微生物的分類鑒定技術(shù) 課件

情境一微生物的分類鑒定技術(shù)目錄項目一：普通光學(xué)顯微鏡的操作技術(shù)項目二：染色與細(xì)菌的細(xì)胞形態(tài)觀察項目三：酵母和霉菌等細(xì)胞形態(tài)觀察項目四：常見微生物群體形態(tài)觀察項目五：微生物鑒定用常規(guī)生化反應(yīng)試驗項目一普通光學(xué)顯微鏡的操作技術(shù)顯微鏡是我們研究微生物重要的也是最基本的工具。我們只有借助于顯微鏡才能看得清這些微小的生物，觀察它們的形態(tài)結(jié)構(gòu)才能對它們的種類做個基本的判斷。微生物的發(fā)現(xiàn)史世界上第一臺顯微鏡是荷蘭眼鏡商詹森（HansJanssen）（左圖）在1604年發(fā)明的。（右圖）

1665年，英國的物理學(xué)家羅伯特·胡克（RobertHooke,1635～1703）（左圖）用自己設(shè)計并制造的顯微鏡（右下圖）觀察櫟樹軟木塞切片時發(fā)現(xiàn)其中有許多小室，狀如蜂窩，稱為“cella”，這是人類第一次發(fā)現(xiàn)細(xì)胞，不過，胡克發(fā)現(xiàn)的只是死的細(xì)胞壁。胡克的發(fā)現(xiàn)對細(xì)胞學(xué)的建立和發(fā)展具有開創(chuàng)性的意義，其后，生物學(xué)家就用“cell”一詞來描述生物體的基本結(jié)構(gòu)。1674年，荷蘭布商列文·虎克(AntonievanLeeuwenhoek,1632～1723)（上圖）為了檢查布的質(zhì)量，親自磨制透鏡，裝配了高倍顯微鏡（300倍左右）（下圖），并觀察到了血細(xì)胞、池塘水滴中的原生動物、人類和哺乳類動物的精子，這是人類第一次觀察到完整的活細(xì)胞。列文·虎克把他的觀察結(jié)果寫信報告給了英國皇家學(xué)會，得到英國皇家學(xué)會的充分肯定，并很快成為世界知名人士。列文·虎克的一生致力于在微觀世界中探索，發(fā)表論文402篇，其中《列文·虎克發(fā)現(xiàn)的自然界的秘密》是人類關(guān)于微生物研究的最早專著。否定了自然發(fā)生說證實發(fā)酵由微生物引起（酒精發(fā)酵）巴氏滅菌法免疫學(xué)---提出了預(yù)防接種措施（制備了狂犬疫苗）法國微生物學(xué)家、化學(xué)家巴斯德（LouisPasteur，1822-1895）是近代微生物學(xué)的奠基人。

柯赫——細(xì)菌學(xué)的奠基人提出了柯赫法則建立固體培養(yǎng)基分離純化微生物技術(shù)染色觀察和顯微攝影技術(shù)從列文虎克第一次看到細(xì)菌以來，300多年來微生物學(xué)從孕育、誕生到發(fā)展，以至于今天成為生命科學(xué)中的一個不可忽略的重要分支。在這漫長的時間中，一批杰出的科學(xué)家在微生物學(xué)的各方面作出的貢獻，他們是人類認(rèn)識、利用和駕御微生物偉大成就中的明星。

微生物學(xué)發(fā)展形態(tài)學(xué)發(fā)展階段生理學(xué)發(fā)展階段近代微生物學(xué)階段項目一普通光學(xué)顯微鏡操作技術(shù)項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作問題探究知識拓展項目名稱顯微鏡操作技術(shù)實訓(xùn)對象高職（五年）/高專(三年)學(xué)時2學(xué)時實訓(xùn)目標(biāo)知識目標(biāo)：1.了解顯微鏡構(gòu)造、性能及原理；能力目標(biāo)：1.掌握顯微鏡的基本使用基礎(chǔ)和保養(yǎng)方法

