雷醋酸乙酯提取物對(duì)大鼠腎上腺的保護(hù)作用

雷醋酸乙酯提取物對(duì)大鼠腎上腺的保護(hù)作用

雷公藤對(duì)下肢-腎上腺軸的影響被認(rèn)為是“模仿hpa的人體內(nèi)存在一種激素作用的效果”。然而,文獻(xiàn)報(bào)道主要通過(guò)光鏡水平探討雷公藤對(duì)腎上腺的影響。本實(shí)驗(yàn)從電鏡超微結(jié)構(gòu)水平,結(jié)合光鏡和放射免疫分析檢測(cè)血清皮質(zhì)酮含量,從形態(tài)和機(jī)能兩方面綜合評(píng)價(jià)雷公藤醋酸乙酯提取物(ethylacetaeextractofTripterygiumwilfordii,TWEE)對(duì)大鼠腎上腺的影響。1材料和方法1.1大鼠皮質(zhì)酮放射免疫檢測(cè)試驗(yàn)劑TWEE(為含1g·L-1雷公藤甲素的干燥粉末,湖北省中醫(yī)藥研究院);潑尼松(5mg·片-1,湖北省宜昌制藥廠,批號(hào)941202);大鼠皮質(zhì)酮放射免疫檢測(cè)試劑盒(美國(guó)DPC公司)。1/萬(wàn)電子天平(日本產(chǎn));H-300電鏡(日本產(chǎn));SN-682型放射免疫γ計(jì)數(shù)器(上海核福光電儀器有限公司);HERMLE-Z360K低溫高速離心機(jī)(德國(guó)產(chǎn))。Sprague-Dawley大鼠,♂,體重(214.28±19.19)g(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。1.2方法1.2.1動(dòng)物組30只♂SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后,完全隨機(jī)分為對(duì)照組(10只),潑尼松組(10只)和TWEE組(10只)。1.2.2twee的用量對(duì)照組給予5g·L-1羧甲基纖維素鈉(CMC)懸液2ml,po,bid。潑尼松組用5g·L-1CMC將潑尼松配成混懸液(0.5mg·ml-1),2mg·kg-1,po,bid。TWEE組用5g·L-1CMC將TWEE配成混懸液(5mg·kg-1),25mg·kg-1,po,bid。實(shí)驗(yàn)期間每3d稱體重1次,以調(diào)整用藥劑量,動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。上述處理30d后,于第31d斷頭處死動(dòng)物,收集血液及取出兩側(cè)腎上腺。1.3觀察指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)方法1.3.1一般狀況觀察生長(zhǎng)發(fā)育、外觀、反應(yīng)性、活動(dòng)性、食欲、攝食量及體重變化情況。1.3.2器官系數(shù)器官重量和重量實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱大鼠體重,摘取腎上腺并去除被膜周圍脂肪及結(jié)締組織,稱重,計(jì)算臟器系數(shù)。1.3.3低溫高速離心室溫下大鼠快速斷頭取血(1min內(nèi)完成)于冷凍塑料試管內(nèi),低溫高速離心(3500r·min-1,20min,4℃),分離的血清-40℃保存。實(shí)驗(yàn)前,室溫下輕柔攪拌或反向混勻樣本。其余按試劑盒說(shuō)明書操作。1.3.4相當(dāng)束狀帶位置右側(cè)腎上腺用Carnoy液(冷)固定,常規(guī)HE染色;左側(cè)腎上腺于最大面切開,在相當(dāng)束狀帶位置取材。先用體積分?jǐn)?shù)為2.5%戊二醛磷酸鹽緩沖液4℃固定1.5h,再用鋨酸固定液4℃固定2h,漂洗后,升級(jí)酒精脫水,丙酮浸透,Epon812包埋,超薄切片,醋酸鈾及枸櫞酯鉛進(jìn)行雙重染色,H-300型透射電鏡觀察。2結(jié)果2.1駁岸的生長(zhǎng)對(duì)照組大鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好,皮毛光潔,反應(yīng)靈敏,活潑好動(dòng),食欲好,攝食正常,體重穩(wěn)步增加。潑尼松組生長(zhǎng)發(fā)育略差,皮毛略蓬松狀,光澤度較差,反應(yīng)性較低下,不喜動(dòng),食欲一般,攝食略差,體重增加略慢。TWEE組生長(zhǎng)發(fā)育較差,皮毛蓬松,光澤度較差,易脫落,反應(yīng)較遲鈍、衰弱、嗜睡、眼角分泌物增多,食欲下降,攝食差,體重輕于前兩組。2.2兩組大鼠臟器系數(shù)的變化經(jīng)Student-Newman-Keuls(SNK)Test法統(tǒng)計(jì)分析,各組大鼠實(shí)驗(yàn)前、后體重?zé)o顯著性差異。TWEE組的腎上腺重量高于潑尼松組;臟器系數(shù)大于對(duì)照組及潑尼松組。而對(duì)照組與潑尼松組之間的腎上腺重量和臟器系數(shù)比較均無(wú)顯著差異。2.3血清皮質(zhì)酮含量表2經(jīng)SNK法統(tǒng)計(jì)分析,3組大鼠血清皮質(zhì)酮含量相互之間比較有顯著性差異,TWEE組>對(duì)照組>潑尼松組。