中藥新藥開(kāi)發(fā)

中藥新藥開(kāi)發(fā)機(jī)遇與挑戰(zhàn)姓名：汪巖學(xué)號(hào)：S2010210專(zhuān)業(yè)：中藥學(xué)【摘要】：我國(guó)中藥資源極其豐富，但中藥新藥開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀并不樂(lè)觀，本文就中藥新藥開(kāi)發(fā)現(xiàn)階段面臨的問(wèn)題與挑戰(zhàn)進(jìn)行敘述，并以五味子為例進(jìn)行論述、研究。關(guān)鍵詞：中藥新藥；研發(fā)；五味子；工藝；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)藥是中華民族優(yōu)秀文化的燦爛結(jié)晶,數(shù)千年來(lái),為中華民族的繁衍昌盛建立了不可磨滅的功績(jī),同時(shí)也為世界民族醫(yī)學(xué)的發(fā)展作出了貢獻(xiàn)。我國(guó)的中藥資源極為豐富,居世界第一,其開(kāi)發(fā)的前景也十分廣泛。在應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)研究和分析中藥時(shí),又發(fā)現(xiàn)了中藥許多新的活性成分、新的結(jié)構(gòu)、以及新的用途,這對(duì)中藥研究開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。面對(duì)著中藥新藥開(kāi)發(fā)的巨大潛力，我們也應(yīng)意識(shí)到它的機(jī)遇與挑戰(zhàn)是并存的?，F(xiàn)將中藥新藥開(kāi)發(fā)的現(xiàn)狀出現(xiàn)的問(wèn)題及其發(fā)展機(jī)遇與挑戰(zhàn)綜述如下：中藥新藥研發(fā)現(xiàn)狀我國(guó)新藥研究取得了一定的進(jìn)展經(jīng)過(guò)近十幾年的發(fā)展,我國(guó)在抗真菌天然藥物、抗病毒天然藥物、神經(jīng)系統(tǒng)天然藥物、心血管疾病天然藥物及抗癌天然藥物等方面已取得一些進(jìn)展。絕大多數(shù)中藥新藥是復(fù)方制劑據(jù)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局?jǐn)?shù)據(jù)顯示,雖然近年來(lái)國(guó)內(nèi)職務(wù)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)每年都在大幅度上升,但有關(guān)中藥發(fā)明專(zhuān)利年申請(qǐng)始終在1700件左右。統(tǒng)計(jì)資料顯示,近10年我國(guó)中醫(yī)藥的專(zhuān)利申請(qǐng)中,職務(wù)發(fā)明申請(qǐng)比例過(guò)小,中醫(yī)藥企業(yè)和科研單位知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)意識(shí)仍然比較淡薄,運(yùn)用專(zhuān)利制度保護(hù)自己的能力較弱。中藥企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新能力弱,申請(qǐng)專(zhuān)利據(jù)統(tǒng)計(jì),2002年,我國(guó)中藥領(lǐng)域的專(zhuān)利申請(qǐng)僅有3026件。2003年,我國(guó)中藥領(lǐng)域PCT僅占國(guó)內(nèi)申請(qǐng)的0.6%。國(guó)內(nèi)大約90%以上的中藥都沒(méi)有申請(qǐng)專(zhuān)利。近幾年還是如此。中藥新藥開(kāi)發(fā)利用的研究途徑古代人類(lèi)在尋找新藥的漫長(zhǎng)歷史中,最早應(yīng)用也是最常用的方法是靠嘗試!,通過(guò)嘗試!積累各種藥物知識(shí),這就是神農(nóng)嘗百草!的辦法。史前時(shí)代,尋找新藥靠經(jīng)驗(yàn)積累,即使在有文字記載的歷史年代里,相當(dāng)長(zhǎng)久的時(shí)期中,尋找新藥的主要途徑也仍然是靠經(jīng)驗(yàn)的積累。中藥新藥來(lái)源于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的臨床實(shí)踐,歷史悠久的祖國(guó)醫(yī)學(xué)積累了大量寶貴經(jīng)驗(yàn),為研制優(yōu)質(zhì)新藥提供了極為有利的條件。中藥新藥組方是經(jīng)人體反復(fù)驗(yàn)證產(chǎn)生、來(lái)自臨床實(shí)踐的有效方藥,以經(jīng)得起重復(fù)的療效為根本。加強(qiáng)炮制、劑型對(duì)照研究,選擇藥效敏捷的途徑制藥。中藥炮制是傳統(tǒng)的制藥技術(shù),用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)闡明炮制機(jī)理,已成為中醫(yī)藥界的緊迫任務(wù)。