生物素化紫杉醇合成及人乳腺癌細(xì)胞株與紫杉醇耐藥株蛋白質(zhì)學(xué)差異分析的開(kāi)題報(bào)告

生物素化紫杉醇合成及人乳腺癌細(xì)胞株與紫杉醇耐藥株蛋白質(zhì)學(xué)差異分析的開(kāi)題報(bào)告開(kāi)題報(bào)告一、研究背景及意義紫杉醇是目前應(yīng)用最廣泛的抗癌藥物之一，但其藥理作用機(jī)制尚未完全闡明。最近的研究表明，生物素化酶能夠?qū)⒆仙即嫁D(zhuǎn)化為紫杉醇生物素，從而增加紫杉醇在細(xì)胞中的穩(wěn)定性、生物利用度和抗腫瘤作用。因此，深入了解紫杉醇生物素化轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制，對(duì)于解析紫杉醇抗腫瘤作用的機(jī)制、優(yōu)化其抗癌藥效、減少副作用具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。另外，隨著臨床使用紫杉醇時(shí)間的推移，出現(xiàn)了紫杉醇耐藥的現(xiàn)象，影響了其抗癌治療效果。因此，研究紫杉醇耐藥的分子機(jī)制，是解決其臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的問(wèn)題的重要途徑。二、研究?jī)?nèi)容本研究將以人乳腺癌細(xì)胞株為研究對(duì)象，通過(guò)基因工程技術(shù)，構(gòu)建紫杉醇生物素化合成酶的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化至乳腺癌細(xì)胞株中，觀察其對(duì)于紫杉醇抗癌作用的影響，并考察其生物化學(xué)機(jī)制。同時(shí)，將采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，比較人乳腺癌細(xì)胞株和紫杉醇耐藥株中的差異蛋白質(zhì)，篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)的蛋白質(zhì)，尋找紫杉醇耐藥的分子機(jī)制。三、研究方法1.構(gòu)建表達(dá)紫杉醇生物素化合成酶的載體，轉(zhuǎn)化至人乳腺癌細(xì)胞株中。2.采用CCK-8法，檢測(cè)紫杉醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株的抑制作用，比較轉(zhuǎn)化后細(xì)胞株和未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞株的敏感性差異。3.利用Westernblot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞株中生物素化合成酶的表達(dá)以及相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，探究其生物化學(xué)機(jī)制。4.采用2-DE技術(shù)構(gòu)建蛋白質(zhì)組，比對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株和紫杉醇耐藥株的差異蛋白質(zhì)表達(dá)情況。5.利用MALDI-TOF/TOF技術(shù)鑒定篩選出的差異蛋白，分析其生物功能及其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。四、研究預(yù)期成果1.構(gòu)建表達(dá)紫杉醇生物素化合成酶的載體，并驗(yàn)證其在人乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)。2.獲得紫杉醇抗癌作用在生物素化轉(zhuǎn)化下的新機(jī)理。3.篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)之蛋白質(zhì)和相關(guān)分子通路，有望開(kāi)發(fā)針對(duì)紫杉醇耐藥的新靶點(diǎn)。4.對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株的基本生物學(xué)特性及分子機(jī)制進(jìn)行了深入了解，為乳腺癌等其他惡性腫瘤的臨床治療提供了新思路。五、研究進(jìn)度安排第一年：1.構(gòu)建載體并轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞株。2.初步驗(yàn)證表達(dá)紫杉醇生物素化合成酶在細(xì)胞中的效果。3.利用Westernblot技術(shù)初步探究與生物素化轉(zhuǎn)化相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)情況。第二年：1.采用CCK-8法及熒光顯微鏡觀察細(xì)胞株對(duì)紫杉醇的敏感性結(jié)果。2.利用Westernblot技術(shù)深入研究生物素化轉(zhuǎn)化對(duì)于細(xì)胞中相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)調(diào)控情況。第三年：1.采用2-DE技術(shù)比對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株和紫杉醇耐藥株的差異蛋白質(zhì)表達(dá)情況，篩選出與紫杉醇耐藥相關(guān)的蛋白質(zhì)。2.利用MALDI-TOF/TOF技術(shù)鑒定篩選出的差異蛋白，并分析其生物功能及其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。六、研究經(jīng)費(fèi)預(yù)算本研究的經(jīng)費(fèi)預(yù)算如下：1.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)：15萬(wàn)元2.實(shí)驗(yàn)設(shè)備費(fèi)：30萬(wàn)元3.人員費(fèi)用：50萬(wàn)元4.圖書(shū)資料費(fèi)：5萬(wàn)元總計(jì)100萬(wàn)元七、研究團(tuán)隊(duì)本研究團(tuán)隊(duì)由生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組