中華蚊母樹自然居群和遷地居群遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析

中華蚊母樹自然居群和遷地居群遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析

河岸帶作為一個(gè)重要的過渡帶，具有明顯的環(huán)境因素、生態(tài)過程和植物群落梯度。它是調(diào)整水和陸地之間的主要系統(tǒng)。河岸生態(tài)系統(tǒng)豐富，對(duì)維持區(qū)域生物多樣性有重要影響。河岸帶植物中華蚊母樹(Distyliumchinense(Fr.)Diels)為金縷梅科(Hamamelidaceae)蚊母屬(DistyliumSieb)植物,俗稱水漿柯子,常綠灌木,根系發(fā)達(dá)、盤根錯(cuò)節(jié)、硬如鐵絲,能在水下生存數(shù)月,是三峽庫(kù)區(qū)河岸帶固土護(hù)岸的良好樹種,對(duì)維持庫(kù)區(qū)河岸帶物種多樣性具有重要作用,同時(shí)也是上好的觀賞盆景樹種。野生的中華蚊母樹除了貴州茂蘭有少量分布外,主要分布于烏江流域及長(zhǎng)江三峽庫(kù)區(qū)湖北區(qū)域(宜昌、巴東、秭歸、長(zhǎng)陽)和重慶區(qū)域(巫山、黔江、酉陽、豐都、武隆、江津)長(zhǎng)江三峽兩岸海拔200m以下干流消落帶中上部,平均高0.8～1.2m。隨著水電工程的興建,烏江流域和長(zhǎng)江流域大部分野生中華蚊母樹群落伴隨著原有消落帶的消失其原生境也被淹沒,再加上人類的過度采伐,導(dǎo)致野生資源數(shù)量和遺傳多樣性遭到破壞,大面積分布的中華蚊母樹已經(jīng)很少見,現(xiàn)存的中華蚊母樹僅零星分布在烏江及長(zhǎng)江兩岸的河谷及溪流兩側(cè)。因此對(duì)其遺傳資源的研究及保護(hù)工作已十分必要。宜昌三峽植物園自2002年開始對(duì)中華蚊母樹進(jìn)行搶救性的保護(hù),建立了中華蚊母樹的遷地保護(hù)居群。為使中華蚊母樹資源長(zhǎng)期得到可持續(xù)利用,有必要對(duì)中華蚊母樹的遺傳多樣性進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)中華蚊母樹的研究主要集中在水淹機(jī)制、染色體結(jié)構(gòu)及ISSR種群結(jié)構(gòu)分析等方面的研究,利用SRAP(sequence-relatedamplifiedpolymorphism)分子標(biāo)記技術(shù)研究中華蚊母樹種群的遺傳多樣性迄今未見報(bào)道。SRAP標(biāo)記是一種新型的基于PCR的分子標(biāo)記系統(tǒng),由美國(guó)加州大學(xué)蔬菜作物系Li與Quiros博士于2001年提出。該標(biāo)記多態(tài)性好、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、高效、顯性(20%共顯性)、可檢測(cè)基因的可讀框(ORFs)區(qū)域,它具備了RFLP、RAPD、SSR和AFLP等分子標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn),克服了它們的缺點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于物種遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的分析。