藥物儀器分析技術(shù)第二章 紫外-可見吸收光譜法

紫外-可見吸收光譜法第二章

目錄CONTENTS01基本知識02紫外-可見分光光度計03定性定量分析04實訓三

吸收系數(shù)法測定維生素B1片的含量測定05實訓四

雙波長分光光度法測定復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量案例導(dǎo)入

血紅蛋白減少見于臨床上各種原因的貧血，通過血紅蛋白的測定可診斷貧血，明確貧血程度。血紅蛋白的測定多用氰化高鐵血紅蛋白測定法。其基本原理是：血液中除硫化血紅蛋白外的各種血紅蛋白均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CNˉ結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物-氰化高鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，用分光光度計測定該處的吸光度，經(jīng)換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度，或通過制備的標準曲線查得血紅蛋白濃度?；局R第一節(jié)011.能說出光的吸收定律。2.能區(qū)別透光率和吸光度。3.能應(yīng)用光的吸收定律進行計算。4.能說出不同的吸光系數(shù)的含義。5.能說出吸收光譜曲線中橫坐標C、縱坐標A和λmax的含義。學習目標光是一種電磁波，具有波動性和粒子性，即光的波粒二象性。光的波動性常用波長或頻率來描述；光的粒子性是把光作為具有一定能量的光子(或光量子)來描述。按波長順序排列的電磁波稱為電磁波譜。人眼能感覺到的光稱為可見光，其波長在400?760nm；人眼覺察不到的還有紅外線、紫外線、X射線等。光的本質(zhì)與物質(zhì)的顏色011.光的本質(zhì)單一波長的光稱為單色光,由不同波長的光混合而成的光稱為復(fù)合光。兩種適當顏色的單色光按一定強度比例混合可成為白光，這兩種單色光稱為互補色光。光的本質(zhì)與物質(zhì)的顏色011.光的本質(zhì)圖2-1

光的互補色示意圖溶液的顏色，是由于物質(zhì)選擇性地吸收了可見光中某一波長的光而產(chǎn)生的。當一束白光通過某溶液時，如果溶液對各波長的光完全吸收，則溶液顯黑色；如果該溶液對各波長的光都不吸收，則溶液無色透明。如果溶液選擇性地吸收了白光中的某一色光，則溶液呈現(xiàn)透過光的顏色，即溶液呈現(xiàn)的顏色是它所吸收光的互補色。光的本質(zhì)與物質(zhì)的顏色012.物質(zhì)對光的選擇性吸收光的吸收定律021.透光率與吸光度Io

