不同提取方法的當歸補血湯對環(huán)磷酰胺所致骨髓抑制的比較研究

不同提取方法的當歸補血湯對環(huán)磷酰胺所致骨髓抑制的比較研究

當歸補血湯是金元時期李東元李東元提出的一套古今方劑。所用黃芪一兩,當歸二錢。該方目前研究廣泛,研究者非常重視從化學和藥理學指標方面研究當歸補血湯配伍為例及其有效成分。本實驗重在研究當歸補血湯補氣生血功效,用不同有機溶劑萃取當歸補血湯,以各萃取液胃飼化療貧血模型,選取具有最佳生物效應的提取工藝,為揭示該方藥效和物質(zhì)基礎提供實驗依據(jù)。1hmao、環(huán)磷酰胺和礦物elisaSPF級BALB/c小鼠96只,6~7周齡,體重18~20g,雌雄各半,由北京維通利華有限公司提供[批準號:SCXK(京)2006-0009]。黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bgevarmongholicus(Bge.)Hsiao,產(chǎn)地內(nèi)蒙;當歸Angelieasinensis(Oliv.)Diels,產(chǎn)地甘肅;環(huán)磷酰胺,購于遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院西藥局。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、吐溫80由沈陽博瑞斯特商貿(mào)有限公司提供;小鼠骨髓EPO、腎組織EPO、骨髓TGF-β1、骨髓白介素-2(IL-2)ELISA檢測試劑盒由R&D公司提供。HEMAVET95OFS型全自動五分類多物種血液分析儀(美國Drew公司生產(chǎn));QL-901型漩渦混合機(海門市其林貝爾儀器制造有限公司生產(chǎn));C412型多孔離心機(法國Jouan公司生產(chǎn));BS223S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司生產(chǎn));DS-671型電子稱(大連星海電子衡器有限公司生產(chǎn))。2飲片萃取浸膏制備于第1、3天,按150mg/kg體重劑量給予小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺,第5天按200mg/kg體重劑量給予小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺。將當歸:黃芪按1:5比例稱量、浸泡、煎煮、過濾所得的當歸補血湯水煎液,然后用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇通過分液漏斗依次萃取,得到4種有機溶劑萃取液和水層溶液,其中4種有機溶劑萃取液均需用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收有機溶劑,且在完全回收結(jié)束前,剩余的少量溶劑不回收,轉(zhuǎn)入燒杯中,用電熱套,在通風櫥中,低溫揮發(fā)剩余的溶劑,得浸膏,再用蒸餾水轉(zhuǎn)溶,其中石油醚、氯仿萃取部分所得浸膏需要加入0.2%吐溫80助溶;乙酸乙酯和正丁醇部分能直接溶于蒸餾水中;水層部分用減壓回收和蒸發(fā)皿敞口低溫揮發(fā)方法去除有機溶劑。各部分轉(zhuǎn)溶后,均定量為250mL,即每毫升含2g飲片萃取浸膏,冷藏備用。按外周血紅細胞、白細胞計數(shù)隨機分為8組:空白組、模型組、當歸補血湯石油醚組、當歸補血湯氯仿組、當歸補血湯乙酸乙酯組、當歸補血湯正丁醇組、當歸補血湯水層組、吐溫80組,每組12只。空白組、模型組按0.3mL/20g體重劑量胃飼蒸餾水,各給藥組分別按12g/kg體重劑量胃飼當歸補血湯不同有機溶劑萃取液,每日1次,連續(xù)給藥14天。(1)測定外周血象(全自動五分類多物種血液分析儀)。(2)骨髓IL-2、TGF-β1濃度(ABC—ELISA法)。(3)骨髓EPO濃度和腎組織EPO濃度(ABC—ELISA法)。采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,檢測數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示。3外周血紅細胞計數(shù)結(jié)果見表1。與正常組比較,模型組小鼠外周血白細胞、紅細胞計數(shù)明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,各給藥組外周血白細胞、紅細胞計數(shù)均升高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與各給藥組比較,氯仿組優(yōu)于其他給藥組,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.2各組il-2,tgf-1,結(jié)果見表2。與正常組比較,模型組小鼠骨髓IL-2濃度明顯降低,TGF-β1濃度明顯升高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,各給藥組IL-2濃度升高,骨髓TGF-β1濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與各給藥組比較,氯仿組優(yōu)于其他給藥組,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.3度降低p>0.0結(jié)果見表3。與正常組比較,模型組小鼠骨髓EPO濃度和腎組織EPO濃度明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與模型組比較,各給藥組骨髓EPO濃度和腎組織EPO濃度均升高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與各給藥組比較,氯仿組優(yōu)于其他給藥組,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4歸養(yǎng)血工酶在小鼠體內(nèi)不同有機溶劑萃取液對小鼠的免疫作用當歸補血湯是一首益氣補血的代表方劑。以不同有機溶劑萃取當歸補血湯,考察當歸補血湯不同有機溶劑萃取液對化療貧血模型小鼠的補血作用,目的是考察當歸補血湯不同有機溶劑萃取液中的最佳生物效應,并且綜合考慮衛(wèi)生經(jīng)濟學指標,進而確定最佳提取工藝。環(huán)磷酰胺為臨床常用的抗腫瘤藥物,在殺傷和抑制腫瘤細胞的同時對骨髓造血細胞產(chǎn)生強烈的抑制作用。本次實驗結(jié)果顯示,模型組小鼠白細胞和紅細胞數(shù)量明顯低于空白組。各給藥組均能提高小鼠外周血象的白細胞計數(shù)和紅細胞計數(shù),表明當歸補血湯不同有機溶劑萃取液均具有“補血”作用。IL-2具有刺激T淋巴細胞增殖,促進B淋巴細胞分化和增殖,激活自然殺傷細胞,增強CFU-GM增殖活性,間接刺激血細胞生成等作用。TGF-β1是一種強效的免疫抑制因子。對造血干細胞、上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞等具有生長抑制作用。本次實驗中模型組小鼠骨髓TGF-β1顯著升高,IL-2濃度顯著降低,與文獻報道相一致。各給藥組均不同程度提高小鼠骨髓IL-2濃度并且降低TGF-β1濃度,其中以氯仿組效果最好。提示當歸補血湯不同有機溶劑萃取液均能提高造模小鼠機體免疫能力,可能與當歸補血湯大補元氣、增強機體抗御外邪的作用有關。促紅細胞生成素(EPO)促進骨髓造血,及時有效地增加紅細胞的數(shù)量。實驗結(jié)果顯示,模型組骨髓和腎組織EPO濃度降低,說明環(huán)磷酰胺破壞骨髓的造血功能。當歸補血湯不同有機溶劑萃取液均能提高骨髓和腎組織EPO濃度,與文獻報道相一致,以氯仿組效果最優(yōu),表明當歸補血湯各有機溶劑萃取液能不同程度地保護骨髓造血功能,改善小鼠貧血狀態(tài)。環(huán)磷酰胺造模后,小鼠的免疫功能和骨髓的造血功能均受到破壞,免疫功能破壞表現(xiàn)為,骨髓IL-2濃度降低,TGF-β1濃度升高;造血功能受到破壞表現(xiàn)為骨髓和腎臟EPO濃度下降。經(jīng)當歸補血湯不同有機溶劑胃飼給藥后,提高了小鼠機體的免疫功能,改善了造血功能。這與中醫(yī)學的陽生陰長,氣旺則血生相類似,符合“有形之血不能速生,無形之氣所當急固”的理論。本實驗結(jié)果顯示氯仿組具有最佳的生物效應,提高免疫和改善造