本研究采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)分布于三峽庫(kù)區(qū)的中華蚊母樹的遺傳多樣性和居群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,比較和評(píng)價(jià)遷地保護(hù)居群和自然居群的遺傳多樣性水平,為進(jìn)一步制定保護(hù)和群體恢復(fù)重建的策略提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1中華蚊母樹群落調(diào)查于2008年3～4月對(duì)野生中華蚊母樹在湖北省境內(nèi)的分布范圍進(jìn)行實(shí)地考察,發(fā)現(xiàn)在三峽庫(kù)區(qū)長(zhǎng)江兩岸的中華蚊母樹群落基本已經(jīng)被淹沒,在長(zhǎng)江的支流河谷兩岸的一些小群落由于中華蚊母樹可作為觀賞盆景被大量采挖,生境遭到極大破壞,只有零星分布。由此確定了有代表性的4個(gè)自然居群(巴東縣沿渡河鎮(zhèn)、秭歸縣香溪鎮(zhèn)、宜昌市樂天溪鎮(zhèn)及長(zhǎng)陽縣高家堰鎮(zhèn))和1個(gè)遷地居群(宜昌市三峽植物園)進(jìn)行采樣分析,其中遷地居群的樣本收集保護(hù)主要來自巴東縣沿渡河鎮(zhèn)。根據(jù)初步調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)中華蚊母樹5個(gè)居群的大小為58～65株,由此每個(gè)居群隨機(jī)采集8～10株幼嫩葉片,采樣的樣本之間的間距在10米以上,共48個(gè)樣本(5個(gè)居群生境資料見圖1和表1)。樣品用硅膠干燥保存,帶回實(shí)驗(yàn)室置于4℃冰箱保存至1個(gè)月內(nèi)完成電泳實(shí)驗(yàn)。1.2方法1.2.1dna的制備采用DoyleandDoyle的CTAB法提取DNA,其濃度和純度用BioPhotometerplus核酸蛋白測(cè)定儀檢測(cè),260nm/280nm的OD比值在1.8～1.9之間的DNA用于SRAP擴(kuò)增反應(yīng)。1.2.2pcr擴(kuò)增檢測(cè)按照Li和Quiros等提出的原則設(shè)計(jì)SRAP引物,由上海生工生物技術(shù)有限公司合成,所用的引物組合見表2。從90對(duì)引物中篩選出7對(duì)擴(kuò)增條帶較多、亮度清晰的引物。PCR反應(yīng)體系為:總反應(yīng)體積為20μL,包含1×PCRbuffer,2.5mmol·L-1MgCl2,0.15mmol·L-1dNTPs,1.5UTag酶,正向和反向引物各0.4μmol·L-1,50ng模板DNA,不足部分用ddH2O補(bǔ)足,PCR反應(yīng)于PTC-100擴(kuò)增儀上進(jìn)行。熱循環(huán)程序?yàn)?94℃預(yù)變性1min;94℃1min,33℃1min,72℃1min,共5個(gè)循環(huán);94℃1min,52℃1min,72℃1min,共30個(gè)循環(huán);72℃延伸5min,4℃保存。PCR產(chǎn)物在含有EB的1.5%瓊脂糖凝膠中電泳,在BIO-RAD凝膠電泳成像分析系統(tǒng)上照相。1.2.3遺傳變異分析根據(jù)電泳圖譜中DNA條帶的有無,將SRAP擴(kuò)增結(jié)果轉(zhuǎn)化為二元數(shù)據(jù)(有帶的量化為1,無帶的量化為0,強(qiáng)帶和弱帶均賦值,擴(kuò)增帶長(zhǎng)度在150～2000bp),構(gòu)建二元數(shù)據(jù)矩陣。應(yīng)用POPGENEversion1.32軟件對(duì)全部居群和各單個(gè)居群分別進(jìn)行遺傳多樣性指數(shù)分析:多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPF)、Shannon信息多樣性指數(shù)(I)、等位基因數(shù)(A)、有效等位基因數(shù)(Ae)、Nei’s基因多樣性指數(shù)(Hp)、種群總遺傳變異(Ht)、種群內(nèi)遺傳變異(Hs)、種群遺傳距離和遺傳相似度、居群間遺傳分化系數(shù)(Gst)、基因流(Nm)分析。