圖2-2

光照射溶液示意圖

Ir當一束平行的單色光照射到均勻無散射的溶液時，若入射光強度為Io，吸收收光強度為Ia，透過光強度為It，反射光強度為Ir，如圖2-2所示。

Io=Ia+It+Ir

光的吸收定律021.透光率與吸光度Io

圖2-2光照射溶液示意圖

Ir在分光光度法中，通常把待測溶液和參比溶液分別置于材質(zhì)及厚度相同的吸收池中，所以兩個吸收池的反射光強度基本相同且可以忽略不計，因此上式可簡化為：

Io=Ia+It

光的吸收定律021.透光率與吸光度Io

圖2-2光照射溶液示意圖

Ir透光率（或透光度）：指透過光強度It與入射光強度Io之比，用符號T表示，即：光的吸收定律021.透光率與吸光度Io

圖2-2光照射溶液示意圖

Ir吸光度：透光率（T）的倒數(shù)反映了物質(zhì)對光的吸收程度，透光率的負對數(shù)稱為吸光度，用A表示，即：光的吸收定律02

當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比。這一結(jié)論稱為光的吸收定律，也稱為朗伯-比爾定律。其表達式如下：2.光的吸收定律（朗伯-比爾定律）光的吸收定律02光的吸收定律表明了物質(zhì)對光的吸收程度與其濃度和液層厚度之間的數(shù)量關(guān)系，因而是分光光度法定量的基礎(chǔ)；不僅適用有色溶液，也適用無色溶液及氣體和固體的非散射均勻體系;不僅適用于可見光區(qū)的單色光，也適用于紫外光和紅外光區(qū)的單色光。2.光的吸收定律（朗伯-比爾定律）摩爾吸光系數(shù)指波長一定時，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時的吸光度，用ε表示，單位為L/（mol·cm）。即：指波長一定時，溶液濃度為lg/100ml,液層厚度為1cm時的吸光度,用表示，單位為100ml/（g·cm）。即：百分吸光系數(shù)光的吸收定律023.吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)與摩爾吸光系數(shù)的關(guān)系光的吸收定律02吸光系數(shù)是物質(zhì)的特性常數(shù)之一,是物質(zhì)對一特定波長光的吸收能力的體現(xiàn)；吸光系數(shù)越大，表明吸光能力越強，靈敏度越高；不同物質(zhì)對同一波長的光有不同的吸光系數(shù)，同一種物質(zhì)對不同波長的光也有不同的吸光系數(shù)；吸光系數(shù)是分光光度法進行定量和定性分析的依據(jù)。3.吸光系數(shù)吸收光譜曲線03圖2-3不同濃度的KMnO4溶液的吸收光譜曲線

在溶液濃度和液層厚度一定的條件下,用不同波長的光，按波長順序分別測定溶液的吸光度，以波長（λ）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，所描繪的曲線稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收曲線。吸收光譜曲線03圖2-3不同濃度的KMnO4溶液的吸收光譜曲線

從圖2-3可見（1）不同濃度的KMnO4溶液的吸收曲線形狀相似，對波長為525nm附近的綠色光吸收最強。吸收程度最大處的波長稱為最大吸收波長，用λmax表示。KMnO4溶液的λmax=525nm。吸收光譜曲線03圖2-3不同濃度的KMnO4溶液的吸收光譜曲線

從圖2-3可見（2）對于不同物質(zhì)，由于組成和結(jié)構(gòu)不同,其吸收光譜的形狀和λmax也不相同，這些特征可作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。（3）對于同一種物質(zhì),在一定波長下的吸光度隨溶液的濃度增加而增加，這一特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。在定量分析中，一般選擇在最大吸收波長（λmax）處測定吸光度。紫外-可見分光光度計第一節(jié)021.能夠說出光源、單色器、吸收池、檢測器、信號處理及顯示器五大主要部件。2.能夠根據(jù)不同的光路圖，區(qū)別不同類型的分光光度計。3.熟練完成分光光度計的使用及養(yǎng)護，并能夠準確避免相關(guān)的注意事項。4.能夠了解儀器使用過程中的指標信息及含義。學習目標在200～800nm波長范圍內(nèi)，能夠任意選擇不同波長的單色光用來測定溶液的吸光度（或透過率）的儀器，稱為紫外-可見分光光度計。紫外-可見分光光度計的型號繁多，但其主要部件的結(jié)構(gòu)和工作原理相似，主要由光源、單色器、吸收池、檢測器及信號處理及顯示器五部分組成?；?/p>

本

結(jié)

構(gòu)01紫外-可見分光光度計

光源是提供一定強度、穩(wěn)定且具有連續(xù)光譜的光，不同光源可以提供不同波長范圍的光波。紫外-可見分光光度計中安裝有兩種光源氫燈（或氘燈）和鎢燈（或鹵鎢燈）。紫外光區(qū)通常釆用氫燈或氘燈，適用波長范圍是200～360nm；可見光區(qū)釆用鎢燈或鹵鎢燈，適用波長范圍是350～800nm。1.光源基

本

結(jié)

構(gòu)01單色器作用是將來自光源的復(fù)合光色散成按一定波長順序排列的連續(xù)光譜，從中分離出一定寬度的譜帶。由狹縫、準直鏡、色散原件（棱鏡和光柵）、聚焦透鏡組成，如圖2-4所示。其中色散原件是關(guān)鍵部件，常用的色散原件有棱鏡和光柵。2.單色器基

本

結(jié)

構(gòu)01圖2-4（a）光柵單色器（b）棱鏡單色光器示意圖

用來盛放溶液的容器稱為吸收池，也叫比色皿或比色杯。按材質(zhì)不同，分為玻璃吸收池和石英吸收池。在可見光區(qū)測定時，可用玻璃吸收池或石英吸收池;在紫外光區(qū)測定時，必須使用石英吸收池。吸收池上的指紋、油污或池壁上的污物都會汚響其透光性，因此使用前后必須徹底清洗。3.吸收池基

