礙：程度嚴(yán)重，存活較久的患兒還有癲癇樣發(fā)作；存活時間短：45%的患兒在出生后一個月內(nèi)死亡，90%在6個月內(nèi)死亡，存活至3歲者少于5%，平均壽命為130天。8帕陶氏綜合征（T13）臨床特點實用文檔9根據(jù)2004年我國衛(wèi)生部婦幼保健與社區(qū)衛(wèi)生司的調(diào)查結(jié)果，每一新發(fā)唐氏病例給家庭帶來的直接經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)是39.0萬元。每年政府支出約80億元用于患兒的醫(yī)療和社會救濟(jì)。給家庭帶來巨大的心理壓力和

精神痛苦，多數(shù)患者容易受到

歧視，特殊教育的接受水平普

遍偏低，缺乏生活自理能力和

社會適應(yīng)能力，生存質(zhì)量極差。9唐氏綜合征（T21）對家庭和社會的危害實用文檔10遺傳因素：家族遺傳生物因素：自身免疫疾病，病毒感染；物理因素：妊娠時放射線照射，放射性塵埃；化學(xué)因素：藥物、農(nóng)藥、工業(yè)毒物、食品添加劑；隨著孕婦年齡增加，唐氏綜合征患病率顯著升高；唐氏綜合征發(fā)病機(jī)理唐氏綜合征患病幾率與人種、生活水準(zhǔn)等沒有直接聯(lián)系，任何夫妻，各個年齡段的孕婦，均有懷唐氏兒的幾率。實用文檔11臨床產(chǎn)前篩查與診斷方法2實用文檔12產(chǎn)前篩查：采用簡便、可行、無創(chuàng)的檢查方法，對發(fā)病率高、病情嚴(yán)重的遺傳性疾病或先天畸形等在分娩前進(jìn)行檢查，檢出子代具有出生缺陷高風(fēng)險的人群。篩查出可疑者再進(jìn)一步確診，是防止出生缺陷的重要步驟。產(chǎn)前診斷：又稱宮內(nèi)診斷或出生前診斷，是通過直接或間接地方法對孕期胎兒性別及健康進(jìn)行檢測，防止具有嚴(yán)重遺傳病、智力障礙及先天畸形的患兒出生。產(chǎn)前篩查&產(chǎn)前診斷的定義實用文檔血清學(xué)篩查妊娠中期篩查AFP+hCG+E3AFP+hCGAFP+hCG+E3+inhibit妊娠早期篩查PAPP-Aβ-hCG超聲篩查胎兒頸項透明層（NT）其他超聲標(biāo)志物13產(chǎn)前篩查:

采用簡便、可行、無創(chuàng)的檢查方法，對發(fā)病率高、病情嚴(yán)重的遺傳性疾病或先天畸形等在分娩前進(jìn)行檢查，檢出子代具有出生缺陷高風(fēng)險的人群。篩查出可疑者再進(jìn)一步確診，是防治出生缺陷的重要步驟。

唐氏綜合征產(chǎn)前篩查與診斷實用文檔14胎兒頸項透明層（NT）NT實用文檔15是指先天性疾病或遺傳性疾病在胎兒期的診斷，是利用非侵入性或侵入性手段對胎兒進(jìn)行的特異性檢查，以便在早孕期或中孕期對異常胎兒作出診斷，及時治療或處理。方法有創(chuàng)/無創(chuàng)孕周描述絨毛活檢術(shù)有創(chuàng)10~131%~3%流產(chǎn)率99%檢出率羊膜腔穿刺術(shù)有創(chuàng)16~210.5%~1%流產(chǎn)率99%檢出率經(jīng)腹臍靜脈穿刺術(shù)有創(chuàng)20~280.5%~1%流產(chǎn)率99%檢出率優(yōu)點：核型分析可以作為產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。缺點：損傷性；存在流產(chǎn)、宮內(nèi)感染等風(fēng)險,對醫(yī)生的技術(shù)要求高，工作效率很難提高。產(chǎn)前診斷實用文檔產(chǎn)前診斷方法16絨毛穿刺取樣（chorionicvillussampling,CVS）羊水穿刺（amniocentesis）臍帶穿刺（pencutaneousumbilicalbloodsampling,PUBS）實用文檔絨毛活檢術(shù)10-13周絨毛組織20mg（細(xì)胞培養(yǎng)或生化檢查）適用：高齡孕婦和高危孕婦孕早期診斷。干擾：胎盤嵌合體流產(chǎn)率1%-3%其他風(fēng)險：胎兒肢體發(fā)育缺陷等17實用文檔