2.掌握顯微鏡油鏡的觀察情感目標(biāo)：1.通過自主操作，提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題,解決問題的能力2.養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣進而形成良好的職業(yè)素養(yǎng)學(xué)習(xí)內(nèi)容：1.顯微鏡的構(gòu)造及原理2.觀察前準(zhǔn)備3.顯微觀察4.油鏡觀察5.顯微鏡使用后處理重點與難點:顯微觀察步驟具體要求：1.取出顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂一手拖住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。放置在水平桌面.2.初學(xué)者遵循從低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察過程.3.選擇合適觀察部位在油鏡下得到較清晰圖像4.觀察完畢鏡頭擦拭干凈放回原處實訓(xùn)材料與儀器：普通光學(xué)顯微鏡、細(xì)菌標(biāo)本片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等普通光學(xué)顯微鏡的使用顯微鏡的安置光源調(diào)節(jié)確定觀察部位浸油觀察顯微鏡使用后處理實踐操作一手握鏡臂，一手托鏡座，保持鏡體直立。放置水平桌面上。坐姿端正，兩眼同時睜開操作，必要時左眼觀察，右眼繪圖或記錄。觀察部位的確定將標(biāo)本片放在載物臺上，使標(biāo)本位于物鏡下方。先用低倍鏡觀察，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)螺旋，緩慢提升鏡筒（或下降載物臺）使物鏡與標(biāo)本距離拉大，當(dāng)出現(xiàn)物像時，改用細(xì)調(diào)節(jié)螺旋，上下微微移動，直至物像清晰后，用推進器找到理想的觀察部位。浸油觀察的方法找到觀察部位后，將鏡筒升起，在觀察部位加一滴香柏油，轉(zhuǎn)換油鏡，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)螺旋緩慢提升載物臺，使油鏡頭浸入香柏油中，直到幾乎與標(biāo)本片接觸為止，然后從目鏡觀察視野，當(dāng)視野見有模糊的物像時，改用細(xì)調(diào)節(jié)螺旋上下微微移動，直到物像清晰為止，再用推進器進一步觀察標(biāo)本。如果鏡頭離開香柏油時，應(yīng)重新浸油，重復(fù)上述操作過程。顯微鏡使用后處理油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，再取一張擦鏡紙滴上少量二甲苯把鏡頭上油擦凈，最后再用一張干擦鏡紙將鏡頭上殘留的二甲苯擦凈。下降聚光器，取下載玻片。用擦鏡布（綢布）將顯微鏡各部位擦凈，除去灰塵、油污、水汽，以免生霉長銹。使顯微鏡各部位恢復(fù)回原位，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使物鏡呈“八”字形叉開置于載物臺上（或?qū)⑤d物臺下降到最低點），最后將顯微鏡送回箱內(nèi)。1、普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及原理問題探究載物臺聚光器物鏡轉(zhuǎn)換器接物鏡彈簧夾虹彩光圈光源鏡座電源開關(guān)光源滑動變阻器粗調(diào)螺旋微調(diào)螺旋鏡臂鏡筒目鏡標(biāo)本移動螺旋普通光學(xué)顯微鏡的成像原理光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細(xì)結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。表面為曲面的玻璃或其他透明材料制成的光學(xué)透鏡可以使物體放大成像，光學(xué)顯微鏡就是利用這一原理把微小物體放大到人眼足以觀察的尺寸。而近代光學(xué)顯微鏡就是采用物鏡和目鏡兩組透鏡放大而完成的。顯微鏡的總放大倍率就是物鏡放大倍率和目鏡放大倍率的乘積。B’A’

兩次放大后成倒立的虛像B’A’

而油鏡使用的原理，是為了減少光線通過玻片與鏡頭之間的空氣時的損失。由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。物鏡與油鏡系統(tǒng)鏡光線通路顯微鏡使用中的注意事項1.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度2.觀察標(biāo)本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。3.拿顯微鏡時，不可單手拿，更不可傾斜拿。4.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。5.油鏡的擦拭知識拓展微生物的發(fā)現(xiàn)史常用的顯微鏡的類型項目二染色與細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)觀察項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作問題探究知識拓展名稱性質(zhì)發(fā)色基助色基用途結(jié)晶紫（龍膽紫）堿性對位醌-NH2革蘭氏染色等番紅（沙黃）堿性雙偶氮-NH2革蘭氏染色，核染色等堿性復(fù)紅堿性對位醌-NH2核染色、鑒別結(jié)核桿菌等美蘭堿性對位醌-NH2活體染色、放線菌染色、氧化還原指示劑中性紅堿性醌環(huán)-NH2活體染色、鑒別腸道細(xì)菌等孔雀綠堿性對位醌-NH2細(xì)菌芽孢染色等剛果紅酸性雙偶氮-NH2細(xì)菌負(fù)染色、酵母染色等伊紅酸性對位醌-OH細(xì)胞質(zhì)染色、細(xì)胞的嗜酸性顆粒染色酸性復(fù)紅酸性對位醌-NH2單染色等熒光素酸性羰基-OH熒光染色黑素（水溶黑素）混合物負(fù)染色微生物實驗常用染料微生物染色種類是非常多的，但一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，利于顯微鏡下觀察但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故亦稱鑒別染色法。項目二染色與細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)觀察我們將重點學(xué)習(xí)革蘭氏染色。項目二染色與細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)觀察項目名稱細(xì)菌革蘭氏染色實訓(xùn)對象高職（五年）/高專(三年)學(xué)時4學(xué)時實訓(xùn)目標(biāo)知識目標(biāo)：1.了解細(xì)菌細(xì)胞的基本形態(tài),結(jié)構(gòu)；

