中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究實(shí)驗(yàn)?zāi)I陰虛型糖尿病動(dòng)物模型的研制

中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究實(shí)驗(yàn)?zāi)I陰虛型糖尿病動(dòng)物模型的研制

用單一腔注射鏈霉菌（stz），導(dǎo)致動(dòng)物糖尿病癥狀。然后用甲狀腺素（t4）皮下注射，以惡化動(dòng)物腎陰虛的表現(xiàn)?；蛴肨4皮下注射先引起動(dòng)物腎陰虛,再加用STZ注射,誘發(fā)動(dòng)物糖尿病。或單用STZ注射誘發(fā)糖尿病。這三種給藥方式,均使造模動(dòng)物表現(xiàn)出腎陰虛型糖尿病的證候?，F(xiàn)將動(dòng)物模型的制作方法、生化指標(biāo)測(cè)試結(jié)果報(bào)告如下。1材料和方法1.1動(dòng)物和試劑1.1.1實(shí)驗(yàn)飼料的制備Wistar種雌性大白鼠,體重200～250g,由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。購(gòu)入后先用市售固體飼料喂養(yǎng)3～5天,待適應(yīng)環(huán)境、體重開(kāi)始增加時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物隨機(jī)分成四組:A組:正常對(duì)照組;B組:STZ造模組;C組:先用STZ,后加用T4造模組;D組:先用T4,后加用STZ造模組。對(duì)照組和模型組均飲用自來(lái)水。1.1.2試劑(1)工藝的配制、注射Sigma公司產(chǎn)品,批號(hào):HO250。臨用前用pH4.2枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液溶解,配成2%的溶液,按65mg/kgbw的劑量一次性腹腔注射;(2)甲狀腺激素t4上海長(zhǎng)城生化制藥廠產(chǎn)品,批號(hào):960102。造模時(shí)T4用量為:0.2mg/kgbw/d,給藥方式為皮下注射,用藥天數(shù)7天。(3)ph4。2枸杞-枸杞鈉緩沖液臨用前配制。(4)問(wèn)卷的基本概念徐州生物化學(xué)制藥廠產(chǎn)品,批號(hào):961216。當(dāng)造模大白鼠的血糖(空腹)超過(guò)16.8mmol/L時(shí),連續(xù)‘兩天皮下注射胰島素8個(gè)單位。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1觀察項(xiàng)目體重、食量、飲水量、尿量、體溫、神態(tài)體毛、活動(dòng)度、大便等。1.2.2糖和常規(guī)尿檢動(dòng)物用代謝籠收集尿液作尿糖定性、尿蛋白、酮體、潛血等常規(guī)檢查。1.2.3尾取血糖檢測(cè)造模在給藥后的第3天開(kāi)始,每隔3天剪大鼠鼠尾取血測(cè)空腹8小時(shí)后的血糖值,儀器為美國(guó)Lifescan公司生產(chǎn)的OneTouch血糖儀。并在給藥后的第14天取血測(cè)肝、腎功能。2結(jié)果2.1遠(yuǎn)不如正常對(duì)照組模型組大白鼠隨著給藥日數(shù)的增加而日益消瘦,生長(zhǎng)發(fā)育遠(yuǎn)不如正常對(duì)照組。三組造模組體溫較正常組平均升高1.2°C,體毛無(wú)光澤,活動(dòng)頻度增加但反應(yīng)遲鈍,大便干結(jié)、色黑,飲水量、食量、尿量均高于正常組2～3倍。2.2均體重的增加正常組大鼠開(kāi)始平均體重210g,飼養(yǎng)20天后平均體重增加30g。三組造模組大鼠隨時(shí)間的延長(zhǎng),平均體重下降32.5g,與正常組比較,體重變化存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,三組之間的體重變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.3d組大鼠在t4注射前后的死亡率B組大鼠在STZ腹腔注射的第5～7天有3只死亡;C組大鼠在STZ注射后的第6天有2只死亡,加用T4注射后的第3天有3只死亡;D組大鼠在加用STZ注射后的第2天有1只死亡。共有9只死亡,死亡率為26%。死亡大鼠均行心臟采血,檢查血糖、肝功能和腎功能,結(jié)果均高于正常值,說(shuō)明大鼠死于高血糖誘發(fā)的肝、腎功能衰竭。2.4正常組與正常組血糖比較三組造模大鼠均在STZ腹腔注射后的第3天開(kāi)始,每間隔3～4天,監(jiān)測(cè)空腹8小時(shí)后血糖,結(jié)果顯示三組大鼠血糖均高于正常組(P<0.01)。三組之間血糖值比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(見(jiàn)附表)2.5尿糖監(jiān)測(cè)情況四組大鼠均用代謝籠收集24小時(shí)尿,測(cè)尿糖及尿常規(guī)。造模大鼠在注射STZ后24小時(shí)開(kāi)始監(jiān)測(cè)尿糖及常規(guī)檢查。結(jié)果三組造模大鼠均表現(xiàn)為尿糖定性強(qiáng)陽(yáng)性,無(wú)論血糖波動(dòng)情況如何,尿糖始終表現(xiàn)為強(qiáng)陽(yáng)性。50%的大鼠尿蛋白定性為弱陽(yáng)性。3腎陰虛型糖尿病模型的病證結(jié)合模型用甲狀腺素造腎陰虛模型早在七十年代就有報(bào)道。隨著中醫(yī)藥理論研究的深入,迫切需要研制出能反映人類疾病癥狀,且能體現(xiàn)中醫(yī)證型的病證結(jié)合的動(dòng)物模型。筆者用三種方式給大白鼠注射STZ和T415天,發(fā)現(xiàn)三組造模大鼠均有消瘦、生長(zhǎng)發(fā)育緩慢,體溫升高、毛無(wú)光澤,活動(dòng)頻度增加、反應(yīng)遲鈍,多飲、多食、多尿,大便干結(jié)等腎陰虛證表現(xiàn);同時(shí),造模大白鼠的血糖值均在10.0～17.0mmol/L之間,尿糖定性強(qiáng)陽(yáng)性,符合糖尿病動(dòng)物模型的標(biāo)準(zhǔn)?？梢哉J(rèn)為,三種造模方式均可造模腎陰虛型糖尿病的病證結(jié)合模型。鏈脲佐菌素是從無(wú)色鏈霉菌屬中分離出來(lái)的一個(gè)廣譜抗菌素,為無(wú)色固體,易溶于水。STZ能選擇性損傷胰腺β-細(xì)胞,而后引起這些細(xì)胞壞死。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在用藥后表現(xiàn)出人類典型的糖尿病癥狀,如高血糖、尿糖,多飲、多食、多尿,體重下降,酮尿及酸中毒,還可引起部分動(dòng)物腎功能損害而出現(xiàn)蛋白尿。糖尿病的癥狀符合中醫(yī)的消渴證特點(diǎn),即多飲、多食、多尿和體重下降。中醫(yī)根據(jù)“三多”癥狀,將消渴證分為上、中、下三消。病變臟腑在肺、胃、腎,而以腎為關(guān)鍵。肺主治節(jié),為水之上源,如肺燥陰虛,津液失于敷布,則胃失濡潤(rùn),腎失滋養(yǎng);胃熱偏盛,則可灼傷肺津,耗損腎陰。而腎陰不足,陰虛火旺,亦可上炎肺、胃,終至肺燥、胃熱、腎陰虛同時(shí)存在。本實(shí)驗(yàn)最后觀察的造模大白鼠,尿頻量多、混濁如脂膏,正處于腎陰