免疫濁度技術(shù)概述

試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)免疫反響進(jìn)展1897年Kraus就覺察細(xì)菌培育液〔毒素〕與相應(yīng)抗血清混合消失沉淀1905年Bechhold把抗體放在明膠中，將抗原加于其中，覺察沉淀反響可在凝膠中進(jìn)展1946年Oudin報告了試管免疫集中技術(shù)1965年Mancini提出單向免疫集中技術(shù)，使定性免疫試驗(yàn)向定量化進(jìn)展1966年免疫濁度法的消失，使沉淀反響到達(dá)快速、微量、自動化的新階段。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)免疫測定原理利用抗原抗體反響檢測標(biāo)本中微量物質(zhì)抗原+抗體抗原抗體復(fù)合物Ag+AbAg*Ab試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)免疫測定特點(diǎn)特異性

抗原性不同的物質(zhì)不干擾敏感性

g---ng---pg可測物

蛋白質(zhì)，酶，激素，藥物，毒品試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)免疫檢測的根底—抗原抗體間的特異性反響手工操作自動化分析免疫比濁分析技術(shù)進(jìn)展試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)兩個階段測定抗原抗體形成后的階段散射(終點(diǎn))比濁測定抗原抗體結(jié)合的峰值速率散射比濁免疫比濁法分類當(dāng)一束光線通過溶液受到光散射和光吸取兩個因素的影響而使光的強(qiáng)度減弱透射比濁法:在光源的光路方向〔00〕測量透射光強(qiáng)度和被檢測溶液微粒濃度關(guān)系的方法。散射比濁法:在光源的光路方向〔50-960〕角的方向上測量散射光強(qiáng)度和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)透射比濁/散射比濁光源濾光片反響杯透射光檢測散射光檢測試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)一、散射免疫比濁分析原理散射比濁法：在液相中可溶性抗原、抗體特異性結(jié)合，形成肯定大小的復(fù)合物粒子，當(dāng)入射光沿水平軸照射在粒子顆粒上時，光線被顆粒吸取或折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，其偏轉(zhuǎn)的角度與放射光的波長和復(fù)合物顆粒大小和多少有關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測抗原越多，形成的復(fù)合物越多，散射光就越強(qiáng)。影響散射信號的因素：如入射光的波長、偏振、微粒大小、濃度、質(zhì)量、以及檢測點(diǎn)的距離。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)〔一〕散射顆粒與散射光Rayleigh原理：即散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的量呈正比，與散射光的夾角呈正比，與波長呈反比。在散射比濁中，增加抗原-抗體復(fù)合物的體積，削減入射光的波長，擴(kuò)大散射光夾角等因素，均可增加檢測的敏感度。假設(shè)顆粒直徑比入射光的波長小的多則散射光的分布比較均勻假設(shè)顆粒直徑接近入射光的波長，則散射光的分布呈明顯不均勻稱為Rayleigh散射稱為Mile散射試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)〔二〕反響物含量與散射濁度Heidelberger曲線：即當(dāng)抗體量恒定時，形成的抗原抗體復(fù)合物的反響與散射信號響應(yīng)值的上升呈正比。同時，散射信號隨抗原抗體反響時間增加而曲線上升。當(dāng)抗原量與響應(yīng)值上升到一極限時，再增加抗原量，使散射響應(yīng)值快速下降因此，在承受散射比濁測定時，肯定要保證抗體過量。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)二、定時散射比濁分析〔一〕根本原理

是將沉淀反響與散射比濁分析相結(jié)合，“在抗原抗體反應(yīng)幾秒鐘后開頭測定峰值信號”。目的是排解抗原抗體反響的不穩(wěn)定性，降低檢測誤差。承受抗體過量，以獲得顆粒產(chǎn)生的最強(qiáng)的散射光信號。時間檢測分兩個在預(yù)反響時段，加小量樣本與抗原抗體反響，測定第一次散射光信號值加全量樣本，約反響2分鐘后，其次次測定散射光信號信號峰值計(jì)算機(jī)處理轉(zhuǎn)換為樣品濃度試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)二、定時散射比濁分析〔二〕抗原過量檢測抗體過量—在檢測中抗體結(jié)合抗原的力量可到達(dá)相當(dāng)于正常血清的50倍以上，以保證高濃度樣本中的抗原與抗體的結(jié)合。對抗原過量進(jìn)展閾值限定—先測定預(yù)反響時段抗原-抗體復(fù)合物的散射光信號，假設(shè)未超過閾值，可進(jìn)展全量樣本測定。假設(shè)超過閾值，提示樣品濃度過高，需稀釋后測定。承受兩項(xiàng)保證措施：試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)三、速率散射比濁分析〔一〕根本原理

—是測定抗原抗體結(jié)合反響的動態(tài)過程。—所謂速率，是在單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物的速度。將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)的速率比濁分析?！?dāng)儀器測定到某一時間內(nèi)形成速率下降時，即消失速率峰，該峰值的凹凸，即代表所測抗原的量。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)三、速率散射比濁分析〔一〕根本原理

〔二〕抗原過量檢測設(shè)計(jì)原理?