2．了解染色的基本原理；

3.理解細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生理功能能力目標(biāo)：1.

能熟練進行細(xì)菌的染色得到正確的結(jié)果情感目標(biāo)：1.通過自主操作，提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題,解決問題的能力2.養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣進而形成良好的職業(yè)素養(yǎng)學(xué)習(xí)內(nèi)容：觀察制片玻片的準(zhǔn)備細(xì)菌涂片的制作制片的染色制片的觀察重點：細(xì)菌觀察制片的制作過程難點：染色與脫色步驟具體要求：1.載玻片應(yīng)潔凈無油漬2.涂片應(yīng)均勻厚薄適宜3.滴加染液適量，控制染色時間，初染1min，媒染1min，脫色30S以內(nèi)，復(fù)染2-3min4.在油鏡下應(yīng)觀察到單細(xì)胞的顏色及形態(tài)。染色應(yīng)較均勻，不應(yīng)有大片背景染色區(qū)域?qū)W生基礎(chǔ)要求：1.普通顯微鏡的使用基礎(chǔ)實訓(xùn)材料與儀器：普通光學(xué)顯微鏡、金黃色葡萄球菌固體純培養(yǎng)物、大腸桿菌液體純培養(yǎng)物、草酸銨結(jié)晶紫、革蘭氏碘液、95%酒精、石炭酸復(fù)紅、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蒸餾水、沖洗架、廢液缸（或盤）香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等項目實訓(xùn)任務(wù)單制片玻片準(zhǔn)備涂片干燥固定染色初染媒染脫色復(fù)染玻片要求潔凈、無油漬，否則以酒精擦拭涂片取用活躍生長期的幼齡菌、涂片要勻而薄火焰固定以不燙手為宜實踐操作鏡檢鏡檢1、制片涂片：取一環(huán)無菌生理鹽水于玻片中央，挑取少許菌樣，與載玻片上水滴混合均勻，涂成一薄層。干燥：室溫下自然干燥固定：標(biāo)本面向上，酒精燈外焰上迅速通過2-3次。

涂片干燥固定實踐操作返回為什么要固定？涂片整個過程應(yīng)注意什么？實踐操作

初染

在涂片處滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，滴加量以剛好覆蓋整個菌膜為宜，染色1分鐘后用水沖洗，直至流下的水無紫色為止。媒染用革蘭氏碘液沖去殘水，并用革蘭氏碘液覆蓋菌膜1分鐘后水洗。脫色用滴管流加95%的乙醇脫色至載玻片下端流下的液體無紫色時，立即水洗。復(fù)染用番紅液復(fù)染1分鐘后，水洗。

2、染色返回3、鏡檢玻片晾干后鏡檢。低倍鏡——高倍鏡——油鏡觀察問題探究不同樣品染色的結(jié)果一致嗎?特征革蘭氏陽性細(xì)菌革蘭氏陰性細(xì)菌硬壁層外壁層厚度（nm）20～802～38～10肽聚糖含量占細(xì)胞壁干重的40%～90%5%～10%無磷壁酸有（或無）無無脂多糖1%～4%無11%～22%脂蛋白無有或無有細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁：由肽聚糖和磷壁酸組成

磷壁酸：G+菌所特有,其主鏈由數(shù)十個磷酸甘油或磷酸核糖醇組成,有的還有由D—Ala和還原糖組成的側(cè)鏈。

肽聚糖:占40~90%,不同菌種中肽聚糖(肽鏈)組分不同。細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁的基本骨架——肽聚糖