2.4大鼠腎上腺形態(tài)的觀察2.4.1腎上腺素皮質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)照組腎上腺皮質(zhì)球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶及髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。束狀帶外2/3區(qū)細(xì)胞漿內(nèi)含類脂質(zhì)空泡,分布均勻,較清晰;內(nèi)1/3區(qū)類脂質(zhì)空泡較少、較模糊。潑尼松組腎上腺皮質(zhì)結(jié)構(gòu)不清。束狀帶細(xì)胞胞漿嗜酸性增強(qiáng),僅外2/3區(qū)見少量類脂質(zhì)空泡。TWEE組腎上腺皮質(zhì)明顯增厚,結(jié)構(gòu)清晰。束狀帶外2/3區(qū)細(xì)胞漿充滿類脂質(zhì)空泡,呈疏松透亮區(qū);內(nèi)1/3區(qū)胞漿也可見較多類脂質(zhì)空泡。球狀帶細(xì)胞漿內(nèi)亦見疏松淡染區(qū)。2.4.2皮質(zhì)束狀帶胞漿的脂質(zhì)和脂質(zhì)分析對(duì)照組腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞胞漿線粒體豐富,線粒體嵴呈空泡狀,有較多光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及較大脂滴。潑尼松組皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞核周間隙增寬,胞核周邊線粒體結(jié)構(gòu)模糊,界限不清;遠(yuǎn)離胞核處的線粒體結(jié)構(gòu)較正常;胞漿中可見光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),但脂滴較少、較小。TWEE組腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞胞漿中富含線粒體、光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及大小不等的脂滴。線粒體嵴呈空泡狀,邊界清楚。3twee對(duì)大鼠肝腎皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞功能的影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TWEE組腎上腺重量大于潑尼松組、臟器系數(shù)顯著高于對(duì)照組及潑尼松組。表明TWEE組腎上腺有輕度增生,至少?zèng)]有萎縮。光鏡下,TWEE組腎上腺皮質(zhì)明顯增厚,束狀帶外2/3區(qū)及內(nèi)1/3區(qū)胞漿均見較多類脂質(zhì)空泡。結(jié)果與李玉敏等、ZhangMing-Min等一致。提示TWEE可刺激大鼠腎上腺皮質(zhì)增生。有報(bào)道雷公藤及其同屬植物昆明山海棠抗炎作用與HPAA無(wú)關(guān)。這可能因給藥時(shí)間長(zhǎng)短不同所致;我們認(rèn)為可能還與雷公藤的化學(xué)組成相當(dāng)復(fù)雜有關(guān)。各組分在體內(nèi)可引起多種生物學(xué)效應(yīng),最終出現(xiàn)何種效應(yīng)與多種因素如藥材產(chǎn)地和部位、采藥季節(jié)、藥物劑型和劑量、用藥方式和時(shí)間、動(dòng)物種屬等有關(guān)。此外,雷公藤可能存在多種抗炎和免疫抑制途徑(直接途徑、間接途徑如經(jīng)過(guò)HPAA)。本實(shí)驗(yàn)TWEE組的大鼠腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞胞漿中含豐富的線粒體,線粒體嵴呈空泡狀,邊界清楚,也含豐富的光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及大小不等的淡染而均質(zhì)的脂滴。電鏡下具有這些典型的分泌類固醇的超微結(jié)構(gòu),表示腎上腺皮質(zhì)束狀帶功能活躍。相反,潑尼松組則可見束狀帶細(xì)胞核周間隙增寬,核周邊線粒體結(jié)構(gòu)模糊,界限不清;胞漿雖亦可見光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴,但數(shù)量較少,且脂滴較小、濃染而不均勻,表示腎上腺皮質(zhì)束狀帶功能不活躍。上述變化從超微結(jié)構(gòu)亞細(xì)胞水平再次表明,TWEE在整體實(shí)驗(yàn)條件下能促進(jìn)大鼠腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞功能。SD♂大鼠血皮質(zhì)酮正常值報(bào)道不一,分別為(4.20±1.39)μg·dl-1[(121.21±40.11)nmol·L-1](血漿);(10.70±4.41)μg·dl-1[(308.80±127.27)nmol·L-1](血漿);(19.08±0.68)μg·100ml-1(血清)。本實(shí)驗(yàn)為(112.79±19.27)ng·ml-1(血清)。從表2可知,TWEE可使血清皮質(zhì)酮水平明顯上升,顯著