er、pr、her-2、e-cadherin、ck56檢測(cè)與浸潤性乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究

er、pr、her-2、e-cadherin、ck56檢測(cè)與浸潤性乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究

乳腺癌是一種異質(zhì)性疾病，其發(fā)生、發(fā)展、合并和轉(zhuǎn)移是多個(gè)因素的過程。臨床表現(xiàn)相似，病理形態(tài)復(fù)雜，但生物學(xué)行為和臨床預(yù)后不穩(wěn)定。近年其發(fā)病率有上升趨勢(shì),并傾向年輕化。為能及早明確診斷,改善臨床療效、提高患者的生存率,正確評(píng)價(jià)臨床預(yù)后,本文對(duì)64例浸潤性乳腺癌(invasivebreastcancer,IBC)患者,應(yīng)用免疫組化對(duì)ER、PR、HER-2、E-cadherin、CK5/6進(jìn)行檢測(cè),探討其臨床病理特征與臨床預(yù)后的關(guān)系。1材料和方法1.1已頂期患者收集2004年～2009年肇慶市第一人民醫(yī)院64例乳腺腫物手術(shù)切除標(biāo)本并經(jīng)病理診斷為IBC的病例。患者均為女性,以發(fā)現(xiàn)腋窩腫物或乳房腫物就診。30例患者已絕經(jīng),34例患者未絕經(jīng)。年齡分布:≤30歲2例,>30≤40歲11例,>40≤50歲21例,>50≤60歲15例,>60≤70歲13例,>70歲2例。部位:左側(cè)35例,右側(cè)29例。腫瘤直徑:≤2cm10例,>2≤5cm47例,>5cm7例。手術(shù)方式:47例為乳腺改良根治術(shù),4例為乳腺根治術(shù),8例為乳腺單純切除術(shù)+區(qū)域淋巴結(jié)切除術(shù),5例為乳腺單純切除術(shù)。術(shù)后治療:參照St.Gallen或美國全國綜合腫瘤網(wǎng)(NCCN)臨床指南進(jìn)行術(shù)后化療、放療。1.2乳腺癌組織病理學(xué)檢測(cè)復(fù)習(xí)原病理診斷資料,找出病理蠟塊組織,重新切片,每例切片7張,進(jìn)行免疫組化染色。組織標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,大體檢查取材,石蠟包埋,3～4μm厚連續(xù)切片,常規(guī)HE染色,光鏡觀察其組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。根據(jù)Elston和Ellis乳腺癌組織學(xué)分級(jí)法進(jìn)行半定量評(píng)測(cè)分級(jí),腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況通過對(duì)前哨淋巴結(jié)活檢或腋淋巴結(jié)分離進(jìn)行組織學(xué)鑒定。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟和美國癌癥聯(lián)合會(huì)合作制定的第7版腫瘤TNM分期對(duì)乳腺癌進(jìn)行分期。組織學(xué)分類按照2003年WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類。免疫組化采用MaxVision快捷法,一抗ER、PR、HER-2、CK5/6、E-cadherin全為工作液,ER(SP1)、PR(SP2)、HER-2(CB11)、CK5/6(D5/16B4)、E-cadherin(A42C7),二抗為即用型MaxVision試劑,均為福州邁新公司產(chǎn)品,ER、PR為EDTA(pH9.0)抗原修復(fù),HER-2、CK5/6及E-cadherin為檸檬酸鹽(pH6.0)抗原修復(fù),DAB顯色,蘇木精對(duì)比染色。切片中正常乳腺組織的標(biāo)記作為內(nèi)對(duì)照。64例患者進(jìn)行生存狀況的追蹤隨訪,終點(diǎn)為繼發(fā)于腫瘤而死亡,獲得37例患者的生存狀況資料。5年生存率(5年OS)的計(jì)算從診斷確立到腫瘤引起的死亡,或隨訪的終止。1.3erin胞膜和或胞質(zhì)的表征各種蛋白標(biāo)記物陽性結(jié)果的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):陽性著色物質(zhì)為棕黃色,ER和PR細(xì)胞核著色為陽性,CK5/6及E-cadherin胞膜和(或)胞質(zhì)著色為陽性,無陽性細(xì)胞為(-),陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為(+),25%～50%為(++),>50%為(+++)。HER-2的評(píng)價(jià)參照ASO/CAP指南推薦的評(píng)分系統(tǒng),根據(jù)胞膜著色強(qiáng)度評(píng)定分為0、(+)、(++)、(+++),>30%浸潤癌細(xì)胞出現(xiàn)連續(xù)而完整的強(qiáng)胞膜著色為(+++),(+++)才為真正的陽性。