點(diǎn)刺委中放血治療實(shí)驗(yàn)性腰椎間盤(pán)突出癥的機(jī)制研究

點(diǎn)刺委中放血治療實(shí)驗(yàn)性腰椎間盤(pán)突出癥的機(jī)制研究

根據(jù)許多研究，神經(jīng)傳導(dǎo)速度與白細(xì)胞介素1'（il-1）的水平以及腰椎突出癥（lidt）的治療密切相關(guān)。在許多研究中，這兩個(gè)指標(biāo)被用作評(píng)估治療效果的參考之一。資料顯示:提高神經(jīng)傳導(dǎo)速度與降低IL-1α水平是針灸治療LIDP的重要機(jī)制之一,但是治療方法多選用毫針、電針與穴位注射,而點(diǎn)刺放血治療LIDP機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究鮮有報(bào)道?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中多處提到治療腰腿痛均采用委中穴點(diǎn)刺放血的療法,臨床報(bào)道點(diǎn)刺委中穴治療LIDP是有效方法之一。本實(shí)驗(yàn)試圖通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(sciaticnerveconductionvelocity,SNCV)和髓核組織中IL-1α水平變化來(lái)探討點(diǎn)刺“委中”放血治療LIDP的機(jī)制。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康新西蘭家兔40只,雌雄各半,體重1.5～2.0kg,由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2主試劑和材料IL-1α酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司;中號(hào)三棱針,蘇州康年醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)。1.3動(dòng)物病理模型及ct模型的建立40只家兔完全隨機(jī)分為4組:A為空白組,B為L(zhǎng)IDP模型組,C為點(diǎn)刺委中組,D為點(diǎn)刺非穴對(duì)照點(diǎn)組,每組10只。動(dòng)物首先禁食不禁水1d,B、C、D組用自制的LIDP動(dòng)物病理模型造模器造模。抽樣腰椎間盤(pán)CT檢測(cè)造模成功后,第2天A、B組家兔捆綁5min不作處理,C、D組分別點(diǎn)刺“委中”與對(duì)照點(diǎn)放血,各組治療均每天1次,左右交替,連續(xù)處理7d。第9天(即最后1次處理后24h)所有家兔取材并測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。1.4l6-7腰椎間隙有限元模型的建立參照沈?yàn)闂潏?bào)道的方法,將直徑1.6mm的上頜竇穿刺針改制為自制的LIDP動(dòng)物病理模型造模器,建立LIDP病理模型。在無(wú)菌條件下,取左下腹部旁正中切口,顯露椎間隙前方的前縱韌帶及椎間隙后,用造模器于L6-7椎間隙取45度斜徑位向右刺入7.80～8.00mm,固定針管,用平頭針芯將針管內(nèi)椎間盤(pán)組織推至后縱韌帶的前方,造成L6-7椎間盤(pán)右側(cè)突出模型?？p合傷口,術(shù)后將家兔送回動(dòng)物房飼養(yǎng)。1.5點(diǎn)1:“委中”參照林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》常用動(dòng)物穴位定位法取家兔雙側(cè)“委中”穴。對(duì)照點(diǎn)設(shè)在“委中”穴內(nèi)側(cè)旁開(kāi)1.0cm。C、D組家兔定穴剪毛,并用力拉直家兔的膝關(guān)節(jié),皮膚繃緊,以三棱針對(duì)準(zhǔn)消毒的“委中”穴或?qū)φ拯c(diǎn)處,迅速刺入0.4～0.6cm,立即退出,使出血1～2滴,再在針刺處消毒。