本

結(jié)

構(gòu)01檢測器是將通過吸收池的光信號轉(zhuǎn)換為電信號的電子元件，常用的是光電管和光電倍增管。光電倍增管是目前應(yīng)用最廣泛的檢測器，性能較好。4.檢測器基

本

結(jié)

構(gòu)01顯示器的作用是把放大的訊號以適當?shù)姆绞斤@示或記錄下來。一般配有計算機，進行數(shù)據(jù)顯示和處理,根據(jù)選擇的模式可直接顯示透光率（T）、吸光度（A）或濃度（c）等。5.信號處理及顯示器基

本

結(jié)

構(gòu)01單光束分光光度計以鎢燈或氫燈為光源，從光源到檢測器只有一束單色光。儀器結(jié)構(gòu)比較簡單，對光源發(fā)光強度要求較高。如國產(chǎn)722型（外形如圖2-5所示）、751型、UV755B型（外形如圖2-6所示）等。1.單光束分光光度計

類

型02圖2-5722型可見分光光計外形圖圖2-6UV755B型紫外-可見分光光度計外形圖雙光束分光光度計的光路系統(tǒng)如圖2-7所示。由于兩光束同時分別通過參比液和試樣液，自動消除光源變化所引起的誤差。2.雙光束分光光度計

類

型02

圖2-7雙光束分光光度計光路示意圖

雙波長雙光束分光光度計的光路系統(tǒng)如圖2-8所示。優(yōu)點：

測定時不需要參比池，可以避免吸收池不匹配、參比溶液與試樣溶液的折射率和散射作用不同而產(chǎn)生的誤差，特別適于在有背景吸收干擾或者有共存組分吸收干擾的情況下，對某組分進行定量測定。3.雙波長分光光度計

類

型02

圖2-8雙波長分光光度計光路示意圖

打開電源開關(guān)，點擊工作站圖標，儀器開始初始化自檢；儀器初始化時不能打開樣品室的蓋子。質(zhì)量標準：自檢通過，否則儀器無法工作。2.開機 1.開機前開機前確認紫外-可見分光光度計光路里無異物檢查。質(zhì)量標準：光路里應(yīng)無異物；有異物取出異物。按儀器說明書預(yù)熱。質(zhì)量標準：預(yù)熱后光源穩(wěn)定。3.預(yù)熱 操

作

規(guī)

程03將擋光板放入供試品的光路中(進口儀器不需校正)。 質(zhì)量標準：消除儀器部分噪聲帶來的誤差。根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇光度測量模塊、光譜掃描模塊等不同模塊。質(zhì)量標準：核對供試品的最大吸收波長時選擇光譜掃描；定量測定時選擇光度測量。5.選擇工作室模塊4.溶液的配制按要求標準配制供試品溶液、對照品溶液。質(zhì)量標準：嚴格按照標準配制供試品溶液、對照品溶液，以及相關(guān)試劑。6.暗電流校正 操

作

規(guī)

程03將裝入空白溶液的2個吸收池，放入儀器中校零或?；€。質(zhì)量標準：排除溶劑、容器的吸收，光的散射和界面反射等對測定結(jié)果的影響。8.校零或?；€7.參數(shù)設(shè)置根據(jù)標準設(shè)定波長、光度模式、光譜帶寬、換燈波長；波長范圍、掃描速度、掃描間隔等參數(shù)。質(zhì)量標準：根據(jù)實驗?zāi)康拇_定被測物的參數(shù)。倒出供試品光路中吸收池的空白溶液，用供試品溶液沖洗3次。裝入4/5高度的供試品溶液，置供試品光路中。質(zhì)量標準：掃描光譜圖。9.掃描圖譜 操

作

規(guī)

程03在光度模式下，測定吸光度值。 質(zhì)量標準：測得供試品溶液及對照品溶液的吸光度值。11.測吸光度10.圖譜處理選中圖譜文件，點擊工具欄上的峰值檢出。 質(zhì)量標準：核對供試品的最大波長是否在范圍內(nèi)，否則檢查儀器及溶液是否有誤。退出工作站，關(guān)閉儀器及電腦電源，取出吸收池。 質(zhì)量標準：儀器及電腦全部關(guān)機。12.關(guān)機 操