羊膜腔穿刺術(shù)

16-21周20mL羊水（細(xì)胞培養(yǎng)或其他檢測）適用：高齡孕婦和高危孕婦孕中期診斷干擾：母血污染流產(chǎn)風(fēng)險0.5%-1%其他風(fēng)險：羊水泄露、母體血管損傷、宮內(nèi)感染等18實用文檔

經(jīng)腹臍靜脈穿刺術(shù)

20-28周臍血1-2ml，只需培養(yǎng)48h適用:高齡孕婦和高危孕婦孕晚期診斷干擾：母血污染胎死宮內(nèi)、早產(chǎn)率0.5%-1%其他風(fēng)險：穿刺失敗、胎兒心動影響等19實用文檔20在產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷之間缺少一個技術(shù)補(bǔ)充，它要具有產(chǎn)前診斷的高準(zhǔn)確性，同時又具有安全、簡便、無創(chuàng)的特點----基因水平方法侵入性孕周技術(shù)特點產(chǎn)前篩查孕婦外周血生化篩查非侵入性11-13+614-20+65%假陽性率，40%漏診*超聲頸部透明帶非侵入性11-13+65-10%假陽性率，技術(shù)要求高產(chǎn)前診斷絨毛取樣侵入性10-13+61-5%流產(chǎn)率羊水穿刺侵入性16-210.5-1%流產(chǎn)率臍靜脈血穿刺侵入性20-281-2流產(chǎn)率產(chǎn)前篩查和診斷的方法對比實用文檔21無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測3實用文檔一

無創(chuàng)技術(shù)的理論基礎(chǔ)與檢測原理二技術(shù)開發(fā)進(jìn)程與臨床實踐22實用文檔理論基礎(chǔ)—孕婦外周血中存在胎兒DNA23實用文檔胎兒DNA的來源和特點來源：1胎兒細(xì)胞通過胎盤滲透到母血中，被

母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來；2胎兒細(xì)胞凋亡；3胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡基本特點：1含量有一定的變化規(guī)律。妊娠第4周開

始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加

而增加，存在個體差異，平均濃度7.5%；2分娩后短時間內(nèi)消失，平均半衰期為

16.3min(4-30min)，2h就無法檢出，

前次妊娠情況不影響再次妊娠檢測結(jié)果；3DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī)技

術(shù)很難檢測

圖1臨床試驗數(shù)據(jù)濃度隨孕周變化趨勢（內(nèi)部數(shù)據(jù)）實用文檔無創(chuàng)染色體非整倍體：不同檢測技術(shù)比較實用文檔理論模型（基于測序的無創(chuàng)檢測）

母親Chr21：95×2=190母體外周血中Chr21=190+10=200以21-三體為例：100DNA單位/毫升血漿。其中，95個單位來源于母親，5個單位來源于胎兒通過大規(guī)模并行測序，獲得分布在每條染色體上的真實的核酸片段數(shù)量，經(jīng)過計數(shù)與比較：正常胎兒或者