1.6snpv的測(cè)定SNCV的測(cè)定:在20%的烏拉坦(4mL/kg)耳緣靜脈注射麻醉下,用2根長(zhǎng)度為13mm、直徑為0.28mm的電極分別刺入股骨頸的上下兩端作為坐骨神經(jīng)上端的刺激電極,另外再用2根電極刺入股骨外上髁的上緣及其上0.5cm處作為坐骨神經(jīng)下端的刺激電極,無(wú)關(guān)電極置于家兔臀部。在家兔的外踝上1cm處向內(nèi)上方腓腸肌肌腹刺入一同心圓電極以記錄電刺激誘發(fā)的腓腸肌動(dòng)作電位,予BL-410生理信號(hào)記錄系統(tǒng)記錄神經(jīng)干興奮傳導(dǎo)速度。電刺激器的刺激參數(shù)為:頻率1kHz,時(shí)間常數(shù)0.001s,刺激方式:串刺激,波寬:0.05ms,波間隔:500ms,強(qiáng)度:5.0mV,串長(zhǎng):10個(gè)/次。根據(jù)分別刺激坐骨神經(jīng)兩點(diǎn)誘發(fā)腓腸肌動(dòng)作電位的M波潛伏期的差值(L)及兩刺激點(diǎn)間的距離(D),計(jì)算出SNCV。計(jì)算公式為:SNCV=D/L。IL-1α含量的測(cè)定:耳緣靜脈注射40mL空氣處死動(dòng)物,取L6-7椎間盤(pán)的髓核組織,用生理鹽水沖洗殘留物,稱重,按2mL/400mg加入生理鹽水,用玻璃勻漿器研磨40～50次,制成髓核組織勻漿,離心(4000r/min,4℃,10min)后,取上清液,-20℃低溫保存。IL-1α含量采用ELISA法測(cè)定,具體步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。1.7準(zhǔn)差—統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(—x±s)(x—±s)表示,計(jì)量資料的組內(nèi)前后比較用配對(duì)t檢驗(yàn),多組間比較用單因素方差分析,繼以LSD檢驗(yàn),或用Tamhane'sT2法。2結(jié)果2.1各組snpv的比較如表1所示,造模前各組SNCV比較差異均無(wú)顯著性意義(P>0.05);除空白組外其它各組家兔造模后的SNCV均顯著低于造模前(P<0.01);各組治療前后SNCV比較,點(diǎn)刺委中組治療后SNCV顯著高于治療前(P<0.01),其它各組治療后的SNCV與造模后比較差異均無(wú)顯著性意義。組間比較,造模后模型組、點(diǎn)刺委中組、點(diǎn)刺非穴組SNCV與空白組比較差異均有顯著性意義(P<0.05);治療后模型組、點(diǎn)刺非穴組SNCV與空白組比較差異均有顯著性意義(P<0.05),而點(diǎn)刺委中組SNCV與空白組比較差異無(wú)顯著性意義;各組治療前后SNCV差值比較,點(diǎn)刺委中組顯著高于空白組(P<0.01)、模型組(P<0.05)與非穴組(P<0.05),而空白組、模型組與非穴組3組的SNCV差值比較差異均無(wú)顯著性意義。提示點(diǎn)刺“委中”穴后LIDP家兔的SNCV明顯增快。2.2點(diǎn)刺委對(duì)髓核組織中il-1含量的影響如表2所示,模型組腰椎間盤(pán)髓核組織中IL-1α含量顯著高于空白組(P<0.01);點(diǎn)刺委中組髓核組織中IL-1α含量顯著低于模型組(P<0.01)和非穴對(duì)照組(P<0.05);而非穴對(duì)照組IL-1α含量與模型組比較差異無(wú)顯著性意義。提示點(diǎn)刺“委中”穴可降低LIDP家兔髓核組織中IL-1α的含量。3委中穴對(duì)lidp神經(jīng)再生的治療作用取委中刺絡(luò)放血治療腰腿痛早在漢代就有記載,《素問(wèn)·刺腰痛篇》指出:“足太陽(yáng)脈令人腰痛,引項(xiàng)脊尻背如重狀,刺其郄中,太陽(yáng)正經(jīng)出血,春無(wú)見(jiàn)血。”刺血療法又稱放血療法,古稱“啟脈”“刺絡(luò)”。它是用三棱針點(diǎn)刺放血,刺破穴位或淺表血絡(luò),放出少量血液,以治療疾病為目的的一種方法。古人對(duì)此法十分重視,《素問(wèn)·血?dú)庑沃酒吩?“凡治病先去其血?！薄鹅`樞·九針十二原》更提出“宛陳則除之”的治療原則?