黃芪多糖對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用

黃芪多糖對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用

近年來(lái)，蝗性胃炎的發(fā)病率有所增加。臨床上常用柳樹(shù)磺酰胺（sasp）和糖皮質(zhì)激素治療，但副作用大，容易復(fù)發(fā)。減少或避免治療新型藥物的副作用已成為研究的重點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)部分補(bǔ)益類中藥具有扶植腸道正常菌群生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)菌群失調(diào)、提高定植抗力功能,可起到益生元的作用的機(jī)理,選取黃芪多糖作為治療藥物,從微生態(tài)學(xué)角度探討其對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只,體重180~220g,雌雄各半,由牡丹江醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)基乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸標(biāo)準(zhǔn)品(美國(guó)Sigma公司),麗珠腸樂(lè)(珠海麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠),培養(yǎng)基(青島海博生物有限公司),2,4,6三硝基苯磺酸(TNBS)(Sigma公司),黃芪多糖(上海日升生物技術(shù)有限公司)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1治療前藥試驗(yàn)組10只60只大鼠隨機(jī)分為模型組(10只),正常對(duì)照組(20只),自然恢復(fù)組(10只),麗珠腸樂(lè)組(10只),黃芪多糖中藥組(簡(jiǎn)稱中藥組)(10只)。2.2大鼠結(jié)腸tnbs和乙醇液的制備除正常對(duì)照組外,其余各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.2ml/1009)將大鼠麻醉,固定。將外徑2.0mm、長(zhǎng)約15cm的輸液管(輸液管先用液體石蠟油潤(rùn)滑),從大鼠肛門逆行插入結(jié)腸內(nèi)深約8.0cm處,一次性將100mg/kgTNBS和50%乙醇的TNBS/乙醇液0.25ml注入大鼠結(jié)腸內(nèi),用棉簽堵住大鼠肛門,輕揉大鼠腹部lmin,使TNBS/乙醇液均勻地與大鼠結(jié)腸粘膜接觸。然后將大鼠頭向下,身體傾斜45°,放置lmin,再將大鼠放平。對(duì)照組用同樣方法,0.25ml生理鹽水灌腸,均自然清醒。3d后,處死造模組大鼠和10只正常對(duì)照組大鼠,剪取直腸和結(jié)腸組織,清洗后肉眼觀察結(jié)腸組織,并取腸段(10%甲醛溶液中固定)作組織切片以確定造模是否成功。2.3灌胃藥物治療中藥組采用黃芪多糖進(jìn)行灌胃治療(黃芪多糖濃度為0.2g/ml生藥量),麗珠腸樂(lè)組用麗珠腸樂(lè)灌胃治療,自然恢復(fù)和正常對(duì)照組用生理鹽水灌胃,以上各組灌胃量均為每次0.3ml,每天兩次,連續(xù)7d后處死進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。2.4指標(biāo)檢測(cè)2.4.1發(fā)酵在距大鼠回盲部末端10cm以內(nèi),無(wú)菌采取盲腸內(nèi)容物0.1g,將上述采集的標(biāo)本,應(yīng)用無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行10倍系列稀釋至10-9倍。不同稀釋度標(biāo)本滴種培養(yǎng)48h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。2.4.2色譜分析測(cè)定無(wú)菌條件下取0.05g盲腸內(nèi)容物,立即放入無(wú)菌玻璃試管中,溶于1ml蒸餾水中,加50%硫酸0.1ml、乙醚0.5ml蓋緊塞子,取1μl作色譜分析。將樣本注入進(jìn)樣器后,儀器自動(dòng)采集數(shù)據(jù)并送到1200工作站積分處理并作出色譜圖,其中記錄各有機(jī)酸的出峰順序、保留時(shí)間、峰高、峰面積百分比。2.4.3菌落計(jì)數(shù)壓將大鼠在無(wú)菌條件下取肝組織0.lg,置于無(wú)菌勻漿器中,加0.9ml生理鹽水勻漿,將標(biāo)本稀釋至10-3,用微量加樣器吸取標(biāo)本20μl滴種在中國(guó)蘭培養(yǎng)基上,置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。3統(tǒng)計(jì)分析工具實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果采用表示,試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS16.0數(shù)據(jù)分析軟件作統(tǒng)計(jì)分析,P>0.05表示差異不顯著,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。4結(jié)果4.1急性炎細(xì)胞感染模型組肉眼觀察顯示結(jié)腸粘膜充血、水腫、糜爛、出血、潰瘍,顯微鏡下顯示隱窩有急性炎細(xì)胞浸潤(rùn),固有膜內(nèi)有慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。正常對(duì)照組大鼠結(jié)腸粘膜組織肉眼觀察和顯微鏡下均顯示正常。4.2不同統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的差異p>0.05從表1可以看出,模型組與正常組相比,雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量明顯下降,腸桿菌和腸球菌數(shù)量顯著上升,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂(lè)組雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量均明顯上升,腸球菌和腸桿菌的數(shù)量明顯下降,相比自然恢復(fù)組具有顯著差異(P<0.05),中藥組與麗珠腸樂(lè)組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其對(duì)腸道微生態(tài)失調(diào)的調(diào)整作用中藥優(yōu)于麗珠腸樂(lè)。4.3下降且降低從表2可以看出,模型組與正常組相比,乙酸含量顯著下降,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂(lè)組乙酸含量顯著上升,與自然恢復(fù)組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.4不同中藥組與麗珠腸樂(lè)組腸桿菌數(shù)量變化比較從表3可以看出,模型組與正常組相比,腸桿菌數(shù)量明顯上升(P<0.05)。經(jīng)7d治療后,中藥組與麗珠腸樂(lè)組腸桿菌數(shù)量顯著上升下降,相比自然恢復(fù)組具有顯著差異(P<0.05),中藥組與麗珠腸樂(lè)組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),中藥組降低腸桿菌易位的作用優(yōu)于麗珠腸樂(lè)組。5討論5.1賴同時(shí)依賴關(guān)系與賴后相互制約機(jī)體與其正常菌群作為一個(gè)整體存在,它們既相互依賴又相互制約。黃芪多糖對(duì)雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的升高具有明顯促進(jìn)作用,可以降低腸桿菌、腸球菌的數(shù)量,可見(jiàn)黃芪多糖可以顯著改善腸道微生態(tài)失調(diào)。5.2黃棕櫚糖對(duì)厭氧菌代謝產(chǎn)物中醋酸含量的影響5.3不同時(shí)期自然恢復(fù)組與自然恢復(fù)組的比較經(jīng)過(guò)7d治療,大鼠肝臟細(xì)菌易位數(shù)量大幅度下降,與同時(shí)期自然恢復(fù)組相比,差異有極顯著性,說(shuō)明黃芪多糖能有效控制肝臟的需氧菌易位。其機(jī)制可能是通過(guò)增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力和機(jī)體免疫力來(lái)完成的。5.4扶正固本類中藥黃芪多糖與麗珠腸樂(lè)對(duì)微生態(tài)失調(diào)大鼠均具有調(diào)整菌群失調(diào)的作用,但從檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果比較中可以看出黃芪多糖的作用優(yōu)于麗珠腸樂(lè)(活菌制劑),其原因可能與中藥雙向性調(diào)節(jié)有關(guān)。