柴胡與醋柴胡對(duì)小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比較

柴胡與醋柴胡對(duì)小鼠抑郁模型的疏肝解郁作用比較

柴胡是波形科植物柴胡buurosescorzerinfoll，干燥的根，根據(jù)其屬性，通常被稱為“北柴胡”和“南柴胡”。性味辛、苦,微寒,歸肝、膽、肺經(jīng)。疏散退熱,疏肝解郁,升舉陽(yáng)氣。用于感冒發(fā)熱,寒熱往來(lái),胸脅脹痛,月經(jīng)不調(diào),子宮脫垂,脫肛［1］。柴胡傳統(tǒng)炮制方法有:醋柴胡、鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡,中國(guó)藥典目前只收載醋柴胡。自古便有柴胡“入解表藥生用,清肝炒熟用”的說(shuō)法,在傳統(tǒng)理論中,生柴胡的升散作用較強(qiáng),多用于解表退熱;醋柴胡可以緩和升散之性,降低解表退熱作用,并可增強(qiáng)疏肝止痛作用,多用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經(jīng)不調(diào)等癥。兩者的疏肝解郁作用到底如何呢?故考察醋制前后柴胡疏肝解郁作用差異及其解郁作用機(jī)制,選用小鼠懸尾應(yīng)激、小鼠強(qiáng)迫游泳、利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型［2-6］,比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用的差異。并通過(guò)測(cè)定小鼠全血膽堿酯酶活力對(duì)其疏肝解郁作用機(jī)制進(jìn)行探究。1試劑、儀器和儀器1.1藥材來(lái)源柴胡飲片購(gòu)于遼寧正大祥和藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號(hào)201105245,產(chǎn)地遼寧。1.2試劑利血平注射液,天津金耀氨基酸有限公司公司,批號(hào)1203241;鹽酸氯米帕明,江蘇恩華藥業(yè),批號(hào)H32022974;甲硫酸新斯的明注射液,批號(hào)H110202;乙酰膽堿酯酶(TChE)測(cè)定試劑盒,購(gòu)于南京建成生物工程研究所。1.3儀器日立U-3010型分光光度計(jì),日立公司。1.4動(dòng)物昆明種小鼠,雌雄兼用,體質(zhì)量(18~22)g,由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,清潔級(jí)(CL)。2小鼠全血膽堿酯酶活力測(cè)定2.1生、醋柴胡疏肝解郁作用差異比較2.1.1醋柴胡水煎液的制備分別將生柴胡及3種醋柴胡用水煎煮制成1∶2濃度水煎劑(相當(dāng)于生藥),備用。2.1.2小鼠懸尾試驗(yàn)按文獻(xiàn)方法進(jìn)行試驗(yàn),取小鼠60只。隨機(jī)分成6組,每組10只,分別為生柴胡組、醋柴胡1組(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2組(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3組(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理鹽水陰性對(duì)照組、氯米帕明陽(yáng)性對(duì)照組。給藥組分別給生柴胡及3種醋柴胡水煎劑,參照文獻(xiàn)中給藥方法及劑量,按30mL/kg灌胃給藥,陰性對(duì)照組灌服等容量生理鹽水,陽(yáng)性對(duì)照組灌服氯米帕明20mg/kg。連續(xù)灌胃7d,于末次灌胃給藥后1h后將小鼠尾端2cm處固定于水平面上,使其呈倒掛狀態(tài),頭部離臺(tái)面約30cm,四周以板隔離動(dòng)物視線,記錄小鼠在6min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間為失望時(shí)間。2.1.3小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)按文獻(xiàn)中方法,先做預(yù)試驗(yàn),將小鼠放入水槽(2000mL燒杯,高20cm,直徑14cm,水深10cm,置于水浴鍋內(nèi))中,調(diào)節(jié)水溫保持25℃左右,持續(xù)觀察6min,累計(jì)6min內(nèi)小鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)、僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間(不動(dòng)時(shí)間),將不動(dòng)時(shí)間超過(guò)150s或低于60s者小鼠剔除。將合格老鼠隨機(jī)分組(分組及處理同懸尾實(shí)驗(yàn)),連續(xù)灌胃7d,于末次灌胃1h后按預(yù)試驗(yàn)方法進(jìn)行強(qiáng)迫游泳試驗(yàn),記錄小鼠6min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。2.1.4利血平拮抗試驗(yàn)按文獻(xiàn)中方法,取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組(分組及處理較懸尾試驗(yàn)增加利血平模型組)連續(xù)灌胃給藥7d,末次給藥30min后每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平(0.1mL/log)觀察小鼠眼瞼下垂情況,準(zhǔn)確記錄1h時(shí)的眼瞼下垂度和體溫,觀察自發(fā)活動(dòng)、耳尾顏色及腹瀉等情況。按Rubin分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷下垂度。0度為正常開目;1度為眼瞼下垂1/4;2度為眼瞼下垂1/2;3度為眼瞼下垂3/4;4度為眼瞼完全閉合。