肽聚糖：是由N—乙酰胞壁酸（NAM）和N—乙酰葡糖胺（NAG）以及少數(shù)氨基酸短肽鏈組成的亞單位聚合而成的大分子復(fù)合體。肽聚糖單體：是由NAG、NAM、肽尾、肽橋構(gòu)成。

肽聚糖網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁的基本骨架——肽聚糖細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁：分內(nèi)壁層和外壁層。

內(nèi)壁層：緊貼胞膜,僅由1—2層肽聚糖分子構(gòu)成,占細(xì)胞壁干重5—10%,無磷壁酸。外壁層：位于肽聚糖層外部。脂多糖;

脂蛋白包括:蛋白質(zhì)層:基質(zhì)蛋白

外壁蛋白磷脂脫色是革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而誤認(rèn)為革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被誤認(rèn)為革蘭氏陽性菌。一般脫色時間控制在20-30S。革蘭氏染色的步驟草酸銨結(jié)晶紫初染碘液媒染95%乙醇脫色番紅復(fù)染涂片固定染色看到的細(xì)菌形態(tài)是什么樣的？知識拓展

菌體呈球形或近似球形,以典型的二分裂殖方式繁殖,分裂后產(chǎn)生的新細(xì)胞常保持一定的空間排列方式.根據(jù)細(xì)胞分裂的方向及分裂后的各子細(xì)胞的空間排列狀態(tài)不同,可將球菌分為以下幾種:單球菌、雙球菌、鏈球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、葡萄球菌等。球菌(coccus)及其排列狀態(tài)單球菌細(xì)胞分裂沿一個平面進行，新個體分散而單獨存在.如尿素微球菌(Micrococcusureae)雙球菌細(xì)胞沿一個平面分裂，新個體成對排列.

如肺炎雙球菌(Diplococcus

pneumoniae)鏈球菌細(xì)胞沿一個平面進行分裂，新個體不但可保持成對的樣子，并可連成鏈狀.如：乳鏈球菌（Streptococcuslactis）無乳鏈球菌（Streptococcusagalactiae)溶血鏈球菌（Streptococcushemolyticus)四聯(lián)球菌細(xì)胞分裂是沿兩個相垂直的平面進行，分裂后每四個細(xì)胞特征性地連在一起，呈田字形.

如四聯(lián)微球菌（Micrococcustetragenus）八疊球菌細(xì)胞按三個互相垂直的平面進行分裂后，每八個球菌特征性地連在一起成立方體形.

如藤黃八疊球菌（Sarcina

ureae)葡萄球菌細(xì)胞無定向分裂，多個新個體形成一個不規(guī)則的群體，猶如一串葡萄。如：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)

白色葡萄球菌（Staphylcoccus

albus)桿菌(bacillus)及其排列狀態(tài)桿菌是細(xì)菌中種類最多的類型,因菌種不同,菌體細(xì)胞的長短、粗細(xì)等都有所差異。桿菌的形態(tài)：短桿狀、長桿狀、棒桿狀、梭狀桿狀、月亮狀、竹節(jié)狀等；按桿菌細(xì)胞繁殖后的排列方式有鏈狀、柵狀、“八”字狀等。短桿菌長桿菌梭狀芽孢桿菌桿菌(bacillus)及其排列狀態(tài)雙桿菌鏈桿菌螺旋菌(spirilla)螺旋狀的細(xì)菌稱為螺旋菌。

