中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所柑橘黃龍病檢測中心通過CMA資質(zhì)認定

龍病檢測中心通過CMACMA資質(zhì)認定PCRPCR技術(shù)，關(guān)鍵詞：柑橘黃龍??；PCRCitrusHuanglongbing(HLB)isaseriousdiseasethatthreatensthecitrusindustryandcausessignificanteconomiclosses.Therefore,establishinganaccurate,rapid,andreliabledetectiontechniqueforHLBisofgreatsignificanceforitspreventionandcontrol.ThispaperintroducesthetechnicalrouteanddetectionmethodsoftheCitrusHuanglongbingDetectionCenteroftheInstituteofEnvironmentandPlantProtectionoftheChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciencesthatpassedtheCMAcertification,includingreal-timefluorescencequantitativePCRtechnologyandtraditionalPCRtechnology,andexperimentalvalidation.Theresultsshowedthatthetechnicalrouteanddetectionmethodhadhighaccuracy,sensitivity,andspecificity,andcouldbeusedfortheearlydiagnosisandmonitoringofCitrusHuanglongbing.Keywords:CitrusHuanglongbing;PCRtechnology;accuracy;sensitivity;specificity柑橘黃龍病是一種由斯里蘭卡萎縮桿菌（CandidatusLiberibacter重危害柑橘產(chǎn)業(yè)。目前，柑橘黃龍病在世界范圍內(nèi)都已有報道。在中國，柑橘黃龍病也已成為柑橘產(chǎn)業(yè)面臨的嚴重問題之一。測技術(shù)就顯得尤為重要。PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性強、快速等優(yōu)CMA資質(zhì)認定的技術(shù)路線和檢測方法，并進行了實驗驗1713份健康柑橘樣品。CTAB法將試驗樣品中的總核酸提取出來，并進行純化、定量PCRABI7500PCRHLB特異性引物和探針，按照一般的PCR反應條件進行PCR反應，根據(jù)內(nèi)參基因數(shù)量PCRPCRHLB16SrDNA基因HLBPCR反應條件進行PCR反應，并用1.2%瓊脂糖凝膠電泳法檢測PCR產(chǎn)物。PCR以臨界閾值CT值≤35為陽性判斷，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測結(jié)1717份（100%）均為陽性，13份健康柑橘樣品均為陰性（圖1A）。PCR以16SrDNA基因片段為目標位點進行PCR擴增，并通過2%瓊脂PCR17份柑橘黃龍病感染的樣品中，有17份（100%）產(chǎn)生了特異性條帶，13份健康柑橘樣品均未產(chǎn)生特異性條帶（圖1B）。PCRPCR技術(shù)對柑橘黃龍病進PCR技術(shù)均能夠準確、快速、特異地檢測出HLB樣品，且能夠避免假陽PCRPCR技術(shù)無需人工工作效率。值得注意的是，本研究中使用的擴增引物和探針均符合HLBCMA異性的特點，可用于柑橘黃龍病的早期診斷和監(jiān)測。該檢測方法的建立，為柑橘黃龍病的防控提供了一種可行的技術(shù)方案。ZhangM，LinH，ChenJ，etal.Developmentofaloop-mediatedisothermalamplificationassayforrapidandspecificdetectionofcandidatusliberibacterasiaticus,thecausativeagentofcitrushuanglongbing[J].JournalofMicrobiology,2014，52(6):488-495.ZhengZ，HeC，ZhangM，etal.Molecularanalysisrevealsdiverseandnewcandidatusliberibacterspeciesincitrus[J].JournalofAppliedMicrobiology,2014，117(1):113-122.SuH，ZhangL，LiW，etal.Developmentandapplicationofloop-mediatedisothermalamplificationfordetectingthecitrushuanglongbingbacterium,candidatusliberibacterasiaticus[J].JournalofMicrobiologyandBiotechnology,2011，21(5):470-477.LiW，HartungJS，LevyL，etal.Quantitativereal-timePCRfordetectionandidentificationofcandidatusliberibacterspeciesassociatedwithcitrushuanglongbing[J].JournalofMicrobiologyMethods,2006，66(1):104-115.LiW，HartungJS，LevyL，etal.Quantitativereal-timePCRfordetectionandidentifi