將采用POPGENEversion1.32軟件計(jì)算得到的Nei(1978)的遺傳距離帶入NTSYS-pc2.10軟件對(duì)各個(gè)居群間進(jìn)行UPGMA聚類分析。利用SAS9.0軟件對(duì)中華蚊母樹所有48個(gè)樣品SRAP多態(tài)性條帶進(jìn)行主成分三維散點(diǎn)圖分析(PCA)。2結(jié)果與分析2.1豐富的遺傳多樣性采用篩選得到的多態(tài)性較高的7對(duì)SRAP引物組合對(duì)中華蚊母樹5個(gè)居群48個(gè)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增,共得到46條帶,平均每對(duì)引物擴(kuò)增出6.6條帶,片段大小為150～2000bp,其中的多態(tài)性條帶為37條,平均每對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶為5.3,平均多態(tài)性條帶百分率(PPF)為80.43%(表2)。結(jié)果表明該物種具有豐富的遺傳變異。圖2為引物Me2+Em1對(duì)部分參試材料擴(kuò)增的電泳圖譜。2.2遺傳多樣性指數(shù)中華蚊母樹遺傳多樣性分析結(jié)果見表3,中華蚊母樹物種水平的多態(tài)性條帶百分率(PPF)為100%,等位基因數(shù)(A)為2,有效等位基因數(shù)(Ae)為1.34,Nei’s基因多樣性指數(shù)(Hp)為0.2159,Shannon信息多樣性指數(shù)(I)為0.3509,表明中華蚊母樹物種多樣性水平較高。居群多態(tài)性條帶百分率在36.96%～89.13%之間,等位基因數(shù)(A)在1.37～1.89,有效等位基因數(shù)(Ae)在1.24～1.48,Nei’s基因多樣性指數(shù)(Hp)在0.1367～0.2838之間,Shannon信息多樣性指數(shù)(I)在0.2084～0.4322之間。其中有效等位基因數(shù)(Ae)、Nei’s基因多樣性指數(shù)(Hp)與Shannon信息多樣性指數(shù)(I)分析結(jié)果基本趨勢(shì)一致,居群多樣性指數(shù)大小為:三峽植物園(R5)(Ae=1.48,Hp=0.2838,I=0.4322)>沿渡河(R4)(Ae=1.40,Hp=0.2451,I=0.3810)>香溪(R3)(Ae=1.25,Hp=0.1529,I=0.2401)>高家堰(R1)(Ae=1.27,Hp=0.1486,I=0.2159)>樂天溪(R2)(Ae=1.24,Hp=0.1367,I=0.2089)。結(jié)果表明中華蚊母樹自然居群中沿渡河居群的遺傳多樣性較高,樂天溪居群的遺傳多樣性相對(duì)較低;遷地居群三峽植物園的遺傳多樣性大于自然居群的平均遺傳多樣性。2.3居群內(nèi)的遺傳變異利用POPGENEversion1.32軟件,計(jì)算不同居群之間的遺傳分化水平。結(jié)果表明,5個(gè)居群總的遺傳變異(Ht)為0.2188,居群內(nèi)的遺傳變異Hs為0.1934。根據(jù)總的遺傳多樣性(Ht)和居群內(nèi)遺傳多樣性(Hs)估測(cè)居群間遺傳分化系數(shù)(Gst),Gst=0.1161,表明在總的遺傳變異中僅有11.61%存在于居群間,88.39%變異存在于居群內(nèi),即遺傳變異主要存在于居群內(nèi)。居群間的基因流(Nm)=3.8072,遠(yuǎn)大于1,表明居群間遺傳分化較低,存在較頻繁的基因交流,是居群內(nèi)遺傳變異比較高的原因之一。2.4變遷地居群三大種類聚類分析用POPGENEversion1.32軟件計(jì)算了Nei’s遺傳相似度和遺傳距離,結(jié)果見表4。中華蚊母樹5個(gè)居群兩兩之間的遺傳相似度相對(duì)較高,變化范圍為0.9303～0.9925,遺傳距離的變化范圍為0.0075～0.0722。