，F(xiàn)代研究表明:痛癥、不仁、癱瘓均與經(jīng)絡(luò)氣血瘀滯有關(guān),刺血通過(guò)疏通經(jīng)脈中凝滯的氣血而達(dá)到止痛的目的,又有祛瘀生新之效;此外,刺血尚能改善微循環(huán)障礙,清除病理產(chǎn)物,促進(jìn)局部生理生化的良性改變。大量的臨床資料表明委中穴點(diǎn)刺拔罐治療急性腰腿痛方法簡(jiǎn)便,起效迅速,療效顯著。委中穴,又名血郄、郄中等,屬于足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的合穴,膀胱經(jīng)自腰背而來(lái)的兩條支脈皆下行會(huì)于委中,而且現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn):支配委中穴的傳入神經(jīng)投射到脊髓的節(jié)段與腰背部神經(jīng)節(jié)段的分布在后根神經(jīng)節(jié)和脊髓有相重疊的部分,因此委中穴常用來(lái)治療腰背疾病。此外,《雜病穴法歌》記載:“腰痛環(huán)跳委中神。”明·朱權(quán)《乾坤生意》“四總穴歌”記載的“腰背委中求”則是對(duì)其主治作用的經(jīng)典概括。由此可見(jiàn),自古以來(lái)委中就是治療LIDP的常用穴。采用神經(jīng)電生理學(xué)檢查手段可了解LIDP神經(jīng)根的功能狀態(tài),彌補(bǔ)了影像學(xué)的不足。其中神經(jīng)傳導(dǎo)速度就是傳統(tǒng)的電生理主要指標(biāo),它對(duì)神經(jīng)根性損傷的診斷有一定的價(jià)值。趙偉等對(duì)犬進(jìn)行LIDP造模后發(fā)現(xiàn)椎間盤(pán)突出組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯下降,李永方等證明針刺治療能使大鼠損傷的神經(jīng)得到一定的修復(fù),使SNCV明顯加快。因此,損傷段神經(jīng)傳導(dǎo)速度的恢復(fù)標(biāo)志著神經(jīng)再生的順利通過(guò),可作為早期觀察神經(jīng)再生、判斷神經(jīng)損傷與功能恢復(fù)的一項(xiàng)可靠指標(biāo)。IL-1α是重要的炎癥介質(zhì)。在正常椎間盤(pán)組織中無(wú)IL-1α產(chǎn)生,而LIDP髓核中IL-1α增加,該物質(zhì)可直接誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥,或通過(guò)刺激某些疼痛介質(zhì)如促進(jìn)PGE2的合成,使初級(jí)傳入神經(jīng)元去極化產(chǎn)生疼痛。局部只需達(dá)到10-5mol/L濃度即可直接致痛,即使在更低濃度10-8mol/L也可使組織對(duì)其它致痛物質(zhì)如白三烯、緩激肽等敏感性增加,從而造成坐骨神經(jīng)痛。趙劍等對(duì)LIDP患者手術(shù)中取出的髓核組織中IL-1α的含量進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)患者疼痛程度與髓核中IL-1α的含量相關(guān),提示IL-1α在疼痛發(fā)生中可能起到某種作用。Wehling等對(duì)小鼠神經(jīng)根痛模型以IL-1α受體拮抗劑做實(shí)驗(yàn)性治療,發(fā)現(xiàn)疼痛癥狀可明顯緩解,這一現(xiàn)象也提示IL-1α與疼痛密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察點(diǎn)刺“委中”放血對(duì)實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔的療效,結(jié)果顯示造模后髓核組織中IL-1α含量顯著增加,而SNCV顯著減慢;點(diǎn)刺“委中”放血可降低LIDP家兔髓核組織中IL-1α含量,增快LIDP家兔的SNCV,與模型組和非穴對(duì)照組比較差異有顯著性意義;非穴組髓核組織中I