作

規(guī)

程0313.原始記錄及報告書 正確填寫原始記錄及報告書；數(shù)據(jù)處理正確。質(zhì)量標準：原始記錄要符合記錄與數(shù)據(jù)管理的相關(guān)要求。12.關(guān)機 操

作

規(guī)

程031.開機后，應(yīng)打開樣品室的蓋子，預(yù)熱20分鐘。2.確定波長位置，調(diào)整透光率為0%和100%位后，在測量過程中，不應(yīng)再改變波長、0%和100%位。3.在測定過程中如果需要改變波長，應(yīng)在改變波長后適當增加儀器的穩(wěn)定時間,再重新調(diào)透光率為0%和100%位。4.避免在儀器上方傾倒試樣溶液，以免試樣溶液污染儀器表面，損壞儀器。5.吸收池應(yīng)仔細清洗，保證其光潔度，避免摩擦吸收池透光面。若吸收池的透光玻璃面有殘液，應(yīng)用鏡頭紙吸干。6.準確記錄吸光度值，注意有效數(shù)字位數(shù)。使

用

過

程

的

注

意

事

項041.測光方式2.測光準確度3.波長范圍4.波長準確度5.波長重復(fù)性主

要

技

術(shù)

指

標0510.分辨率6.狹縫或光譜帶寬7.雜散光8.吸光度范圍9.吸光度重復(fù)性10.分辨率由于儀器不夠精密,如讀數(shù)盤標尺刻度不夠準確、吸收池的厚度不完全相同及池壁厚薄不均勻等;光源不穩(wěn)定、光電管靈敏性差、光電流測量不準等因素，都會引入誤差。2.儀器和測量誤差1.偏離朗伯-比爾定律引起的誤差溶液中吸光物質(zhì)不穩(wěn)定； 單色光不純。處理樣品溶液和標準溶液時沒有按完全相同的條件和步驟進行，如溶液的稀釋、顯色的用量、反應(yīng)溫度、放置時間等都可能引入誤差。3.操作過程引入的誤差 誤

差

的

來

源06許多有色物質(zhì)的顏色隨溶液的酸度改變而改變,大多顯色反應(yīng)對溶液的酸度有一定的要求.2.溶液的酸度1.顯色劑的用量為使顯色反應(yīng)盡量完全，一般加入過量的顯色劑。常通過實驗結(jié)果來確定顯色劑的用量。大多顯色反應(yīng)在常溫下進行，有些顯色反應(yīng)需要加熱才能完成。升溫可加快反應(yīng)速度，但也可產(chǎn)生副反應(yīng)，所以，應(yīng)根據(jù)具體的反應(yīng)選擇適當?shù)臏囟取?.顯色溫度 顯

色

反

應(yīng)07常通過控制顯色反應(yīng)的酸度，或加入掩蔽劑，或預(yù)先通過離子交換等方法來掩蔽或分離共存離子。5.共存離子的干擾及消除4.顯色時間

4.顯色時間有些顯色反應(yīng)需要經(jīng)過一段時間后才能達到平衡，溶液對特定波長的光的吸收才能穩(wěn)定。有些化合物放置一段時間后，因空氣的氧化、光的照射、試劑的揮發(fā)或分解等,溶液的吸光性才能達到穩(wěn)定。一般通過實驗來確定所需的最佳時間。3.顯色溫度 顯

色

反

應(yīng)07讀數(shù)范圍應(yīng)控制在吸光度為0.1～0.8、透光率為20%～80%時誤差較小?？梢酝ㄟ^控制試樣的取樣量來實現(xiàn):對于組分含量高的試樣，應(yīng)減少取樣量或稀釋試液;對于組分含量低的試樣，則可增加取樣量或用富集方法提高被測組分的濃度。如果試液已經(jīng)顯色，則可通過改變吸收池厚度的方法來改變吸光度值。2.選擇適當?shù)奈舛茸x數(shù)范圍1.波長的選擇根據(jù)“吸收大、干擾小”的原則選擇測量波長?？瞻兹芤簯?yīng)當是與配制樣品溶液條件相同而不含樣品的溶液。樣品溶液的濃度必須控制在標準曲線的線性范圍內(nèi)。3.選擇合適的參比（空白）溶液 測