其中樂天溪和香溪居群之間的遺傳相似度最大,為0.9925。高家堰和三峽植物園之間的遺傳相似度最小,為0.9303。遺傳距離則正好相反。其中遷地居群三峽植物園與沿渡河居群遺傳相似度最高(0.9733),其次是與香溪居群(0.9488),而與高家堰居群遺傳相似度最低(0.9303),表明沿渡河居群是三峽植物園遷地保護(hù)居群的主要母體居群。利用NTSYS-pcversion2.10軟件,采用Nei’s遺傳距離對(duì)中華蚊母樹居群進(jìn)行UPGMA聚類,得樹狀圖(圖3)。以0.026為閾值,5個(gè)居群分為兩大類,長(zhǎng)江三峽沿岸香溪和樂天溪居群聚為一小類再與高家堰居群聚為一大類,而沿渡河和三峽植物園居群聚為另一大類,表明遷地保護(hù)居群三峽植物園的中華蚊母樹主要來自巴東沿渡河居群。在第一類中香溪和樂天溪居群首先聚為一小類,再與高家堰聚為一類,表明香溪和樂天溪居群遺傳距離最近、兩者親緣關(guān)系較近,香溪和樂天溪居群均位于長(zhǎng)江邊,且地理位置相距較近,也證實(shí)了遺傳距離分化與地緣距離存在較強(qiáng)的相關(guān)性。沿渡河和三峽植物園居群之間的聚類關(guān)系也比較近,這表明了三峽植物園居群與沿渡河居群親緣關(guān)系最近。2.5聚類分析結(jié)果中華蚊母樹居群主成分分析(PCA)結(jié)果表明,前三個(gè)主成分所包含的信息量占總信息量59.4%,其中第一主成分包含的信息量為42.11%,第二主成分包含的信息量為11.54%,第三主成分包含的信息量為5.75%,選取前3個(gè)主成分作三維散點(diǎn)圖(圖4)。三維散點(diǎn)圖清晰地顯示,5個(gè)居群的48個(gè)個(gè)體形成了兩個(gè)較為獨(dú)立地分布區(qū),高家堰、樂天溪和香溪居群聚合為一個(gè)獨(dú)立分布區(qū),巴東沿渡河和三峽植物園居群聚為另一個(gè)獨(dú)立分布區(qū),因此主成分分析基本支持上述UPGMA聚類的結(jié)果。另外從散點(diǎn)圖可見,每個(gè)個(gè)體的遺傳信息沒有相互重疊,從這個(gè)層次上也證明樣品采集的合理性,同時(shí)也說明所采集的48個(gè)樣本的整體多態(tài)性比較高。3討論3.1基于rapd位點(diǎn)分析的物種多樣性Hamrick和Godt通過對(duì)449種植物的653例等位酶遺傳變異研究的總結(jié),綜合分析了植物等位酶遺傳多樣性與系統(tǒng)位置、分布范圍、分布地區(qū)、生活型、繁育系統(tǒng)、種子傳播方式、生殖類型和演替階段8個(gè)特征的相互關(guān)系,指出地方特有種或狹域分布的種具有較低的遺傳多樣性,并在隨后的研究中進(jìn)一步證實(shí)了這一推論。但也有報(bào)道表明有些特有種甚至瀕危種也可能保持較高水平的遺傳變異,具有較高的遺傳多樣性。本研究結(jié)果顯示,中華蚊母樹作為三峽庫(kù)區(qū)區(qū)域特有的地方性物種其多態(tài)性條帶百分率(PPF)為100.00%,Nei’s基因多樣性指數(shù)(Hp)為0.2159,Shannon信息多樣性指數(shù)(I)為0.3509,表明中華蚊母樹在物種水平上具有較豐富的遺傳變異。Nybom通過比較不同分子標(biāo)記評(píng)價(jià)植物物種內(nèi)遺傳多樣性的差異發(fā)現(xiàn)顯性分子標(biāo)記具有可比性,可直接比較。因此,中華蚊母樹的遺傳多樣性水平與Nybom統(tǒng)計(jì)的基于RAPD位點(diǎn)分析的所有物種平均多樣性(Hp=0.2118)相持平,高于7個(gè)地方特有種(Hp=0.2000)、17個(gè)多年生短命植物種(Hp=0.2000)、27個(gè)雙子葉植物(Hp=0.1910)及10個(gè)自交物種(Hp=0.12)和8個(gè)混交物種(Hp=0.18)的多樣性水平,低于20個(gè)廣布種(Hp=0.2200)、38個(gè)異交物種(Hp=0.2700)、7個(gè)風(fēng)媒或水媒傳播種子的物種(Hp=0.2700)、16個(gè)進(jìn)化較晚的物種(Hp=0.3000)和同科近緣屬楓香屬植物楓香(Hp=0.3122)的多樣性水平。