微生物的實驗室培養(yǎng)（純化）

湖南新寧二中生物組專題二

微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題微生物的培養(yǎng)與純化2、稀釋涂布平板法湖南新寧二中生物組純化大腸桿菌1、平板劃線法湖南新寧二中生物組純化大腸桿菌1、平板劃線法通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，分離得到由一個細胞繁殖而來的菌落。第一步灼燒接種環(huán):為了避免接種環(huán)上存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán):為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán):為了及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種。討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？湖南新寧二中生物組討論2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。2、稀釋涂布平板法湖南新寧二中生物組純化大腸桿菌將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。湖南新寧二中生物組討論1.涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進行無菌操作？酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管要在酒精燈火焰周圍；

微生物的恒溫培養(yǎng)湖南新寧二中生物組溫度：37℃時間：24小時菌種的保藏湖南新寧二中生物組1、臨時保藏：將菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保藏。

2、長期保存：甘油冷凍管藏法牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5g蛋白胨10gNaCI5g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。湖南新寧二中生物組例1、某同學為了純化大腸桿菌，配制了如下培養(yǎng)基的配方。請回答：(1)該培養(yǎng)基中缺____。其作用是_______。培養(yǎng)基所含的氮源有____________。(2)分析培養(yǎng)基配方，可知大腸桿菌的同化作用類型為__________。原因是_______________________________________.瓊脂作凝固劑牛肉膏、蛋白胨異養(yǎng)型培養(yǎng)基中牛肉膏蛋白胨為有機碳源和氮源湖南新寧二中生物組(3)純化大腸桿菌要進行接種，接種的環(huán)境必須_______,接種的方法很多，最常用的方法是______________________和______________________。例1、某同學為了純化大腸桿菌，配制了如下培養(yǎng)基的配方。請回答：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5g蛋白胨10gNaCI5g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。無菌平板劃線法稀釋涂布平板法高考真題1(08山東)34．【生物—生物技術(shù)實踐】科學家發(fā)現(xiàn)家蠅體內(nèi)存在一種抗菌活性蛋白。這種蛋白質(zhì)具有極強的抗菌能力，受到研究者重視。（1）分離該抗菌蛋白可用電泳法．其原理是根據(jù)蛋日質(zhì)分子的

、大小及形狀不同，在電場中的

不同而實現(xiàn)分離。（2）可用金黃色葡萄球菌來檢驗該蛋白的體外抗菌特性?？咕鷮嶒炈门囵B(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨主要為細菌生長提供

和

。湖南新寧二中生物組電荷(帶電情況)遷移速度碳源氮源（3）分別在加入和未加入該抗菌蛋白的培養(yǎng)基中接種等量的菌液培養(yǎng)基中菌落的

，確定該蛋白的抗菌效果。（4）細菌培養(yǎng)常用的接種方法有

和

。實驗結(jié)束后，對使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進行

處理。湖南新寧二中生物組數(shù)量平板劃線法稀釋涂布平板法(稀釋混合平板法)滅菌(08廣東生物)38．（生物技術(shù)實踐，10分）

苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品，請回答下列問題：（1）②中培養(yǎng)口的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基

A（A.影響；B.不影響）細菌的數(shù)量，如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法。（2）④為對照、微生物在④中不生長、在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于

④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源,⑤的培養(yǎng)基中加入苯酚作為碳源；使用稀釋涂布平板或平板劃線法法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)？防止冷卻后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基湖南新寧二中生物組（3）如何比較不同菌株降解苯酚能力的大??？5支潔凈培養(yǎng)瓶→分別加入相同的培養(yǎng)基（加等量的苯酚，用PH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的PH值，用苯酚調(diào)試使之相等，苯酚是唯一的碳源）→分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種→在相同適宜的條件下培養(yǎng)相同的時間→再用PH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的PH值。苯酚顯酸性，不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同，5支瓶內(nèi)培