正確選用藥材品種及注意藥材來(lái)源。中藥品種繁多,產(chǎn)地各異,藥名多來(lái)自民間,有的中藥同名異物或同物異名,所以開(kāi)發(fā)新藥研究,藥材的品種來(lái)源直接關(guān)系到藥物的療效。中藥新藥開(kāi)發(fā)利用的發(fā)展方向針對(duì)現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)臨床治療的盲點(diǎn),以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向,選擇西醫(yī)西藥缺乏肯定療效的疑難病、慢性非傳染性疾病和一些新生疾病等,作為中藥新藥研究開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)。加強(qiáng)中藥復(fù)方的研究開(kāi)發(fā)。加強(qiáng)中藥生產(chǎn)現(xiàn)代化的研究?，F(xiàn)代中藥新藥研究出現(xiàn)的問(wèn)題有的中成藥組方合理性較差有的中成藥從組方用藥上就存在明顯的缺陷,這就造成這類(lèi)中成藥的先天不足。組方藥味過(guò)于單薄,現(xiàn)在中藥新藥開(kāi)發(fā)的流行趨勢(shì)是,一個(gè)品種只包含3、4味藥,原因是藥味太多不利于檢測(cè)有效成分,也不利于質(zhì)量控制。每一位中醫(yī)臨床工作者都知道,一般1付湯藥10味藥左右才能使中藥恰當(dāng)配伍,達(dá)到最佳療效。這種只顧檢測(cè)有效成分、不顧臨床療效的思路違背了中醫(yī)理論和新藥開(kāi)發(fā)的初衷。劑型欠合理,照方開(kāi)成湯藥卻效果理想，但是改變它的劑型治病效果就不太理想了。走出中藥新藥開(kāi)發(fā)選題的幾個(gè)誤區(qū)5.1過(guò)分注重已有研究基礎(chǔ),忽視專(zhuān)利保護(hù)的可能性選題思路局限,缺乏必要的換位思考片面追求產(chǎn)品的類(lèi)別高、功效全輕視市場(chǎng)調(diào)研和有效市場(chǎng)的評(píng)價(jià)例：五味子新的提取方法工藝研究五味子（SchisandrachinensisTurczABaill）為木蘭科多年生落葉植物，具有益胃養(yǎng)心、收斂固澀、滋補(bǔ)、強(qiáng)壯等功效,是常用中藥之一。其有效成份為木脂素,木脂素系五味子甲素,五味子酯甲，乙，丙，丁，戊。常用的提取方法有回流提取法、超臨界CO2萃取法，超高壓提取法等!而滲漉法提取五味子有效成分也是實(shí)用的工藝之一，尤其是小型生產(chǎn)、醫(yī)院制劑、實(shí)驗(yàn)室制備等應(yīng)用廣泛。本研究以總木脂素含量為指標(biāo)，紫外分光光度法測(cè)定，利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，考查不同條件下滲漉法提取五味子浸膏的質(zhì)量。儀器與材料UV-3600型紫外分光光度計(jì)（島津國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）;電子天平;超聲波清洗器KQ2200B型；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2FQ85A;南五味子藥材;五味子甲素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0857-9601）;乙醇、甲醇（分析純）;濃硫酸;10%變色酸;純水。實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)以南五味子中木脂素的含量為考察指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)選擇四個(gè)因素分別為:浸泡時(shí)間、滲漉速度、收集滲漉液體積、乙醇濃度，以三水平正交表L9（34）安排實(shí)驗(yàn)。2.2提取方法取南五味子粗粉100g，用不同濃度乙醇浸泡不同時(shí)間，進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓濃縮干燥，得干浸膏，備用于總木脂素的含量測(cè)定，乙醇濃度、浸泡時(shí)間、滲漉速度、收集滲漉液體積（見(jiàn)表1）。表1因素與水平數(shù)水平A浸泡（h）B滲漉速度(mL/kg.min-1)C收集滲漉液體積（倍）D乙醇濃度％11266702244880336210902.3含量測(cè)定方法2.3.1對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取105°C干燥至恒質(zhì)量的五味子醇甲對(duì)照品適量，溶于甲醇中，得濃度為0.50mg/mL的對(duì)照品溶液，即稱(chēng)取五味子甲素5mg,溶于10mL甲醇中。2.3.2供試品溶液的制備:將干燥后的提取物研細(xì)過(guò)三號(hào)篩后，精密稱(chēng)取0.2g，置50mL容量瓶中，加入甲醇約30mL，超聲處理30min，放冷后，加甲醇定容，搖勻，后過(guò)濾，取續(xù)濾液10mL,置50mL容量瓶中，定容，搖勻，即可。