根據(jù)其彎曲情況分為：

弧菌（vibrio)：螺旋不滿一圈，菌體呈弧形或逗號形

例：霍亂弧菌、逗號弧菌

螺旋菌(spirillum)：螺旋滿2—6環(huán)，螺旋狀

例：干酪螺菌

霍亂弧菌▼影響細(xì)菌形態(tài)的因素

因素：培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基成分、濃度、pH值。

一般處于幼齡階段和生長條件適宜時，細(xì)菌形態(tài)正常、整齊，表現(xiàn)出特定的形態(tài)。在較老的培養(yǎng)物中，或不正常的條件下，細(xì)胞常出現(xiàn)不正常形態(tài)，尤其是桿菌，有的細(xì)胞膨大，有的出現(xiàn)梨形，有的產(chǎn)生分枝，有時菌體顯著伸長以至呈絲狀等異常形態(tài)。若將它們轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中或適宜的培養(yǎng)條件下又可恢復(fù)原來的形態(tài)。細(xì)菌的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能顯微鏡下細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌結(jié)構(gòu)的模式圖知識拓展細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)的功能知識拓展細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能基本構(gòu)造細(xì)胞壁固定菌體外形，保護菌體細(xì)胞膜吸收排出新陳代謝物質(zhì)，能量代謝，多種合成代謝場所細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)的合成分解場所，細(xì)胞核負(fù)載遺傳信息特殊構(gòu)造鞭毛細(xì)菌的運動器官芽孢抵抗不良環(huán)境的休眠體莢膜加強細(xì)菌的致病力，養(yǎng)料儲藏庫，抗干燥作用纖毛使細(xì)菌相互黏著或附著在物體上，細(xì)菌的交配器官，傳遞遺傳物質(zhì)知識拓展革蘭氏染色是細(xì)菌分類鑒定的重要依據(jù)。除此之外細(xì)菌有無鞭毛,鞭毛著生的位置和數(shù)目；有無芽胞,芽胞的部位和形狀；有無莢膜等，都是重要的分類依據(jù)。課后請同學(xué)們自學(xué)鞭毛、芽孢、莢膜的染色方法。總結(jié)革蘭氏染色的注意點涂片時生理鹽水不宜過多，涂片必須均勻，不易過厚，以免脫色不全造成假陽性。固定時涂片向上來回穿過火焰外焰2-3次，不能直接放在火焰上烤，否則溫度過高細(xì)菌形態(tài)變形。革蘭氏染色的關(guān)鍵是脫色時間，一般維持在20-30S。選用培養(yǎng)18-24h菌齡的細(xì)菌為宜。細(xì)菌太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌呈陰性菌。項目三常見酵母霉菌細(xì)胞形態(tài)觀察項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作知識拓展問題探究項目名稱染色與酵母細(xì)胞形態(tài)觀察

實訓(xùn)對象高職（五年）/高專(三年)學(xué)時2學(xué)時實訓(xùn)目標(biāo)知識目標(biāo)：1.了解酵母細(xì)胞的基本形態(tài)；

2．了解染色的基本原理；

3.理解酵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生理功能能力目標(biāo)：1.

能熟練進行酵母的染色得到正確的結(jié)果情感目標(biāo)：1.通過自主操作，提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題,解決問題的能力2.養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣進而形成良好的職業(yè)素養(yǎng)學(xué)習(xí)內(nèi)容：一、酵母觀察觀察制片玻片的準(zhǔn)備酵母涂片的制作制片的觀察二、霉菌觀察1.直接制片觀察法2.載玻片培養(yǎng)觀察重點：酵母霉菌觀察制片的制作過程具體要求：1.載玻片應(yīng)潔凈無油漬2.取美藍(lán)染液一滴置于玻片中央3.取樣與美藍(lán)混勻蓋上蓋玻片。防止氣泡的生成。4.在顯微鏡下應(yīng)觀察到單細(xì)胞的顏色及形態(tài)。染色應(yīng)較均勻，不應(yīng)有大片背景染色區(qū)域5.直接制片觀察盡可能保持霉菌自然生長狀態(tài)學(xué)生基礎(chǔ)要求：1.普通顯微鏡的使用基礎(chǔ)項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作①取美藍(lán)染色液1滴，置于潔凈載玻片中央。②在無菌操作下,滴加啤酒酵母少許，置于美藍(lán)染液中充分混勻。③蓋上蓋玻片。取一塊蓋玻片，先將蓋玻片的一邊與染液接觸，然后將蓋玻片慢慢放下，再將多余染液用吸水紙吸干。④鏡檢。①在載玻片上加一小滴乳酸石炭酸溶液。②以無菌操作，用接種針從霉菌菌落邊緣挑取少量已產(chǎn)孢子的霉菌菌絲，至于載玻片上的溶液中。③用接種針小心地將菌絲分散開。④蓋上蓋玻片，置低倍鏡下觀察，必要時換高倍鏡下觀察。酵母形態(tài)觀察霉菌形態(tài)觀察問題探究1、霉菌水浸法形態(tài)觀察的原理及注意點直接制片觀察法是將培養(yǎng)物置于乳酸石碳酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制片鏡檢。用此染液制片的特點主要是，細(xì)胞不變形；具有防腐作用，不易干燥能保持較長時間；能防止孢子飛散；染液的藍(lán)色能增強反差。必要時，還可用樹膠封固，制成永久標(biāo)本長期保存。