21-三體胎兒

正常胎兒

Chr21：5×2=10

母親Chr21：95×2=190

21-三體胎兒

Chr21：5×3=15母體外周血中Chr21=190+15=205實用文檔2727已知參照序列

（Chr21#...）測序獲得的

核酸片段

（reads)測序數(shù)據(jù)比對示意圖實用文檔真實測序數(shù)據(jù)展示熒光信號

->堿基序列（數(shù)字信號）InstrumentPCAnalysisPC/cluster實用文檔國際應(yīng)用進(jìn)展（基于測序的無創(chuàng)DNA檢測）國際、國內(nèi)同類型臨床應(yīng)用研究顯示：基于測序的無創(chuàng)DNA檢測技術(shù)，對于

T21、T18、T13，均具有極高的檢出率與準(zhǔn)確性實用文檔一

無創(chuàng)技術(shù)的理論基礎(chǔ)與檢測原理二技術(shù)開發(fā)進(jìn)程與臨床實踐30實用文檔31檢測技術(shù)概述胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)DNA檢測

（NIFTY）：通過采集5ml孕婦外周血，提取其中游離DNA并采用第二代高通量測序技術(shù)進(jìn)行測序，通過生物信息分析，得出胎兒患“染色體非整倍體”的風(fēng)險率。技術(shù)定位：

高精度產(chǎn)前篩查方法實用文檔

檢測流程現(xiàn)場咨詢與知情同意是血漿分離血漿游離DNA測序

隨訪/常規(guī)診斷(絨毛膜穿刺、羊水穿刺等)32實用文檔提取血漿DNA測序定位覆蓋深度統(tǒng)計覆蓋深度Cov-chrN=參考序列染色體N上有效測序片段總數(shù)樣品染色體N上有效測序片段總數(shù)AACGT------CGATA-------TAGGC------ATCGC------生物信息比對Chr6Chr18ChrXChr21Chr7Chr13Chr11ChrY50bp統(tǒng)計值計算(t-值,L-值)確認(rèn)胎兒是否為T21,T18,T13…測試樣本ChrN的關(guān)聯(lián)t-Score樣本的覆蓋深度—參考樣本的修正覆蓋深度參考樣本的標(biāo)準(zhǔn)差L值=

對數(shù)（樣品正常可能性值）對數(shù)（樣品患病可能性值）=技術(shù)流程正常21-三體實用文檔34普通篩查胎兒患T21、T18或

T13高風(fēng)險的孕婦取外周血并編號用NIFTY來分析胎兒21號、18號和13號染色體羊水穿刺/核型分析雙盲測試統(tǒng)計靈敏度和特異性結(jié)果分析臨床研究（雙盲)實用文檔2023/10/18總數(shù)孕婦相關(guān)信息

中位數(shù)

(歲)33

高齡孕婦(≥35歲)1217(35.1%)18–24歲

(例,%)297(8.6%)25–29歲(例,%)1026(29.6%)30–34歲

(例,%)804(23.2%)35–39歲

(例,%)960(27.7%)≥40歲

(例,%)257(7.4%)

不詳(例,%)120(3.5%)抽血孕周

中位數(shù)

(周)19

范圍

(周)6-40 ≤12周

(例,%)48(1.4%) 13-16周

(例,%)132(3.8%) 17-20周

(例,%)1677(48.4%) 21-24周

(例,%)1256(36.3%) 25-28周

(例,%)155(4.5%)≥29周(例,%)71(2.0%)

不詳(例,%)125(3.6%)B超發(fā)現(xiàn)染色體異?；?例)27(0.8%)唐篩信息

已做

–高風(fēng)險

(例,%)1365(39.4%)

已做–低風(fēng)險

(例,%)232(6.7%)

未做(例,%)1867(53.9%)臨床研究（雙盲)實用文檔36檢出高風(fēng)險險樣本數(shù)總例數(shù)T21T18T13樣本總數(shù)（例）3000150519核型分析（例）3000149509假陽性

（例）-110假陰性

（例）-000檢出率-100%100%100%假陽性率-0.035%0.034%0.00%陽性預(yù)測值-99.33%98.04%100%假陰性率-0%0%0%陰性預(yù)測值-100%100%100%臨床研究（雙盲)實用文檔37具體操作流程4實用文檔

