幾種磷酸緩沖液的配制方法介紹

幾種磷酸緩沖液的配制方法介紹緩沖液是一種可以抵抗溶液中因加入少量酸、堿而產(chǎn)生的pH變化的液體。一般由弱酸及其弱酸鹽或者弱堿及其弱堿鹽配制而成。生物的生化反應(yīng)，很多都需要一個(gè)穩(wěn)定pH環(huán)境才能發(fā)生，比如血液就是一種緩沖體系。除了pH會(huì)影響生化反應(yīng)效率外，緩沖液中的某些離子也可能會(huì)產(chǎn)生一些不必要的反應(yīng)，妨礙目標(biāo)實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行。因此在生命科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)中，研究者們需要慎重地選擇緩沖體系。本期就為大家整理一些常用緩沖液的配制方法。磷酸緩沖液（PBS）PBS的緩沖pH值范圍非常廣，可配置各種pH值的酸、堿、中性緩沖液，是最常見的緩沖體系之一。配制酸性磷酸緩沖液可直接用NaH?PO?或KH?PO?，pH范圍在1-5；堿性緩沖液可直接用Na?HPO?或K?HPO?，pH范圍在9-12；中性緩沖液則用等濃度的NaH?PO?和Na?HPO?或者等濃度的NaH?PO?和Na?HPO?溶液混合，pH在5.5-8.5。PBS的緩沖能力強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣，但也有缺點(diǎn)：①易與常見的鈣離子Ca2?、鎂離子Mg2?等重金屬離子結(jié)合形成沉淀。②會(huì)抑制某些反應(yīng)，比如抑制某些酶的催化作用。以0.2mol/L中性磷酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（緩沖液的摩爾濃度指的是磷酸根的濃度，所以若稀釋后pH值有微小變化需要調(diào)整，不要用帶有磷酸根的溶液）：磷酸氫二鈉（Na?HPO?*，0.2mol/L）：28.39g/L；磷酸二氫鈉（NaH?PO?*，0.2mol/L）：24g/L*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的PBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制100mLPBS緩沖液所用量如下圖所示：硼酸緩沖液（BBS）BBS一般由硼砂和硼酸配制，是堿性范圍內(nèi)常用緩沖液。BBS的缺點(diǎn)是能和很多代謝產(chǎn)物生成絡(luò)合物，比如和糖反應(yīng)形成穩(wěn)定的復(fù)合物而導(dǎo)致緩沖能力下降。以0.2mol/L硼酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（如需后續(xù)調(diào)整pH，同磷酸緩沖液一樣，不要用含有硼酸根的溶液）：硼砂（Na?B?O?·10H?O*，0.2mol/L）：76.27g/L；硼酸（H?BO?*，0.2mol/L）：12.37g/L*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的BBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制10mLBBS緩沖液所用量如下圖所示：需要注意的是：硼砂易失去結(jié)晶水，必須保存在帶塞子的瓶中。碳酸緩沖液（CBS）CBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制，多為堿性。以0.2mol/L碳酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（pH調(diào)整，同上）：碳酸鈉（Na?CO?*，0.2mol/L）：21.2g/L；碳酸氫鈉（NaHCO?*，0.2mol/L）：16.8g/L*注意是否為水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的CBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制50mLCBS緩沖液所用量如下圖所示：檸檬酸緩沖液（CPBS）CPBS一般由碳酸和碳酸氫鈉配制，常用于分子實(shí)驗(yàn)的雜交處理液和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù)、暴露等。檸檬酸容易與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)中應(yīng)避免鈣離子混入。以0.2mol/L檸檬酸緩沖液為例，不同摩爾濃度緩沖液加純化水稀釋即可（pH調(diào)整同上）：檸檬酸（C?H?O?*，0.2mol/L）：38.4g/L；檸檬酸鈉（C?H?Na?O?*，0.2mol/L）：51.6g/L*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。不同pH的CPBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制20mLCPBS緩沖液所用量如下圖所示：Good's緩沖液Good's緩沖液又稱為兩性離子緩沖液。由于不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程，對酶反應(yīng)等也無抑制作用，所以非常適合于對易變性或者pH敏感型蛋白的研究和實(shí)驗(yàn)。常用的Good's緩沖液有20多種，這里只簡述在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常見的三種。1.MES緩沖液MES可固體按照摩爾濃度計(jì)算用量，配成液體后，通過氫氧化鈉來調(diào)整PH。以0.2mol/LMES緩沖液為例：MES（C?H??NO?S*，0.2mol/L）：39.05g/L；*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量。常用有效緩沖范圍為pH5.5-7.7。2.Tris緩沖液①

Tris-HCl緩沖液Tris固體按照摩爾濃度計(jì)算用量，配成液體后，通過HCl來調(diào)整pH。以0.2mol/LTris-HCl緩沖液為例：MES（C?H??NO?*，0.2mol/L）：24.2g/L；*注意是否是水合物，水合物需根據(jù)含水量重新計(jì)算固體用量②

Tris-EDTA緩沖液常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，用于DNA的溶解和保存等。以1×TE緩沖液(pH8.0)為例：●1MTris-HCl（pH8.0）：稱取Tris12.12g，加純化水80mL溶解，滴加濃HCl調(diào)整pH至8.0，后定容至100mL?！?MEDTA（pH8.0）：稱取EDTA-Na?·H?O18.6g，加純化水40mL，劇烈攪拌，滴加NaOH溶液調(diào)整pH至8.0，固體物質(zhì)充分溶解后，定容至50mL（EDTA-Na?需在pH8.0時(shí)才會(huì)溶解）?！?×TE（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0）：量取10mL1MTris-HCl，1mL1MEDTA溶液，充分混勻后，定容至1L③TAE緩沖液將上述Tris-EDTA緩沖液調(diào)整pH的鹽酸換成冰乙酸，即是TAE緩沖液。注意：1.Tris溶液會(huì)吸收空氣中的二氧化碳，所以應(yīng)保存在使用塞子的瓶中。2.Tris緩沖液在不同溫度下，呈現(xiàn)的pH是不同的，配置時(shí)應(yīng)考慮使用環(huán)境，最好在使用環(huán)境溫度條件下進(jìn)行配制。3.HEPES緩沖液緩沖范圍在中性附近。由于可以在敞開式容器中保持穩(wěn)定的pH，所以常用于細(xì)胞培養(yǎng)，或者診斷試劑的保存溶液。以1M，pH7.0的HEPES溶液為例：HEPES稱取119.15g，溶解在400mL純化水中，用NaOH溶液調(diào)整pH至7.0，后定容至500mL。Tips緩沖液是弱酸及其弱酸鹽或弱堿及其弱堿鹽形成的共軛體。其對pH變化的緩沖能力，和酸堿的比例、解離常數(shù)等有關(guān)。酸堿的摩爾比越接近1:1，緩沖能力越大。在pH=pKa±1的范圍