在直接制片觀察時，挑菌要細(xì)心，盡可能保持霉菌的自然生長狀態(tài)。盡量挑取菌落邊緣的培養(yǎng)物，因為其菌齡最年輕。在直接制片加蓋玻片觀察時勿壓入氣泡，以免影響觀察。2、酵母細(xì)胞美藍(lán)染色的特點及注意點美藍(lán)染色液著色慢，染色時間長但效果清晰。同時酵母活細(xì)胞具有新陳代謝作用，使細(xì)胞內(nèi)氧化還原電位低，且還原力強，當(dāng)無毒的染料進入活細(xì)胞后，可以被還原脫色，但染料進入死細(xì)胞及新陳代謝緩慢的老細(xì)胞后，這些細(xì)胞因無還原能力而被著色，故可以以此區(qū)分死活細(xì)胞。知識拓展1、酵母的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能

酵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)

美蘭染色的酵母細(xì)胞

2、霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能霉菌菌絲項目四常見微生物的菌落特征觀察微生物的培養(yǎng)特征是指微生物在固體培養(yǎng)基上生長后表現(xiàn)出的群體形態(tài)特征。不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征。在平板上主要觀察菌落表面結(jié)構(gòu)，形態(tài)及邊緣等狀況。區(qū)分和識別各類微生物除了從細(xì)胞形態(tài)（個體形態(tài)）外，還要從菌落形態(tài)（群體形態(tài)）兩方面進行，菌落形態(tài)是無數(shù)細(xì)胞形態(tài)的集中反映，因此，每一大類微生物都有其一定的菌落特征，可通過這些特征差異區(qū)分和識別之。項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作問題探究知識拓展項目四常見微生物的菌落特征觀察項目名稱常見微生物菌落形態(tài)觀察

實訓(xùn)對象高職（五年）/高專(三年)學(xué)時2學(xué)時實訓(xùn)目標(biāo)知識目標(biāo)：1.了解酵母霉菌細(xì)菌菌落的基本形態(tài)；

2．知道菌落定義能力目標(biāo)：1.

能根據(jù)菌落特征對微生物做出初步判定情感目標(biāo)：1.通過自主操作，提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題,解決問題的能力2.養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣進而形成良好的職業(yè)素養(yǎng)學(xué)習(xí)內(nèi)容：細(xì)菌菌落特征酵母菌落特征霉菌菌落特征重點：對各種菌落進行區(qū)別具體要求：認(rèn)真觀察各培養(yǎng)物規(guī)范及時填寫記錄表學(xué)生基礎(chǔ)要求：1.普通顯微鏡的使用基礎(chǔ)實訓(xùn)材料與儀器：普通光學(xué)顯微鏡、放大鏡、酵母，細(xì)菌，霉菌等平板培養(yǎng)物等項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作借助放大鏡分別觀察各類微生物的菌落的大小，表面粗糙及含水分狀況，邊緣，致密程度，透明程度及厚度等特征。并填寫記錄表。根據(jù)觀察結(jié)果總結(jié)各類微生物菌落的一般特征。

銅綠假單胞桿菌啤酒酵母金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌青霉鏈霉菌黑曲霉菌落特征大小表面邊緣致密程度厚薄程度透明程度色澤細(xì)菌大腸桿菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌放線菌鏈霉菌真菌啤酒酵母青霉黑曲霉問題探究群體培養(yǎng)特性是微生物分類鑒定的依據(jù)