通過采集5ml孕婦外周血，提取其中游離DNA采用第二代高通量測序技術(shù)進(jìn)行測序，通過生物信息分析，得出胎兒患“染色體非整倍體”的風(fēng)險率。檢測范圍：可以用于檢測21、18、13等染色體非整倍體?？勺鳛橐环N產(chǎn)前篩查技術(shù)，極低的假陽性率大幅降低創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷比例，緩解臨床壓力。技術(shù)概述實用文檔391、技術(shù)優(yōu)勢：無創(chuàng)：采集5ml孕婦外周血安全：避免胎兒宮內(nèi)感染或流產(chǎn)早期：≥12孕周即可檢測，最佳孕周（12-24周）準(zhǔn)確：采用新一代測序技術(shù)，結(jié)合生物信息分析無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測技術(shù)優(yōu)勢實用文檔40所有孕周≥12周的孕婦；（最佳檢測孕周：12-24周）適應(yīng)群體

年齡達(dá)35歲或以上的高齡孕婦

拒絕做羊水穿刺者

孕早、中期血清篩查21三體風(fēng)險臨界者（1/300-1/1000),孕早期超聲提示胎兒異常

有穿刺禁忌癥孕婦(胎盤前置、流產(chǎn)征兆、感染乙肝、HIV、TP等)

IVF、習(xí)慣性流產(chǎn)及其他原因“珍貴兒”錯過有創(chuàng)產(chǎn)前診斷的孕婦檢測對象：特別適合群體：實用文檔41不能檢測雙胞胎及以上多胎；不適合檢測染色體的微缺失、微重復(fù)以及結(jié)構(gòu)異常（嵌合體型、易位型）;孕婦前期接受過異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療等，而引入外源DNA，會影響檢測結(jié)果;孕婦本人為“染色體非整倍體”患者，不適合進(jìn)行該項檢測；夫婦雙方或一方為染色體結(jié)構(gòu)異常者不適合進(jìn)行該項檢測；目前局限性實用文檔樣本采集、儲存及運輸2023/10/1842實用文檔標(biāo)本采集流程孕婦填寫知情同意書、送檢單并領(lǐng)取保險卡分離血漿孕婦抽血、貼條碼(一一對應(yīng)）寄送樣本接收樣本1、干冰寄送樣本10公斤/2-3天、避免反復(fù)凍融2、每例樣本對應(yīng)4管血漿。孕婦必填基本信息并簽名醫(yī)生解答疑問1、采用5mLEDTA抗凝管2、條碼分別貼送檢單、知情同意書采血管、2.0mLEP管1、4℃8h內(nèi)離心2、4℃1600g離心10min3、

4℃16000g離心10min1、檢查樣品是否合格2、錄入信息（SOP雙人復(fù)核）繳費編號原則：PDB12+醫(yī)院代碼+5位流水號實用文檔全血樣本量：5mL采血管：專用采用管樣本標(biāo)識：血液采集后，在樣本采集管上標(biāo)明孕婦姓名、年齡及孕周。樣本保存：常溫下保存。注意：送檢過程中不能冰凍。樣本采集2023/10/1844實用文檔檢測報告及解釋2023/10/1845實用文檔檢測報告——正常報告結(jié)果解釋1、低風(fēng)險：說明胎兒患染色體非整倍體的風(fēng)險很低，建議繼續(xù)妊娠并進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢；2、高風(fēng)險:說明胎兒患某種染色體非整倍體的風(fēng)險很高，建議進(jìn)行羊水或者臍血穿刺；3、準(zhǔn)確率>99%。實用文檔檢測報告——延遲報告結(jié)果解釋1、質(zhì)控不過關(guān)：可能是實驗的原因或者樣本本身問題，重新進(jìn)行實驗；2、數(shù)據(jù)波動，值偏高但沒達(dá)到