2.2醋柴胡疏肝解郁作用機(jī)制探究小鼠全血膽堿酯酶活力測(cè)定取小鼠50只。隨機(jī)分為5組,每組10只,分別為醋柴胡1組(每100kg柴胡用米醋20kg)、醋柴胡2組(每100kg柴胡用米醋40kg)、醋柴胡3組(每100kg柴胡用米醋60kg)、生理鹽水陰性對(duì)照組、甲硫酸新斯的明陽(yáng)性對(duì)照組。給藥組分別給3種醋柴胡水煎劑,按30mL/kg灌胃給藥,陰性對(duì)照組灌服等容量生理鹽水,陽(yáng)性對(duì)照組灌服甲基硫酸新斯的明0.2mg/kg,給藥后1h摘眼球取血,按照試劑盒說(shuō)明書中步驟用化學(xué)比色法測(cè)定小鼠全血膽堿酯酶活力。2.3統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各給藥組均與對(duì)照組進(jìn)行比較,采用單因素方差分析比較。P<0.05時(shí),兩組間差異有顯著性。3醋胡對(duì)小鼠全血膽堿酯酶活力的影響3.1生、醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫懸尾、游泳不動(dòng)時(shí)間、利血平引起小鼠體溫下降、眼瞼下垂的影響從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時(shí)間和大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,并且可以對(duì)抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。結(jié)果見表1~3。3.2醋柴胡中加醋量不同對(duì)于小鼠膽堿酯酶活力的影響從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性,從而減少乙酰膽堿的水解,進(jìn)而達(dá)到解郁的作用。而且與對(duì)照組比較,三組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力,其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力(P<0.01)。結(jié)果見表4。4抗抑郁藥的篩選和使用抑郁癥在中醫(yī)理論中辯證為郁癥,多由于肝郁氣滯所致,而肝郁,多由情志抑郁,氣機(jī)阻滯所致。是“肝氣郁”,“肝氣郁結(jié)”的簡(jiǎn)稱。肝有疏泄的功能,可條暢氣機(jī),喜升發(fā)舒暢,疏泄有度,則氣機(jī)暢達(dá),氣血調(diào)和,疏泄不足,則氣機(jī)郁滯。如因情志不舒,惱怒傷肝,或因其他原因影響氣機(jī)升發(fā)和疏泄,氣郁日久,日久化火,就會(huì)引起肝郁的病癥。治療肝郁癥可通過(guò)疏肝理氣,即疏肝解郁［10-11］。柴胡為中醫(yī)臨床對(duì)抑郁癥治療應(yīng)用廣泛且療效較好的藥物之一。又《素問(wèn)·宣明五氣篇》中說(shuō):“酸入肝”,又酸味具有收斂,固澀的作用。所以醋柴胡相較之于生柴胡,可以緩和生品的升散之性,降低解表退熱作用,卻可增強(qiáng)其疏肝止痛作用［12］。文中選取小鼠懸尾、強(qiáng)迫游泳、利血平所致眼瞼下垂體溫下降等模型均為經(jīng)典的情志和藥物所致的抑郁模型,可用來(lái)篩選和觀察抗抑郁藥物。動(dòng)物在一個(gè)局限環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑而又無(wú)法逃脫后出現(xiàn)不動(dòng)狀態(tài),此狀態(tài)反映了絕望行為［13-15］。本實(shí)驗(yàn)選用氯米帕明為陽(yáng)性對(duì)照,其為臨床常用三環(huán)類抗抑郁藥,用于治療各種抑郁狀態(tài)。主要通過(guò)抑制神經(jīng)元對(duì)釋放于突觸間隙的NA和5-HT的再攝取、又以抑制5-HT的重?cái)z取為主,有效治療抑郁癥［16］。但由于其相應(yīng)的阻斷了膽堿能受體,臨床會(huì)常常表現(xiàn)出口干、便秘、排尿困難、視物模糊、頭暈、嗜睡、體位性低血壓、記憶影響和心動(dòng)過(guò)速等多種不良反應(yīng)［17］,副作用明顯。所以應(yīng)找出新型藥效良好但副作用小的新型抗抑郁藥。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時(shí)間和大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,并可對(duì)抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降,且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。結(jié)果顯示柴胡具有疏肝解郁的作用,且醋柴胡的疏肝解郁作用明顯優(yōu)于生柴胡。這一結(jié)果驗(yàn)證了傳統(tǒng)理論的科學(xué)性,也證明了中藥炮制的重要性,為臨床準(zhǔn)確用藥提供了依據(jù)。臨床上,肝郁患者常表現(xiàn)為兩脅苦滿、腹脹、納減及神志上的異常等,這除了由于個(gè)別臟器的病理性病變外,還與植物神經(jīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)有很大關(guān)系。由于植物神經(jīng)功能紊亂,可影響到人的情緒上的異常改變,亦可影響到消化系統(tǒng)。乙酰膽堿是中樞內(nèi)廣泛存在的一種神經(jīng)介質(zhì),作為植物神經(jīng)節(jié)前纖維和副交感神經(jīng)節(jié)后纖維神經(jīng)遞質(zhì),可以興奮膽堿能神經(jīng),起到調(diào)節(jié)神經(jīng)、消化系統(tǒng)的功能,其可被乙酰膽堿酯酶所水解,膽堿酯酶的活力間接影響著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能［8］。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出