菌落是指在固體培養(yǎng)基上以母細(xì)胞為中心不斷分裂繁殖所形成的子細(xì)胞群體。而每一大類微生物都有不同的群體形態(tài)表現(xiàn)。所以菌落特征是微生物分類鑒定的依據(jù)。知識拓展常見微生物菌落特征比較微生物群體培養(yǎng)的其他形式在半固體培養(yǎng)基上觀察穿刺培養(yǎng)后的生長及運動情況。在液體培養(yǎng)基中，觀察液體是否混濁、表面有無菌膜、管底有無沉淀、管中有無氣泡、培養(yǎng)液有無顏色變化等。培養(yǎng)特征也作為純培養(yǎng)是否被污染的參考。不同種屬的微生物其酶系統(tǒng)、代謝途徑和代謝產(chǎn)物的差異較大，這就為微生物的理化鑒定提供了方便。實踐中常通過一些特殊的反應(yīng)來測定某種產(chǎn)物或酶，如乙酰甲基甲醇試驗、甲基紅試驗、硫化氫生成、過氧化氫酶產(chǎn)生試驗等，依據(jù)試驗結(jié)果則可將不同的微生物區(qū)別開來。項目五生理生化鑒定技術(shù)在微生物鑒定中，一般先根據(jù)幾項簡單的性質(zhì)，如微生物要求的培養(yǎng)條件、要求的培養(yǎng)基、是否產(chǎn)生色素等，來判斷所鑒定的微生物屬于哪一大類，然后全面考察這一大群內(nèi)各屬間的異同，選擇合適的鑒別特征，制定出鑒定方案。鑒別到屬后，再依據(jù)各種間的異同，進一步鑒定到種。糖發(fā)酵試驗是最常用的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們在分解糖的能力上有很大差異，有些細(xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如：大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；沙門氏菌只能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，而不能分解乳糖。項目實訓(xùn)任務(wù)單實踐操作問題探究知識拓展項目名稱生理生化鑒定技術(shù)（糖發(fā)酵試驗）實訓(xùn)對象高職（五年）/高專(三年)學(xué)時4學(xué)時實訓(xùn)目標(biāo)知識目標(biāo)：1.了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的作用能力目標(biāo)：1.掌握糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法情感目標(biāo)：1.通過自主操作，提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題,解決問題的能力2.養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣進而形成良好的職業(yè)素養(yǎng)學(xué)習(xí)內(nèi)容：1.試驗培養(yǎng)基，儀器的準(zhǔn)備2.試管編號2.接種3.培養(yǎng)4.觀察結(jié)果重點與難點:觀察結(jié)果的鑒別具體要求：1.準(zhǔn)備的培養(yǎng)基內(nèi)小導(dǎo)管中應(yīng)不氣泡。2.編號應(yīng)清晰符合要求，注明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種的細(xì)菌菌名。學(xué)生基礎(chǔ)要求：1.了解無菌接種技術(shù)實訓(xùn)材料與儀器：大腸桿菌、普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌試管斜面、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管），接種環(huán)，試管架等實踐操作⑴編號用記號筆在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種的菌名。⑵接種取盛有葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基的試管3支，按編號1支接種大腸桿菌，另1支接種普通變形桿菌，第3支不接種，作為對照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣1支接種大腸桿菌，1支接種普通變形桿菌，第3支不接種，作為對照。⑶將上述已接種的葡萄糖和乳糖發(fā)酵試管和對照管置37℃溫室中培養(yǎng)24小時。⑷觀察結(jié)果。問題探究1、結(jié)果判定⑴變色培養(yǎng)基遇酸變色則為陽性（+）培養(yǎng)基不變色則為陰性（-）若培養(yǎng)基中加有溴麝香草酚藍(lán)遇酸則由藍(lán)變黃；若是加有溴甲酚紫遇酸則由紫變黃；若是加有酚紅遇酸則由紅變藍(lán)。⑵氣體若有氣體產(chǎn)生，則倒立小管出現(xiàn)氣泡

⑶動力若接種菌有動力，培養(yǎng)物沿穿刺接種線呈彌漫生長左邊兩根試管為（+）

右邊兩根試管為（-）2、在放置德漢氏小管時注意不能有氣泡，防止影響后面觀察。培養(yǎng)液滅菌后產(chǎn)生的氣泡這種發(fā)酵管不能使用。3、其他糖（醇）類發(fā)酵試驗結(jié)果衛(wèi)茅醇發(fā)酵實驗陽性陽性陰性

