級(jí)DNS法測(cè)定還原糖含量最終版

目的掌握還原糖和總糖的測(cè)定原理，學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法原理

1.還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖。2.在NaOH和丙三醇存在下，DNS與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物，在過(guò)量的堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在550nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。3.由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。

反應(yīng)化學(xué)方程式——桔紅色黃色實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑1、試劑（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液

準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑

將6.3gDNS和262mL2Mol/LNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1000mL，貯于棕色瓶中備用。（3）碘-碘化鉀溶液（4）6mol/lNaOH（5）0.1%酚酞指示劑（6）6mol/lHCl溶液2、材料淀粉3、器材分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電子萬(wàn)用爐，試管若干實(shí)驗(yàn)步驟

一、制作葡萄糖標(biāo)曲線取10支試管，按下表加入試劑試劑0123456789葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml00.20.40.50.60.70.81.01.21.4蒸餾水/ml2.01.81.61.51.41.31.21.00.80.6DNS/ml1.51.51.51.51.51.51.51.51.51.5葡萄糖含量/mg00.20.40.50.60.70.81.01.21.4混合均勻→沸水中加熱5min取出→冷水冷卻至室溫→各管加入21.5ml蒸餾水→測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（550nm波長(zhǎng)處）二、樣品中還原糖提取準(zhǔn)確稱取0.65g面粉，放在100ml燒杯中，先以少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加入15ml蒸餾水，混勻，于50℃恒溫保溫20min，時(shí)攪拌，使還原糖浸出，過(guò)濾，將濾液全部收集在25ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。

錐形瓶（0.5g面粉+10ml鹽酸+蒸餾水15ml）加熱30min

檢驗(yàn)水解是否完成（I-KI溶液）

冷卻至室溫后中和并定容到50ml

過(guò)濾取10ml于100ml容量瓶

取濾液又定容至刻度

（即為稀釋50倍）三.總糖提取四、樣品中含糖量的測(cè)定試劑空白還原糖總糖樣品溶液/ml01.01.0蒸餾水/ml2.01.01.0水楊酸/ml1.51.51.5將各管溶液混合均勻后在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻至室溫，在向各管加入21.5ml蒸餾水，搖勻在波長(zhǎng)為550nm處測(cè)定吸光度，并比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出糖的含量結(jié)果處理按下列公式計(jì)算樣品中還原糖與總糖的百分含量：還原糖%=(m*100)/(M*1000)總糖%=（m