2.3.3線(xiàn)性關(guān)系考察:精密量取”2.3.1”條下對(duì)照品對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。取上述溶液，以上述甲醇管為空白,按分光光度法，在254nm處測(cè)定吸收度，以A為縱坐標(biāo)。以所加的對(duì)照品量W為橫坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程2.3.4精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液0.5mL,按2.3.3中的方法處理后,連續(xù)測(cè)5次,記錄吸收A,計(jì)算RSD2.3.5穩(wěn)定性考察:取一試樣,按供試液制備的方法處理后,用2.3.3中的方法處理,按0,0.5,1,1.5,2h分別測(cè)定樣品的吸收度A,計(jì)算RSD。2.3.6.重復(fù)性試驗(yàn):取同一試液5份,按供試液制備方法處理后,用2.3.3中的方法處理供試液后，分別測(cè)定。記錄吸收度A,計(jì)算RSD。2.3.7加樣回收率試驗(yàn):精密吸取五味子甲素對(duì)照品溶液適量,加在已知含量的樣品中,按2.3.3測(cè)定方法測(cè)定。記錄吸收度A,計(jì)算回收率、RSD樣品含量測(cè)定取9份樣品,按供試液的方法處理后,按樣品測(cè)定法測(cè)定吸收度A,正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表3極差值和表4的方差分析結(jié)果表明在四個(gè)因素中,對(duì)木脂素提取率影響程度依次為：A>C>D>B。最佳提取的組合為A2B1C3D2，即取五味子粗粉用80%乙醇，浸泡24h,進(jìn)行滲漉。滲漉速度為6mL/kgAmin,收集10倍滲漉液。滲漉工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)取五味子粗粉100g兩份,分別按照最佳滲漉工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn),將滲漉液減壓干燥。按2.3.3方法測(cè)定木脂素的含量。最后確定五味子新提取工藝的最佳方法。五味子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究目前,對(duì)北五味子中有效成份的研究,已報(bào)道的有比色法、薄層層析比色法,及多用HPLC法進(jìn)行復(fù)方制劑研究的報(bào)道，還未見(jiàn)用HPLC法進(jìn)行南、北五味子綜合研究的報(bào)道。由于五味子為一種常用藥材,為了更有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量,從而保證其制劑的內(nèi)在質(zhì)量及其穩(wěn)定性,我們用HPLC法建立了五味子藥材中五味子醇甲和五味子甲素的含量測(cè)定的方法,分別用外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法測(cè)定了29個(gè)不同產(chǎn)地的五味子藥材中五味子醇甲和五味子甲素的含量,為有效控制五味子的內(nèi)在質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。樣品收集及預(yù)處理本研究收集了29個(gè)不同產(chǎn)地的五味子樣品,樣品經(jīng)鑒定來(lái)源、產(chǎn)地及含量。樣品處理：藥材經(jīng)60°C干燥、粉碎，過(guò)100目篩，置于廣口瓶中，室溫下密閉保存。儀器試劑與藥品儀器:Beckman166型高效液相色譜儀，美國(guó)Beckman公司Beckman140型紫外檢測(cè)器，美國(guó)Beck2man公司;Goldstar色譜工作站，美國(guó)Beckman公司。試劑:乙腈（色譜純）,天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)公司;乙腈（色譜純）,天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)公司;甲醇（分析純），天津市天河化學(xué)儀器廠。藥品:五味子醇甲對(duì)照品，自制;聯(lián)苯雙酯（內(nèi)標(biāo)物），自制。內(nèi)標(biāo)物法測(cè)定五味子藥材中五味子醇甲的含量3.1色譜條件色譜柱:MuMing2C18柱（250mmX416mmi.d,5|Jm）天津市慕名高新技術(shù)有限公司。流動(dòng)相:甲醇一水（45:55v/v）。流速:110ml/mim。檢測(cè)波長(zhǎng):250nm。柱溫:室溫。進(jìn)樣量:10Jl。檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取五味子醇甲對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成溶液，測(cè)定紫外吸收光譜，五味子醇甲在218.4nm處有最大吸收光譜波長(zhǎng)，在250nm處有一肩峰吸收，為避免末端吸收，測(cè)定樣品時(shí)誤差過(guò)大，因此本研究選擇了250nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論塔板數(shù)以五味子醇甲計(jì)算為9567，兩色譜峰之間的分離度大于1.5。3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制取五味子醇甲對(duì)照品約34mg，精密稱(chēng)定，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解、稀釋并定容至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。稱(chēng)取23mg聯(lián)苯雙酯，精密稱(chēng)定，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，定溶至刻度，搖勻，做為內(nèi)標(biāo)溶液。精密量取五味子醇甲對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置于10ml容量瓶中，分別加入內(nèi)標(biāo)溶液lml，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成不同濃度的溶液，用0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣,在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析,以五味子醇甲對(duì)照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱座標(biāo)(Y)，以濃度為橫座標(biāo)(X)，結(jié)果表明，五味子醇甲在0.017?0.17mg/ml的濃度范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，求回歸方程。樣品溶液的制備取過(guò)100目篩的五味子藥材原粉約1g，精密稱(chēng)定，加入6倍量的甲醇，用沙氏提取法回流提取3次，提取時(shí)間分別為3、2、2h，合并提取液，提取液減壓、濃縮、蒸干，殘?jiān)蒙V甲醇轉(zhuǎn)移至25ml的容量瓶中，定溶至刻度，搖勻，備用。精密量取上述溶液2ml，置于10ml容量瓶中，加入聯(lián)苯雙酯內(nèi)標(biāo)溶液lml，用色譜甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液做為供試品溶液，備用。精密度試驗(yàn)儀器精密度:吸取同濃度的五味子醇甲對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得五味子醇甲與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD。方法重復(fù)性:稱(chēng)取同一樣品(No.l)6份，每份約0.5g，精密稱(chēng)定，按照“樣品溶液制備”項(xiàng)下的方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得五味子醇甲的含量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD。3.7回收率試驗(yàn)稱(chēng)取已知含量的五味子樣品(No.l)9份，每份約015g，精密稱(chēng)定，精密加入一定量的對(duì)照品溶液，按照“樣品溶液制備”項(xiàng)下的方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，平均回收率見(jiàn)表。3.8樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品溶液(No11)分別放置0、2、4、6、8、12h后，在上述條件色譜下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明五味子醇甲在h內(nèi)穩(wěn)定性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。3.9樣品測(cè)定取五味子樣品溶液，在上述色譜條件下分析測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算五味子醇甲的含量。討論本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行提取工藝的考察時(shí)，以提出五味子醇甲和五味子甲素的量為考察指標(biāo)，通過(guò)對(duì)藥材用甲醇、乙醇沙氏提取、回流提取及超聲提取等方法進(jìn)行考察，最后確定了