藥用植物蜘蛛香不同極性段的藥效研究

藥用植物蜘蛛香不同極性段的藥效研究

蜘蛛香是科草科的一種蝴蝶香。首載于《本草綱目》,《滇南本草》中亦有記載,是云南地區(qū)常用的藥物之一。性味辛、苦,溫。具有消食散結(jié),行氣止痛,鎮(zhèn)靜安神,消炎止瀉等功效。用于治療胃腸道疾病有較好的療效,如消化不良,嘔吐腹瀉,小兒疳積,腹脹,食少,胃氣痛等。蜘蛛香的主要成分為揮發(fā)油,環(huán)烯醚萜類,黃酮類等。但是,現(xiàn)代對(duì)其藥效學(xué)的研究主要在鎮(zhèn)靜方面,而其他作用罕見(jiàn)報(bào)道。故將蜘蛛香不同極性段的提取物做鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)影響的實(shí)驗(yàn)研究,并與水煎液做比較,從而得知其活性部位在哪個(gè)極性段,為以后更好的開(kāi)發(fā)、利用蜘蛛香提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物ICR小鼠,體重18~22g,雌雄兼用,由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證。SCXX(滇20060008)。1.2tamansiratche干燥培養(yǎng)膠囊蜘蛛香為敗醬科纈草屬植物蜘蛛香ValerianajatamansiJones的干燥根莖,購(gòu)自省藥材公司;元胡止痛膠囊(惠州九惠制藥廠,產(chǎn)品批號(hào)20050602);香砂平胃顆粒(云南省騰沖制藥廠,產(chǎn)品批號(hào):060143)。1.3數(shù)字肌肉張力檢測(cè)RB—200智能熱板儀;SW-200光熱尾痛測(cè)試儀;ZZ-6小鼠自主活動(dòng)儀;HW-2000微循環(huán)數(shù)字恒溫儀;HW400-S恒溫平滑肌槽;JH-2型肌張力傳感器;電子天平。所用試劑氯化鈣、氯化鉀、氯化鈉、磷酸二氫鈉、葡萄糖、碳酸氫鈉、硫酸鎂均為市售分析純?cè)噭?.4確定中央細(xì)胞劑用量藥液的配制:蜘蛛香藥材先浸泡30min,再煎煮3次,每次30min,過(guò)濾合并3次藥液,濃縮至2g/mL濃度。將此水煎濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇按極性遞增法萃取,分別得到石油醚層、乙酸乙酯層、正丁醇層和水層4個(gè)極性部分。回收溶劑,并揮盡溶劑后調(diào)正體積,灌封并冰箱保存供藥理篩選用。臨用時(shí)用37℃水浴加熱搖勻。分組給藥劑量:蜘蛛香水煎液組、水層組、正丁醇組、乙酸乙酯組均分為高、低劑量組。高劑量組均給予折合原生藥25g/kg的劑量,低劑量組均給予折合原生藥12.5g/kg的劑量。陽(yáng)性藥對(duì)照組,根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)分別為元胡止痛膠囊組(0.39g/kg)、香砂平胃顆粒組(14.29g/kg),空白對(duì)照組給等體積生理鹽水。以上均灌胃給藥,每日一次,每次0.02mL/g。2方法和結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,方差齊者:用t檢驗(yàn);方差不齊者:用t′檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如有偏態(tài),則用參比差值法。2.1影響大鼠疼痛閾值的影響2.1.1前痛閾值檢測(cè)按文獻(xiàn)方法,取雌性小鼠,測(cè)定小鼠的痛閾(即痛反應(yīng)潛伏期,指小鼠接觸熱板至舔后足的時(shí)間)。痛反應(yīng)潛伏期在5~30sec內(nèi)為合格鼠,取兩次正常痛閾平均值,作為該鼠給藥前痛閾值。將合格小鼠隨機(jī)分為10組,每組10只。實(shí)驗(yàn)時(shí)以60sec為限,以免燙傷小鼠。連續(xù)灌胃6d,于末次給藥后30min,60min,90min,120min,180min分別測(cè)量小鼠痛閾,結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明:水煎液高劑量組對(duì)小鼠熱刺激致痛有顯著抑制作用,低劑量亦有顯著抑制作用,但兩組起效均比陽(yáng)性對(duì)照組慢,其余幾組作用均不顯著。2.1.2給藥后小鼠的痛閾變化選用18~22g小鼠,雌雄各半,每組12只,共10組,將動(dòng)物置鼠筒中,尾自然下垂于筒外,以啟動(dòng)光熱至鼠尾急速擺動(dòng)的時(shí)間為甩尾潛伏期測(cè)痛閾,調(diào)整刺激強(qiáng)度使基礎(chǔ)痛閾(給藥前痛閾值)為3sec左右,給藥后若藥物使痛閾提高,則照射時(shí)間以6sec為限。