—速率峰值一般在25秒時消失?！诜错懡橘|(zhì)中參加肯定量的促凝劑，可加速抗原抗體復(fù)合物的形成，以削減反響時間?！俾史ǖ膬?yōu)點(diǎn)：是快速、不需要減去樣本和試劑本底讀數(shù)，校正結(jié)果也較穩(wěn)定。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)四、免疫透射比濁分析〔一〕根本原理

—當(dāng)光源的光路〔角度與正前方夾角為00時〕，通過肯定體積的溶液，由于溶液中抗原抗體結(jié)合復(fù)合物粒子對入射光因反射、吸取或散射而衰減。透射光的強(qiáng)度和形成的復(fù)合物的量呈反比。檢測器檢測器光源透鏡濾光片平光線散射光透射光

θ散射比濁、透射比濁光路圖試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)四、免疫透射比濁分析〔一〕根本原理是個極其簡潔的方法。在抗原過量狀況下，與待測樣品中相應(yīng)的Ig發(fā)生抗原-抗體反響，形成可溶性復(fù)合物，使反響介質(zhì)的濁度發(fā)生轉(zhuǎn)變。測量方法利用分光光度計(jì)測量被吸取的量。讀數(shù)以吸取單位〔A〕或OD值表示，A值反映了入射光和透射光的比率。待測物中Ig含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出。待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比。反響在PEG的作用下，加速復(fù)合物的形成。

試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)四、免疫透射比濁分析〔二〕試驗(yàn)要求溶液中形成的復(fù)合物分子應(yīng)足夠大(35-100nm)溶液中形成的復(fù)合物分子要足夠多掌握抗原抗體反響的溫度和時間加促凝劑，提高復(fù)合物形成速度，縮短檢測時間應(yīng)選擇親和力好、效價高的抗體，保證抗體過量將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至少5個濃度測定，以吸光度值(A)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，在半對數(shù)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)

免疫比濁分析的臨床應(yīng)用

檢范圍測如免疫球蛋白IgG、IgA、IgM

、；補(bǔ)體C3、C4；血漿蛋白AAT、TRF、A1M、CER；尿蛋白系列尿微量白蛋白視黃醇結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白

2

微球蛋白(

2

M)

1

微球蛋白(

1

M)小分子治療藥物檢范圍測血漿、體液中特種蛋白試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)乳膠2種反響模式:++試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)反響過程圖緩沖液試劑1攪拌器樣品混勻膠乳試劑2混勻第一次讀數(shù)其次次讀數(shù)試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)吸光度/時間試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)檢測模式圖最終點(diǎn)D最終點(diǎn)-樣品空白D-A最終點(diǎn)–初始點(diǎn)D-B動力學(xué)(C-B)/時間試劑2〔膠乳或抗血清〕樣品和試劑1〔緩沖液〕時間D.O.OD變化試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)鉤狀效應(yīng)試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)鉤狀現(xiàn)象抗體過剩區(qū)沉淀隨抗原量的參加而增多上清液中仍舊有游離的抗體平衡區(qū)產(chǎn)生最大量的沉淀沒有游離的抗原和抗體抗原過剩區(qū)由于抗原量過多，造成小的免疫復(fù)合物消失,上清液中有游離的抗原試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)各組份的作用緩沖體系:供給最適合反響條件,提高反響靈敏度。避開非特異性反響?？s短反響時間。主要反響物:完成抗原抗體反響所需的成份。校準(zhǔn):建立測定吸光度和物質(zhì)含量之間的計(jì)算關(guān)系。質(zhì)控:驗(yàn)證校準(zhǔn)。試驗(yàn)免疫濁度技術(shù)歡送來到速率散射王國

IMMAGE

ImmunochemistrySystem

IMMAGE雙光徑速率濁度分析系統(tǒng)高效蛋白隨機(jī)TDM兩種技術(shù)(透射法+散射法)，四種方法速率散射比濁法(蛋白檢測)速率抑制散射比濁法(TDM)近紅外顆粒速率法免疫分析(RateNIPIA)速率抑制NIPIA(低分子量TDM)

IMMAGE檢測原理---速率散射法(670nm)ARRAY的優(yōu)秀傳統(tǒng)：20年實(shí)踐證明卓越的準(zhǔn)確度和準(zhǔn)確度激光光源近紅外顆粒透射免疫分析法：速率透射法(940nm)增加高敏分析檢測菜單：地高辛，H-CRP，鐵蛋白排解高膽紅素和溶血性樣本的非特異性干擾LED光源12Conjugate-antibodycomplexing213Inhibitionofcomplexingbyhapten(drug)1.Conjugate(haptenoncarrier)

2.Antibody

3.Hapten(drug)速率散射抑制法(670nm)TDM檢測Onboardcoolingsystem試劑冷藏系統(tǒng)---增加試劑穩(wěn)定性四個緩沖液位---完成1400個測試樣品針試劑針分別---同時完成取樣和加試劑提高檢測速度全面的液面探測系統(tǒng)LevelSensorFluidSensorIMMAGE39個半永久性反響杯---同時檢測質(zhì)控、定標(biāo)和樣本全面的條形碼系統(tǒng)(各種通用條形碼)72個樣本位(每試劑位檢測24種工程)真正的隨機(jī)急診功能(不需停機(jī))IMMAGE---自動校正光源---原始試管功能---敏捷的系統(tǒng)界面：觸摸式，鼠標(biāo)，鍵盤---24小時隨時待機(jī)---每日保養(yǎng)：擦拭探針---特殊的試劑蓋:不再需要開關(guān)瓶(穿刺式)IMMAGE簡便的操作系統(tǒng)單點(diǎn)定標(biāo)IMMAGE在速率峰根底上完成的定標(biāo)曲線Concentra