高效液相色譜法同時檢測果糖中9種禁限用色素

高效液相色譜法同時檢測果糖中9種禁限用色素

近年來，食品安全事件頻發(fā)，尤其是食品添加劑和違法添加。合成染料具有價格低廉、耐貯藏性強(qiáng)、生產(chǎn)工藝嚴(yán)格等特點。根據(jù)研究，合成染料主要是偶氮亞麻酸，在人體中分解形成芳香胺，對人體危害巨大。為了使用方便的冰蛋糕、水果蛋糕、奶甘草、糖、茶、糖果等食品，且這種色素可以引起兒童過度使用。因此，僅在預(yù)調(diào)酒中添加量以外的原料，最大用量為0.1g/l。對于孟加拉國紅、強(qiáng)良綠色、酸性紅52、鈉、黎明紅、酸性綠s、淺色黑色、熒光桃紅等18種色素，只有國家標(biāo)準(zhǔn)中禁止添加9種。因此，這些合成染料的檢測方法對確保食品安全具有重要的現(xiàn)實意義。糖果色彩繽紛,許多品種添加了人工合成色素.目前,國內(nèi)外用于糖果中多種合成色素的方法主要有高效液相色譜法、分光光度法、高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法等[2~8].本研究采用高效液相色譜法同時測定糖果中喹啉黃、孟加拉紅、堅牢綠、酸性紅52、熒光素鈉、曙紅、酸性綠S、亮黑、熒光桃紅等9種合成色素的含量,為食品安全質(zhì)量間接提供可靠的技術(shù)支持,有助于我國食品安全的科學(xué)監(jiān)測監(jiān)控,嚴(yán)厲打擊不法廠商的違法行為.1實驗部分1.1ler-toldo高效液相色譜儀(Agilent1290),配置二極管陣列檢測器和自動進(jìn)樣器;萬分之一電子天平(瑞士Mettler-Toledo);Milli-Q超純水器(美國密理博公司);3K18離心機(jī)(美國Sigma公司);渦旋混合器(德國Heidolph公司),SW22水浴搖床(德國Julabo公司).甲醇、乙酸銨為色譜純;水為超純水;喹啉黃、孟加拉紅、堅牢綠、酸性紅52、熒光素鈉、曙紅、酸性綠S、亮黑、熒光桃紅對照品購自于上海安譜科學(xué)儀器公司.1.2柱溫度和流速檢測色譜柱:Poroshell120EC-C18(150mm×2.1mm,2.7μm);流動相:甲醇(A)和0.04mol/L乙酸銨(B);梯度洗脫程序:0~2min,30%A;4min,40%A;8min,47%A;13min,90%A;15min,95%A.柱溫:25℃;檢測波長:420nm,500nm,550nm,630nm;流速:0.4mL/min;進(jìn)樣量:5μL.1.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制分別準(zhǔn)確稱取喹啉黃、孟加拉紅、堅牢綠、酸性紅52、熒光素鈉、曙紅、酸性綠s、亮黑、熒光桃紅對照品適量于25mL容量瓶中,用水配成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液.將標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后再將其稀釋成系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,4℃避光保存.1.4高效液相色譜法測定高效液相色譜準(zhǔn)確稱取2.5g均勻粉碎的糖果樣品(精確至0.001g),于50mL塑料離心管中,加入15mL水渦旋振蕩1min后放入水浴搖床,80℃振搖至溶解,混勻后定容至25mL,9500r/min離心5min,取上層清液過0.22μm水相濾膜,濾液上高效液相色譜儀測定.2結(jié)果與討論2.1測定喹啉黃、堅牢綠和酸性紅的波長使用DAD檢測器分別對喹啉黃、孟加拉紅、堅牢綠、酸性紅52、熒光素鈉、曙紅、酸性綠S、亮黑、熒光桃紅標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行光譜掃描.食品添加劑喹啉黃主要為喹啉黃磺酸鈉鹽,出現(xiàn)4個色譜峰,與文獻(xiàn)報道一致.喹啉黃的四個組分在410~420nm有最大吸收;堅牢綠有兩個色譜峰,最大吸收波長在630nm;酸性紅52有兩個色譜峰,最大吸收波長在550nm;酸性綠S最大吸收在630nm;熒光桃紅、孟加拉紅、亮黑最大吸收波長為550nm;熒光素鈉、曙紅最大吸收波長為500nm.實驗過程中發(fā)現(xiàn)使用喹啉黃、堅牢綠和酸性紅使用全部色譜峰面積之和定量與使用其最大吸收波長的色譜峰定量結(jié)果一致,因此最終選擇在420nm下測定喹啉黃;500nm下測定熒光素鈉和曙紅;550nm下測定亮黑、孟加拉紅、熒光桃紅和酸性紅52;630nm下測定酸性綠S和堅牢綠.2.2標(biāo)準(zhǔn)色譜柱的確定實驗考察甲醇-水、甲醇-乙酸銨、乙腈-水和乙腈-乙酸銨等流動相體系對9種禁限用色素的分離洗脫效果(如圖1所示),發(fā)現(xiàn)甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)出發(fā)有拖尾現(xiàn)象,且峰形較差,而乙腈洗脫能力強(qiáng)于甲醇,導(dǎo)致部分峰重疊無法分開,洗脫效果甲醇-乙酸銨較好.為得到良好的分離度、峰形,以甲醇-乙酸銨流動相按1.2中梯度洗脫,乙酸銨濃度調(diào)至0.04mol/L.圖1為不同波長下9種禁限用色素的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖.2.3色譜類型的選擇喹啉黃、孟加拉紅、堅牢綠、酸性紅52、熒光素鈉、曙紅、酸性綠S、亮黑、熒光桃紅均為水溶性物質(zhì),極性較強(qiáng),色譜類型應(yīng)選為反相,考慮到甲醇-乙酸銨作為流動相的通用性,在—C8、—C18、—CN、—NH2中選擇—C18鍵合基團(tuán)的色譜柱最合適.分離過程中9種色素出現(xiàn)了14個色譜峰,色譜峰較多,為使分離效果好,選用理論塔板數(shù)較高的小粒徑柱子,本實驗采用150mm×2.1mm,2.7μm的C18柱子,分離效果良好.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線方程在優(yōu)化條件下測定9種混合系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,以峰面積Y為縱坐標(biāo),濃度X為橫坐標(biāo),計算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、線性范圍和定量限,結(jié)果見表1.實驗結(jié)果表明,9種化合物線性范圍均為0.2~50mg/L.在稱樣量為2.5g,進(jìn)樣量為5μL時,9種化合物最低測定濃度均為5.0mg/kg.2.5加標(biāo)回收率測定在6份糖果樣品中分別加入不同量的9種禁限用色素,使各個色素加標(biāo)含量分別為5.0mg/kg、10mg/kg、50mg/kg三個濃度水平,按本法處理后測定并計算回收率,結(jié)果見表2.2.6實