量

條

件

的

選

擇08定性定量分析第一節(jié)031.能使用紫外-可見分光光度法進行定性分析樣品。2.能對樣品的吸收曲線進行分析，獲得最大吸收波長(λmax)。3.能使用定量分析方法進行樣品的測定，并處理實驗數(shù)據(jù)。學習目標定性分析01在相同的量條件下，分別測定未知物與標準物對不同波長的吸光度，繪制吸收光譜曲線圖，比較二者是否一致。將未知物的吸收光譜與標準吸收光譜直接比較如果兩個吸收光譜的形狀，包括吸收光譜上吸收峰的數(shù)目、最大吸收波長(λmax)、摩爾吸光系數(shù)（ε）等完全一致，則初步判斷未知物與標準物可能是同一化合物。定量分析02對在紫外-可見光區(qū)有吸收的無機和有機化合物進行定量分析；使紫外-可見光區(qū)的非吸收物質(zhì)與某些試劑發(fā)生“顯色反應(yīng)”生成有強烈吸收的產(chǎn)物,實現(xiàn)對“非吸收物質(zhì)”的定量測定；定量分析的理論依據(jù)是光的吸收定律，即

。定量分析021.標準曲線法操作方法配制一系列濃度不同的標準溶液，以不含被測組分的空白溶液作為參比溶液,在相同條件下測定各標準溶液的吸光度，繪制A-c曲線圖，稱為標準曲線（或工作曲線），如圖2-9所示。在相同條件下測出樣品溶液的吸光度，在標準曲線上可查出其樣品溶液相應(yīng)的濃度。定量分析022.比較法（標準對照法）操作方法一在相同實驗條件下,配制樣品溶液和標準品溶液（樣品溶液中被測組分與標準組分是同一物質(zhì)），在選定最大波長處，分別測量其吸光度，根據(jù)朗伯-比爾定律，得：注意事項光的吸收定律只適用于稀溶液，所以在測定溶液的吸光度時需要將原樣品溶液進行稀釋，然后根據(jù)下式計算原樣品液的濃度。

c原液=c樣×稀釋倍數(shù)定量分析022.比較法（標準對照法）操作方法二測定不純試樣中被測組分含量時，可配制相同濃度的試樣溶液ρ樣和標準品溶液ρ標，在最大吸收波長λmax處分別測定其吸光度A樣和A標，設(shè)ρx為試樣溶液中被測組分的濃度，則被測組分的質(zhì)量分數(shù)為：

定量分析023.吸光系數(shù)法（絕對法）操作方法利用光的吸收定律表達式A=KcL進行計算的定量分析方法，在手冊中査出待測物質(zhì)在最大吸收波長λmax處的吸光系數(shù)ε或并在相同條件下測量樣品溶液的吸光度A,然后計算其濃度。實訓三

吸收系數(shù)法測定維生素B1片的含量第一節(jié)041.掌握片劑紫外-可見分光光度法的基本操作。2.掌握吸收系數(shù)法測定維生素B1含量的基本原理和計算。3.掌握片劑的取樣方法。01實訓目的１.器材紫外-可見分光光度儀。２.試藥維生素B1片，其規(guī)格為每片含維生素B15mg和每片含維生素B110mg兩種。3.試劑鹽酸溶液（9→1000）。實訓準備02

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于維生素B125mg），置100ml量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）約70ml，振搖15分鐘使維生素B1溶解，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置另一100mL量瓶中，再加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見分光光度法，在246nm的波長處測定吸光度，按

的吸收系數(shù)（

）為421計算，即得。03實訓內(nèi)容與步驟1.方法

式中:A為吸光度；

為百分吸收系數(shù)；L為液層厚度，cm,如無特別注明，L=1cm；D為稀釋倍數(shù)；03實訓內(nèi)容與步驟2.計算

V為供試品的溶解體積，mL；

取為供試品的取樣量，g；

為平均片重,g；

為

隱含的單位。吸收系數(shù)法測定維生素B1片的含量數(shù)據(jù)記錄與處理03實訓內(nèi)容與步驟3.結(jié)果與數(shù)據(jù)處理樣品名稱

