采用RNA干擾方法特異性降低胚胎干細(xì)胞中Nanog的表達(dá)的開題報(bào)告

采用RNA干擾方法特異性降低胚胎干細(xì)胞中Nanog的表達(dá)的開題報(bào)告一、選題背景和意義胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcells，ESCs）是來源于早期胚胎的多能性干細(xì)胞，具有自我更新、不斷增殖和分化成多種細(xì)胞類型的潛能特性。ESCs被廣泛用于體外建立不同發(fā)育階段的細(xì)胞模型，加深對細(xì)胞發(fā)育過程的認(rèn)識，并為生物醫(yī)學(xué)研究和治療提供了重要的基礎(chǔ)。然而，ESCs在體外培養(yǎng)過程中往往會失去自身的多能性特性，因此如何保持和調(diào)控ESCs的多能性是一個(gè)重要問題。Nanog是一種保持ESCs自我更新和多能性的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在EMT（Epithelial-MesenchymalTransition）和胚胎發(fā)育過程中也扮演重要角色。許多研究表明Nanog的表達(dá)水平與ESCs的多能性密切相關(guān)，Nanog的高表達(dá)可以促進(jìn)ESCs的自我更新和多能性，而Nanog的缺失則會導(dǎo)致ESCs的分化和失去干性。因此，針對Nanog的調(diào)控研究對于保持ESCs的多能性具有重要意義。RNA干擾是一種廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)調(diào)控的方法，通過特異性降解RNA分子來靶向調(diào)控基因表達(dá)。本研究旨在采用RNA干擾技術(shù)，特異性降低胚胎干細(xì)胞中Nanog的表達(dá)，探究Nanog在ESCs多能性維持中的調(diào)控機(jī)制。二、研究目標(biāo)本研究旨在通過RNA干擾方法，特異性降低胚胎干細(xì)胞中Nanog的表達(dá)，并評估Nanog調(diào)控ESCs多能性的功能。具體目標(biāo)如下：1.利用RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建具有高效降低Nanog表達(dá)的RNA序列；2.利用轉(zhuǎn)染技術(shù)將RNA序列導(dǎo)入ESCs中，并驗(yàn)證其特異性靶向降解NanogmRNA的效果；3.比較Nanog缺失和正常ESCs的形態(tài)學(xué)、生理學(xué)和遺傳學(xué)特性；4.分析Nanog缺失對ESCs的多能性維持和分化潛能的影響，探究Nanog調(diào)控ESCs多能性的機(jī)制。三、研究方法與步驟1.利用計(jì)算機(jī)軟件設(shè)計(jì)針對NanogmRNA的siRNA序列，篩選具有高效特異性的siRNA序列；2.將siRNA序列插入RNA載體，利用化學(xué)合成或體外轉(zhuǎn)錄的方式制備siRNA；3.構(gòu)建帶有siRNA序列的轉(zhuǎn)染載體（如Adenoviralvectors、Lentiviralvectors等），并構(gòu)建負(fù)載體作為對照組；4.利用轉(zhuǎn)染技術(shù)將轉(zhuǎn)染載體導(dǎo)入ESCs中，收獲轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞；5.采用qPCR、Westernblotting和免疫熒光染色等方法驗(yàn)證siRNA的特異性和高效靶向降解NanogmRNA的效果；6.通過形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)和CCK8檢測等方法比較Nanog缺失和正常ESCs的生理學(xué)特性；7.利用qPCR、微陣列芯片和ChIP-Seq等技術(shù)評估Nanog缺失對ESCs的多能性維持、分化和Nanog調(diào)控機(jī)制的影響。四、預(yù)期結(jié)果與意義1.通過RNA干擾方法成功降低ESCs中Nanog的表達(dá)，驗(yàn)證siRNA序列的特異性和高效性；2.比較Nanog缺失和正常ESCs的生理學(xué)特性，發(fā)現(xiàn)Nanog缺失對ESCs的增殖、形態(tài)學(xué)和細(xì)胞周期等生理學(xué)特性的影響；3.通過比較RNA干擾Nan