1.4an等級(jí)相關(guān)分析采用SPSS13.0軟件,各種蛋白表達(dá)間的比較采用Speaman等級(jí)相關(guān)分析。各種蛋白表達(dá)與臨床病理特征的比較,根據(jù)資料的性質(zhì)采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法。生存分析采用Kaplan-Meier法,生存曲線間的比較采用Log-rank檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1影像學(xué)以《病理組織學(xué)》第5例,整合不同化療藥物,5例64例患者均為女性,中位年齡49.5歲(27～72歲)。組織學(xué)類型:浸潤性導(dǎo)管癌58例,浸潤性小葉癌2例,髓樣癌、化生性癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、黏液癌各1例。組織學(xué)分級(jí):Ⅰ級(jí)13例,Ⅱ級(jí)33例,Ⅲ級(jí)18例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例,淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移21例。臨床分期:Ⅱ期38例,Ⅲ期26例。隨訪37例,9例死亡。2.2er、pr、h-3、hf-4e-cadhenin,者以3/464例IBC中,ER、PR、HER-2、E-cadherin、CK5/6的陽性表達(dá)率分別為60.93%(39/64)、56.25%(36/64)、37.50%(24/64)、89.06%(57/64)、10.94%(7/64)。ER、PR陽性著色定位于胞核,HER-2定位于胞膜,CK5/6及E-cadherin定位于胞膜或胞質(zhì)(圖1～5)。ER、PR、HER-2、E-cadherin、CK5/6與其組織學(xué)類型表達(dá)關(guān)系(表1)。2.3統(tǒng)計(jì)分析2.3.1er、her-2、ck5/6表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS13.0軟件處理,采用Speaman等級(jí)相關(guān)分析,ER與PR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.646,P=0.000),ER與HER-2、CK5/6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.320,P=0.010;r=-0.385,P=0.002),PR與HER-2、CK5/6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.392,P=0.013;r=-0.362,P=0.003,表2)。2.3.2臨床病理特征的患者pr、he-4和e-cadhenin的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法分析,ER、CK5/6在組織學(xué)分級(jí)中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有臨床病理特征的患者在不同年齡、是否絕經(jīng)、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期之間PR、HER-2和E-cadherin均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。ER、CK5/6在患者的不同年齡、是否絕經(jīng)、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表3)。2.3.3os:p型患者的組織學(xué)分級(jí)越高,總生存率(OS)越低(OS:P=0.048)?；颊叩牟煌挲g、是否絕經(jīng)、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與OS相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OS:P>0.05,表4)。2.3.4e-cadhenin陽性患者與陰性患者os的比較采用Kaplan-Meier法,生存曲線間的比較采用Log-rank檢驗(yàn),OS:HER-2或CK5/6陽性患者較陰性患者為低(OS:P=0.048和P=0.041)。E-cadherin陽性患者較陰性患者OS高(OS:P=0.038)。但ER、PR的表達(dá)與總生存率相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OS:P>0.05,表5)。3her-2在乳腺癌患者中的表達(dá)術(shù)后乳腺癌患者臨床預(yù)后不穩(wěn)定因素是受多方面影響的,選擇合理靶向藥物臨床治療,減少非靶向藥物治療帶來的副作用,可降低腫瘤復(fù)發(fā),提高臨床療效,還可對(duì)其腫瘤性質(zhì)臨床預(yù)后的判斷提供依據(jù)。