規(guī)格

樣品來源

檢驗員

樣品批號

檢驗依據(jù)

所用儀器

所用試劑

20片質(zhì)量/g

平均片重（m片）/g

供試品取樣量（m樣）/g

供試品的溶解體積（V）/mL

供試品溶液的稀釋倍數(shù)（D）

供試品溶液吸光度（A）

平均值:本品含維生素B1占標示量的百分比/（%）

維生素B1片中含有輔料，測量前應(yīng)進行過濾操作。本實驗先定容，后過濾，過濾時，所用儀器均需干燥。棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液進行分析，保證濃度一致，從而保證結(jié)果的準確。掌握片劑的取樣方法，并正確計算取樣量范圍。03實訓內(nèi)容與步驟4.注意事項實訓測評04序號考核內(nèi)容考核標準配分得分1文明操作符合HSE規(guī)定5

2溶液配制正確配制鹽酸溶液（9→1000）5

3儀器使用正確開機預(yù)熱5

正確調(diào)節(jié)波長5正確使用比色皿104實驗操作空白溶液校零10

待測溶液的潤洗10

5實驗結(jié)果精密度（相對極差）≤0.50％滿分；每增加0.50%扣5分，扣完為止。25

含量符合中國藥典規(guī)定得10分，不符合得0分。10

6數(shù)據(jù)記錄及時記錄數(shù)據(jù)（發(fā)現(xiàn)篡改數(shù)據(jù)本實訓計0分）10

7結(jié)束工作完成整理和清洗工作5

合計100

1.簡述片劑過濾的操作要點。2.如果維生素B1片的規(guī)格是10mg，試問取樣量范圍是多少。05實訓思考實訓四

雙波長分光光度法測定復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量第一節(jié)051.掌握雙波長分光光度法的基本原理。2.掌握復(fù)方制劑不經(jīng)分離直接測定各組分含量的方法。3.學會用單波長型分光光度儀進行雙波長含量測定。01實訓目的

選擇兩個波長λ1和λ2，待測物質(zhì)在這兩個波長處的吸光度之差ΔＡ（選λ1作參比波長、λ2作測定波長，可直接讀出ΔＡ）與待測物質(zhì)濃度成正比，而與干擾物濃度無關(guān)。02實驗原理１.器材紫外-可見分光光度儀２.試藥復(fù)方磺胺甲噁唑片，磺胺甲噁唑?qū)φ掌?，甲氧芐啶對照品3.試劑乙醇，0.4%氫氧化鈉溶液，鹽酸-氯化鉀溶液實訓準備03（1）供試品溶液制備:

取本品10片，研細，精密稱取適量（約相當于磺胺甲噁唑50mg與甲氧芐啶10mg）,置100mL容量瓶中，加乙醇適量，振搖15min使磺胺甲噁唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。04實訓內(nèi)容與步驟1.磺胺甲噁唑的測定（2）對照品溶液制備:精密稱取在105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑?qū)φ掌?0mg與甲氧芐啶甲氧芐啶對照品10mg,分別置100mL容量瓶中，各加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液（Ⅰ）與對照品溶液（Ⅱ）。04實訓內(nèi)容與步驟1.磺胺甲噁唑的測定（3）測定方法:

精密量取供試品溶液與對照品溶液（Ⅰ）（Ⅱ）各2mL,分別置100mL容量瓶中，各加0.4%氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，取對照品溶液（Ⅱ）的稀釋液，以257nm為測定波長（λ2），在304nm波長附近（每次試測時間隔0.5nm）選擇等吸收點波長為參比波長（λ1），要求

。再在λ2與λ1波長處分別測定供試品溶液的稀釋液與對照品溶液（Ⅰ）的稀釋液的吸光度，求出各自的吸光度差值（?A）,計算，即得。04實訓內(nèi)容與步驟1.磺胺甲噁唑的測定

精密量取上述供試品溶液與對照品溶液（Ⅰ）（Ⅱ）各5mL,分別置100mL容量瓶中，各加鹽酸-氯化鉀溶液（取0.1mol/L鹽酸溶液75mL與氯化鉀6.9g,加水至1000mL,搖勻）稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，取對照品溶液（Ⅰ）的稀釋