小鼠連續(xù)灌胃7d,于末次給藥后30min測(cè)其痛閾,用配對(duì)t值法檢查差異顯著性。結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明:蜘蛛香水煎液高、低劑量組,水層高、低劑量組及正丁醇高劑量組對(duì)小鼠疼痛均有非常顯著的抑制作用,正丁醇低劑量組及乙酸乙酯組高劑量組亦有顯著的抑制作用,其余組作用不顯著。2.2小鼠活動(dòng)次數(shù)測(cè)定選用18~22g小鼠,雌雄不拘,隨機(jī)分組,每組12只。給藥前把小鼠放進(jìn)活動(dòng)箱中記錄10min內(nèi)的活動(dòng)次數(shù),灌胃給藥8d后于末次給藥30min后按同法測(cè)定小鼠活動(dòng)次數(shù),結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明:水煎液高、低劑量組及水層高劑量組對(duì)小鼠自主活動(dòng)均有非常顯著的抑制作用,水層低劑量組、正丁醇高、低劑量組及乙酸乙酯高劑量組對(duì)小鼠站立活動(dòng)有顯著抑制作用,其余幾組作用不顯著。2.3炭末推進(jìn)試驗(yàn)取小鼠120只,分成10組,連續(xù)灌胃9d,每天1次,每次0.02mL/g。末次給藥加5%的炭末,于給藥后10min把小鼠脫頸椎處死,打開(kāi)腹腔分離腸系膜,剪取上端至幽門、下端至回盲部的腸管,輕輕將小腸擺成直線,測(cè)量其全長(zhǎng)及炭末推進(jìn)的長(zhǎng)度,用公式計(jì)算炭末推進(jìn)百分率:炭末推進(jìn)率(%)=炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)/小腸全長(zhǎng)(cm)×100%結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明:水煎液高劑量組有非常顯著的增加炭末推進(jìn)率的作用,水層高劑量組亦能顯著增加炭末推進(jìn)率,水煎液低劑量組僅有輕微作用,無(wú)統(tǒng)計(jì)意義,其余幾組作用皆不顯著。2.4阿托品對(duì)克氏原螯蝦腸肌運(yùn)動(dòng)的影響家兔處死后立即解剖,將腸管放入常溫的臺(tái)氏液中清洗,排盡腸內(nèi)容物。每次取長(zhǎng)約1.5~2cm的腸管,一端固定在麥?zhǔn)显」苌?恒溫37℃,通空氣,每min40~60個(gè)氣泡,另一端連接在張力換能器上,負(fù)荷張力約1~2g。通過(guò)電生理數(shù)據(jù)采集處理系統(tǒng)記錄腸管的收縮活動(dòng)。待腸管收縮活動(dòng)穩(wěn)定后,描記一段正常收縮曲線。然后向浴槽內(nèi)加入受試藥液,觀察藥物的作用,描記曲線,測(cè)記曲線高度。各藥物劑量均按前述高劑量加藥。給藥順序?yàn)?給藥—沖洗恢復(fù)—乙酰膽堿(1μmol/L)—給藥。阿托品以同樣方法給藥。每組藥用5只兔子共10個(gè)腸肌標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明:與空白組比較,蜘蛛香水煎液組及水層組對(duì)離體腸肌運(yùn)動(dòng)均有非常顯著的增強(qiáng)作用。水煎液組、水層組、正丁醇組、乙酸乙酯組均有顯著的對(duì)抗乙酰膽堿的作用;水煎液組、水層組、正丁醇組均能使阿托品引起的腸肌松弛有所緩解,提示蜘蛛香對(duì)腸肌運(yùn)動(dòng)可能有雙向調(diào)節(jié)作用。其是興奮或是抑制起決于腸肌的狀態(tài)。3具體作用部位的探索從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:蜘蛛香水提液組具有非常顯著的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、增加小腸炭末推進(jìn)率作用,對(duì)家免離體腸肌亦有非常顯著的興奮作用。蜘蛛香萃取液母液對(duì)上述指標(biāo)也有顯著的作用,而正丁醇組作用較弱,乙酸乙酯組和石油醚組的作用不明顯,或基本無(wú)作用。蜘蛛香是一味經(jīng)中醫(yī)臨床長(zhǎng)期應(yīng)用證實(shí)療效較好的中藥之一,但長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)其具體作用部位的研究卻甚少,因此,本次實(shí)驗(yàn)是