目前免疫組化技術(shù)在乳腺癌患者中的應(yīng)用越來越成熟,被廣泛應(yīng)用在乳腺癌中的ER、PR、HER-2、E-cadherin、CK5/6檢測(cè)技術(shù),不僅作出病變性質(zhì)診斷,還對(duì)其病變性質(zhì)在臨床預(yù)后關(guān)系選擇個(gè)性化治療提供依據(jù)。探討其病理學(xué)特征與臨床預(yù)后關(guān)系,可提高對(duì)腫瘤臨床療效的評(píng)估。ER、PR激素受體存在正常乳腺上皮細(xì)胞的胞核內(nèi),有調(diào)節(jié)性器官細(xì)胞的生長發(fā)育作用。乳腺癌細(xì)胞仍保留對(duì)ER、PR的表達(dá)。林敏等研究發(fā)現(xiàn)ER、PR在乳腺癌的陽性表達(dá)率分別為67%、45%,ER陽性患者較陰性患者5年OS高,PR陽性與5年OS相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HER-2又稱c-erb-B2或neu,為原癌基因,是人類表皮生長因子受體2基因,位于17號(hào)染色體17q11.2-21,編碼一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量為1.85×105的跨膜糖蛋白,具有酪氨酸激酶活性,主要在人體的胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá),它參與多種組織器官的生長發(fā)育,而在成年正常組織常以單拷貝存在,表達(dá)水平低。HER-2是1985年由Coussens等在細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的新的酪氨酸激酶基因,其大部分的序列與人類表皮生長因子(EGF)受體的序列相似,且在細(xì)胞表面接近人EGF而命名為HER-2的。HER-2過表達(dá)的意義,于1987年由Slamon等首次報(bào)道,在對(duì)189例原發(fā)性乳腺癌的研究中,HER-2基因過表達(dá)的患者平均生存期僅為3年,而HER-2陰性患者為6～7年,故提出HER-2基因擴(kuò)增預(yù)示乳腺癌患者有不良的預(yù)后。吳強(qiáng)曾觀察乳腺上皮增生和乳腺癌中HER-2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)正常乳腺上皮不表達(dá)HER-2,增生上皮有15%的HER-2表達(dá)率,導(dǎo)管原位癌的表達(dá)率上升為70%,而在浸潤性導(dǎo)管癌僅有43%的表達(dá)率,其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率為64%,故認(rèn)為HER-2過表達(dá)是乳腺癌發(fā)生過程的早期事件,同時(shí)對(duì)乳腺癌的轉(zhuǎn)移也起重要作用。而Hussein等研究發(fā)現(xiàn)HER-2在乳腺癌中表達(dá)為10%～34%,其表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān),尤其在浸潤性導(dǎo)管癌HER2蛋白表達(dá)明顯高于導(dǎo)管內(nèi)癌,HER-2與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān),提示乳腺癌是伴隨著HER-2、ER、PR的表達(dá)改變而進(jìn)展的。張晟等對(duì)1568例乳腺癌患者的研究發(fā)現(xiàn)HER-2表達(dá)陽性組患者具有年齡較小,腫瘤體積較大,組織學(xué)分級(jí)較差,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較多,預(yù)后較差的特點(diǎn)。周梅等對(duì)40例原發(fā)性乳腺癌的研究發(fā)現(xiàn)HER-2在雙乳癌中的表達(dá)較單乳癌高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,故認(rèn)為HER-2可能與雙側(cè)原發(fā)性乳腺癌發(fā)病有關(guān),并可能成為高?；颊叩念A(yù)測(cè)因子。陳玲等研究發(fā)現(xiàn)ER與PR表達(dá)呈正相關(guān),HER-2與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān),PR蛋白的合成受ER調(diào)控,其表達(dá)水平間接提示ER功能,ER在雌激素作用下可在轉(zhuǎn)錄水平抑制HER-2的表達(dá),當(dāng)ER表達(dá)障礙或功能喪失時(shí),HER-2表達(dá)會(huì)增強(qiáng),而HER-2過表達(dá)則阻止內(nèi)分泌治療抗增殖反應(yīng),故PR高表達(dá)者有較好的療效和較長的生存時(shí)間;同時(shí),ER、PR、HER-2與患者年齡、腫瘤體積、是否絕經(jīng)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯相關(guān)性,可認(rèn)為ER、PR及HER-2的表達(dá)與臨床各因素?zé)o明顯相關(guān)性,提示其可作為獨(dú)立的預(yù)后因素指導(dǎo)乳腺癌的治療。