Hamrick和Loveless指出,物種的遺傳多樣性水平及其結(jié)構(gòu)與其生物學(xué)特性、生境以及起源進(jìn)化密不可分,其中繁育系統(tǒng)、分布范圍、生活型以及花粉和種子傳播方式的影響最大,其中廣布、異交和動(dòng)物傳播種子都會(huì)使得物種具有較高的遺傳多樣性。中華蚊母樹作為區(qū)域地方性物種具有較高遺傳多樣性可能是以下幾方面的原因所致。首先,中華蚊母樹為金縷梅科蚊母樹屬植物,曾分布在北美和東亞,由于新第三紀(jì)以后氣候變化以及第四紀(jì)冰期的作用,氣候劇變及嚴(yán)寒惡劣的環(huán)境對(duì)金縷梅科這樣一個(gè)亞熱帶和熱帶類群極為不利,很多類群在中緯度和高緯度地區(qū)逐漸滅絕,其分布區(qū)明顯向南收縮,只有在一些局部地區(qū)形成該類群的“避難所”。曾分布于北美地區(qū)的該物種已全部滅絕,現(xiàn)存中華蚊母樹僅分布于東亞,而中國(guó)主要分布于三峽庫(kù)區(qū)一帶。三峽庫(kù)區(qū)屬于歐亞古大陸的南緣,由于喜馬拉雅山運(yùn)動(dòng),該地區(qū)河谷不斷下切和高原不斷上升,群山起伏、河谷交錯(cuò),氣候類型豐富多樣,是分布于該地區(qū)的物種遺傳變異豐富的原因之一;其次,中華蚊母樹為多年生灌木,個(gè)體生命周期長(zhǎng),世代重疊,傳粉方式以蟲媒和風(fēng)媒為主(資料未發(fā)表),種子為蒴果,成熟后自然炸裂落地,隨波逐流,遇阻于石縫,水退,便落地生根,故多生長(zhǎng)在亂石夾縫中,在不同的選擇壓力下保留了各自的適宜基因,因而在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過程中積累了較高水平的遺傳變異;第三,本研究的分子標(biāo)記結(jié)果也表明中華蚊母樹物種具有較高的基因雜合度(Hp=0.2159),推測(cè)其交配系統(tǒng)為異交,同時(shí)中華蚊母樹種子千粒重僅為2.256～2.390g,傳播距離較遠(yuǎn),有利于基因交流,而且主成分三維散點(diǎn)圖顯示在每一個(gè)獨(dú)立分布區(qū)內(nèi),不是每個(gè)居群的個(gè)體各自聚在一起,而是幾個(gè)居群的個(gè)體相互聚在一起,表明這些居群間基因交流比較頻繁(Nm=3.8072),居群遺傳分化較低,居群內(nèi)遺傳多樣性水平較高。中華蚊母樹這些特殊的生物學(xué)特性、歷史進(jìn)化起源和對(duì)生境的適應(yīng)可能是其具有較高遺傳多樣性的重要原因。3.2中華蚊母樹系的遺傳多樣性正確的取樣策略對(duì)遺傳多樣性的有效保護(hù)至關(guān)重要,樣本量應(yīng)該包含能代表某一居群的總體遺傳多樣性水平。雖然采集的樣本量越大所包含的遺傳多樣性越豐富,但由于人力、財(cái)力、時(shí)間、樣本儲(chǔ)藏空間以及居群的實(shí)際條件等因素的限制,最佳的選擇是樣本量盡可能小,但包含遺傳多樣性盡可能豐富的樣本(最適合樣本)。趙茹等在100株野生大豆群體中選取10～15個(gè)樣本,采樣比例為10%～15%,采用AFLP、ISSR和SSR分子標(biāo)記對(duì)野生大豆群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析,所獲得的位點(diǎn)的預(yù)期雜合度(He)和Shannon多樣性指數(shù)(I)值達(dá)到總體樣本遺傳多樣性的90%,雖然樣本量不斷增加但是這兩個(gè)指數(shù)值基本保持不變,而且多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPF)始終為100%。