甘露醇發(fā)酵實驗陰性陽性

鼠李糖發(fā)酵實驗陰性陽性

知識拓展1、常規(guī)的生理生化鑒定試驗不同種屬的微生物其酶系統(tǒng)、代謝途徑和代謝產(chǎn)物的差異較大，這就為微生物的理化鑒定提供了方便。實踐中常通過一些特殊的反應(yīng)來測定某種產(chǎn)物或酶，如乙酰甲基甲醇試驗、甲基紅試驗、硫化氫生成、過氧化氫酶產(chǎn)生試驗等，依據(jù)試驗結(jié)果則可將不同的微生物區(qū)別開來。在微生物鑒定中，一般先根據(jù)幾項簡單的性質(zhì)，如微生物要求的培養(yǎng)條件、要求的培養(yǎng)基、是否產(chǎn)生色素等，來判斷所鑒定的微生物屬于哪一大類，然后全面考察這一大群內(nèi)各屬間的異同，選擇合適的鑒別特征，制定出鑒定方案。鑒別到屬后，再依據(jù)各種間的異同，進一步鑒定到種?？偟膩碇v，微生物的理化鑒定技術(shù)包括生長環(huán)境特性試驗（生長溫度測定、生長pH測定等），營養(yǎng)物質(zhì)利用能力試驗（碳源的利用試驗，氮源的利用試驗等），代謝產(chǎn)物試驗（乙酰甲基甲醇試驗VP，硫化氫的生成試驗，吲哚試驗，甲基紅試驗MR，淀粉水解試驗，明膠液化試驗等）。2、微生物生理生化特性也被作為細(xì)菌鑒定和分類的內(nèi)容微生物的分類鑒定除了利用我們前面所提到的形態(tài)特征，培養(yǎng)特征，生理生化特征外，還包括微生物的生態(tài)特性，化學(xué)組成，血清學(xué)反應(yīng)，遺傳學(xué)特性等，都可作為分類的依據(jù)。例如霉菌的細(xì)胞壁主要含有幾丁質(zhì),而細(xì)菌細(xì)胞主要是肽聚糖等；根據(jù)血清學(xué)反應(yīng)的基本原理,用已知菌種、菌型制成抗血清,然后根據(jù)它們與待鑒定微生物是否發(fā)生特異性的血清學(xué)反應(yīng),來確定未知菌種或菌型；隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和先進技術(shù)的應(yīng)用,微生物的脂肪酸組成、磷脂質(zhì)組成、細(xì)胞色素、酶和蛋白質(zhì)的電泳圖譜、DNA的堿基組成、5S核糖體RNA序列等也都作為微生物的分類依據(jù)。分類和鑒定分類：是解決從個別到一般或從具體到抽象的問題，亦即通過收集大量有關(guān)個體描述的資料，經(jīng)過科學(xué)的歸納，整理成一個科學(xué)的分類系統(tǒng)。鑒定：其和分類正好相反，是從一般到特殊或抽象到具體的過程，亦即通過詳細(xì)觀察和描述一個未知名稱純種微生物的各種性狀特征，然后查找現(xiàn)成的分類系統(tǒng)，以達到知類辨名的目的。微生物分類和命名簡介

(一)種以上系統(tǒng)分類單元在這七級中，在必要時每一級都可有若干輔助單元，故共可有十余級。同時分類系統(tǒng)是不斷發(fā)展的，特別是對于系統(tǒng)發(fā)育的研究發(fā)展迅速，目前存在著五界分類系統(tǒng)、三原界分類系統(tǒng)、二域八界分類系統(tǒng)等。（二）種的概念一般，同一種微生物，其種內(nèi)各菌株間的G+Cmol%值可相差2.5%~4.0%，相差過少（低于2%），則沒有分類學(xué)上的意義；若相差在5%以上，可認(rèn)為已是兩個不同的種了。對于G+Cmol%值相差在5%以內(nèi)的菌株，要通過DNA-DNA分子雜交法來確定它們之間的關(guān)系，實驗表明菌株間DNA同源性在70%以上者，屬于種的水平；在20%以上者，則可能屬于屬的水平（另，約翰遜1981年的試驗指出，DNA-DNA雜交同源性在60%以上的菌株可視為同一個種，同源性低于20%者為不同屬的關(guān)系，同源性在20%~60%之間可視為屬內(nèi)緊密相關(guān)的種。）。定義：種是一個基本分類單位，是一大群表型特征高度相似、親緣關(guān)系極其接近、與同屬內(nèi)其他種有明顯差異的菌株的總稱。在微生物中，一個種只能用該種內(nèi)的一個典型菌株作為具體標(biāo)本，它就是該種的模式種。(例如：Bifidobacterium

bifidum,ATCC29521)（三）學(xué)名命名的方法：國際法規(guī)命名，即林奈所創(chuàng)立的雙名法。雙名法的規(guī)則：學(xué)名通常由一個屬名加一個種的加詞構(gòu)成