Lamy等通過DNA或蛋白質(zhì)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),ER、PR、HER-2在乳腺癌細(xì)胞的mRNA水平具有明顯表達(dá),因此,除常規(guī)的手術(shù)、化療及放療治療手段外,內(nèi)分泌治療亦是乳腺癌重要的治療方法。本研究中ER、PR陽性表達(dá)分別為60.93%、56.25%,PR的表達(dá)與OS相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與林敏等的研究結(jié)果相似。HER-2表達(dá)陽性患者有生存期短,預(yù)后較差的特點(diǎn),與張晟等研究結(jié)果一致。HER-2表達(dá)率為37.5%,HER-2與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與Hussein等的研究結(jié)果基本一致。HER-2與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān),ER與PR表達(dá)呈正相關(guān),ER、PR、HER-2與患者年齡、腫瘤體積、是否絕經(jīng)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯相關(guān)性,與陳玲等的研究結(jié)果一致。E-cadherin為一種相對(duì)分子質(zhì)量為1.2×105的跨膜糖蛋白,上皮細(xì)胞鈣離子依賴的黏附分子家族成員之一,在組織的生長發(fā)育中發(fā)揮重要作用,其功能的降低或喪失可導(dǎo)致細(xì)胞連接的破壞,與腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)。宋聚民等研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin陽性患者較陰性患者生存率高,E-cadherin表達(dá)減低或缺失者腫塊較大,易發(fā)生腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,分期晚、分化差、復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率高的特點(diǎn),說明E-cadherin表達(dá)下調(diào)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移,多因素分析顯示E-cadherin表達(dá)水平是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。劉喜波等研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin在乳腺癌中的表達(dá)明顯降低,與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān),E-cadherin表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER和PR的表達(dá)水平無相關(guān)性。本研究中E-cadherin陽性患者較陰性患者生存率高,與宋聚民等研究結(jié)果一致;E-cadherin表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER和PR的表達(dá)水平無相關(guān)性,與劉喜波等研究結(jié)果一致。CK5/6是一種基底細(xì)胞型角蛋白,在乳腺定向干細(xì)胞、腺中間細(xì)胞、肌上皮中間細(xì)胞有表達(dá),在腺上皮終端細(xì)胞及肌上皮終端細(xì)胞不表達(dá)。鄧再興等研究發(fā)現(xiàn),IBC組織16.6%有CK5/6的表達(dá),且大部分為高級(jí)別,說明癌細(xì)胞介于腺上皮和肌上皮的中間分化狀態(tài),來源于乳腺的原始干細(xì)胞或者說原始狀態(tài)分化的乳腺癌,不同于傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌呈腺上皮分化狀態(tài)。畢曉峰等研究發(fā)現(xiàn)CK5/6陽性表達(dá)占乳腺癌總數(shù)的14.72%,與ER陰性表達(dá)具有相關(guān)性,CK5/6表達(dá)與患者年齡、是否絕經(jīng)、腫瘤大小、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān),CK5/6表達(dá)陽性與陰性的乳腺癌比較,生存期短,且預(yù)后差。Sorlie等利用基因芯片分析115例乳腺惡性腫瘤,顯示乳腺惡性腫瘤可分為5種分子亞型,基底細(xì)胞樣型(ER-、HER-2-、CK5/6+)、HER2過表達(dá)型(ER-、HER-2+)、正常乳腺樣型(ER-、HER-2-、CK5/6-)和2個(gè)腺腔上皮樣型(ER+、HER-2+/-)。CK5/6可作為分子分型中基底細(xì)胞樣型乳腺癌的特征性標(biāo)記物。林敏等研究發(fā)現(xiàn)