甘蔗組培快繁技術(shù)實驗報告

甘蔗組培快繁技術(shù)生物08本尚麗萍34號組員：陳潔程燕娜甘蔗是禾本科甘蔗屬植物，是世界上重要的糖料作物，也是中國蔗糖工業(yè)的重要支柱。在甘蔗栽培上，通常是以蔗莖節(jié)上的腋芽繁殖，或在每年砍伐后，利用殘留在土中的莖基上的腋芽作宿根繁殖。莖段繁殖速度慢，用種量大，而且種莖在遠(yuǎn)途運輸中頗為不便，每年秋植蔗種來源難以解決，這對快速繁殖良種甘蔗以滿足甘蔗生產(chǎn)的需要極為不利，因此，采用組織培養(yǎng)的方法，規(guī)?；a(chǎn)遺傳性狀整齊一致的種苗供生產(chǎn)上應(yīng)用，現(xiàn)將甘蔗組培快繁技術(shù)介紹如下。1材料與方法1.1材料甘蔗腋芽及莖尖1.2方法1.2.1材料處理將所取外植體腋芽（帶少量莖節(jié)組織）、莖尖（帶部分新葉包裹）用洗衣粉水洗凈，清水沖洗半小時，在消過毒的接種間超凈工作臺上用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%HgCl2液處理15分鐘，用無菌蒸餾水沖洗4-5次后待接種。1.2.2培養(yǎng)基誘導(dǎo)外植體培養(yǎng)基：MS+BA1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+瓊脂8g/L。誘導(dǎo)腋芽增殖培養(yǎng)基：MS+BA5mg/L+活性炭0.5g/L+20g/L蔗糖；MS+BA10mg/l+活性炭0.5g/L+2%蔗糖。誘導(dǎo)生根增殖培養(yǎng)基：1/2MS+NAA2mg/L+IBA0.4mg/L+多效唑2mg/L。培養(yǎng)過程將處理好的材料接入誘導(dǎo)外植體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，光照時間10-12小時/天，光照強度（自然散射或熒光燈照明）1500-2000lux，培養(yǎng)溫度25-30℃。培養(yǎng)3-5天后，若培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁，說明已污染，應(yīng)立即清除。培養(yǎng)10-15天，芽轉(zhuǎn)綠將邊緣褐色部分剝除轉(zhuǎn)入同樣培養(yǎng)基中培養(yǎng)，芽長到2-3cm時，轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)腋芽增殖培養(yǎng)基中，如此重復(fù)進(jìn)行，直到所需數(shù)量后轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，根長至3-5cm將幼苗不開口移到自然光照下鍛煉2-3d，讓幼苗接受強光的照射，然后再開口練苗1-2d。從試管中取出發(fā)根的幼苗，用自來水洗掉根部粘著的培養(yǎng)基。但要輕輕除去，應(yīng)避免造成傷根。栽植時用一個筷子粗的竹簽在基質(zhì)中插一小孔，然后將小苗插入，注意幼苗較嫩，防止弄傷，栽后把苗周圍基質(zhì)壓實，栽前基質(zhì)要澆透水。栽后輕澆薄水。再將苗移入高濕度的環(huán)境中。保證空氣濕度達(dá)90%以上。2關(guān)鍵技術(shù)本實驗的關(guān)鍵步驟是誘導(dǎo)甘蔗腋芽，在誘導(dǎo)甘蔗腋芽過程中很容易發(fā)生污染以及褐變，所以在外植體的選取上盡量選取較嫩的腋芽或者莖尖分生組織以減少污染和褐變，清洗時要徹底，外植體的消毒時間要充足，以及在培養(yǎng)基中添加活性炭減少褐變。3技術(shù)路線圖外植體的選取外植體的選取外植體的清洗與消毒誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基的配置培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基的配置培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基煉苗、移栽4結(jié)果與分析4.1第一次培養(yǎng)第一次利用MS+BA1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+瓊脂8g/L培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果如下：存活數(shù)污染數(shù)第一次213原因分析：1、選用的是甘蔗中部較大的腋芽進(jìn)行組織培養(yǎng)。中部的腋芽長時間暴露在空氣中，含菌量較多，因此污染嚴(yán)重。2、外植體清洗時間不足，消毒時間過短。3、接種取材時較大，將腋芽處的部分莖節(jié)一同接入培養(yǎng)基中，加大了含菌量和污染的可能。4.2第二次培養(yǎng)第二次利用MS+BA1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+瓊脂8g/L培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果如下：存活數(shù)污染數(shù)第二次411原因分析：1、選用的是甘蔗中上部生長狀況良好的腋芽進(jìn)行組織培養(yǎng)。中上部的腋芽含菌量依然較多，因此仍有污染現(xiàn)象出現(xiàn)。2、外植體清洗時間較第一次延長，消毒時間也延長，因此存活率高于第一次的培養(yǎng)。3、接種時只取腋芽部分，并剝?nèi)ヒ秆康淖钔鈱?，目的是去除受傷害的?xì)胞。4.3第三次培養(yǎng)第三次利用MS+BA1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+瓊脂8g/L培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果如下：存活數(shù)污染數(shù)第三次87原因分析：1、配置培養(yǎng)基時量取準(zhǔn)確，PH值調(diào)整準(zhǔn)確，分裝滅菌后檢查瓶蓋是否松懈，及時旋緊。2、選用的是甘蔗上部生長狀況良好，沒有暴露在空氣中的腋芽進(jìn)行組織培養(yǎng)，此處腋芽含菌量較少，因此污染現(xiàn)象明顯降低。3、外植體清洗時間及消毒時間參考第二次消毒的時間。4、接種時只取腋芽部分，并剝