初步選取并調(diào)查中華蚊母樹湖北省境內(nèi)的4個(gè)自然居群和1個(gè)遷地居群的大小為58～65株,每個(gè)居群隨機(jī)采集8～10株(取樣比例為13.33%～17.24%),采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果表明,在中華蚊母樹種內(nèi)居群水平上,與同科近緣屬楓香樹屬?gòu)V布種楓香的自然居群遺傳多樣性(PPF=59.11%;Hp=0.2514;I=0.3660)比較,中華蚊母樹自然居群的平均遺傳多樣性(PPF=55.98%;Hp=0.1708;I=0.2614)略低,但與特有種的平均居群多態(tài)性指數(shù)(0.2630)持平,高于特有種的平均居群雜合度(0.0630),可見中華蚊母樹種內(nèi)自然居群遺傳多樣性仍維持在較高水平。其中以巴東沿渡河居群的遺傳多樣性最高(PPF=84.78%;Ae=1.40;Hp=0.2451;I=0.3801),可能與當(dāng)?shù)貫┒?生境復(fù)雜有關(guān),較易與臨近的其它居群進(jìn)行基因交流,特別是與庫(kù)區(qū)上游生境復(fù)雜的巫山大寧河區(qū)域的中華蚊母樹居群進(jìn)行交流;而樂天溪居群生境相對(duì)簡(jiǎn)單,此段為庫(kù)區(qū)江面較寬處,與其他居群的交流受到一定的阻礙,因而該居群的遺傳多樣性最低。遷地保護(hù)居群三峽植物園的遺傳多樣性水平(PPF=89.13%;Ae=1.48;Hp=0.2838;I=0.4322)與其它自然居群相比,居群預(yù)期雜合度較高,居群保留的有效等位基因較多,這表明遷地居群遺傳變異豐富,保持了其自然居群狀態(tài)的遺傳多樣性水平。其中遷地居群和沿渡河居群聚為一類,遺傳親緣關(guān)系較大,這證實(shí)以前采取的遷地保護(hù)策略確是以沿渡河居群的樣本為主,輔以其它居群的少量個(gè)體。同時(shí),弄清楚物種的遺傳結(jié)構(gòu)也有利于制定出切實(shí)可行的遷地保護(hù)策略。一般來講,居群的遺傳分化程度越高,納入取樣范圍的居群數(shù)應(yīng)越多。根據(jù)95%的保護(hù)標(biāo)準(zhǔn),利用Andrew等的計(jì)算方法1-(Gst)n=95%(n為取樣居群數(shù)目)可以估計(jì)保護(hù)需要取樣的居群數(shù)目。例如在實(shí)際取樣時(shí),對(duì)于一個(gè)基因流比較小,Gst值為0.60的物種,至少要取6個(gè)居群才能保存其95%的遺傳多樣性,而對(duì)于Gst值為0.20的物種而言,要達(dá)到同樣的效果則只需取樣2個(gè)居群就足夠。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)中華蚊母樹Gst=0.1161,Nm=3.8072,居群間基因交流比較頻繁,居群遺傳分化比較低,遺傳變異的88.39%存在于居群內(nèi),表明只要對(duì)1個(gè)居群取樣就可保存物種95%的遺傳變異。因此結(jié)合前面的分析,進(jìn)一步說明了對(duì)中華蚊母樹初步保護(hù)的取樣策略有一定的合理性。但由于本研究取樣點(diǎn)較少,取樣數(shù)還不夠多,有可能導(dǎo)致中華蚊母樹遺傳多樣性較高,因此下一步的研究需加大研究范圍,增加自然居群數(shù)取樣的研究,為進(jìn)一步完善保護(hù)和重建策略提供更加科學(xué)的依據(jù)。同時(shí)根據(jù)我們對(duì)中華蚊母樹野生居群的調(diào)查發(fā)現(xiàn),中華蚊母樹主要分布在烏江和長(zhǎng)江流域的江(河)兩岸,由于水電工程的大量興建,使其原生居群被淹沒;分布于支流河谷兩岸的中華蚊母樹,由于其可作為盆景觀賞園林綠化植物而被大量采挖,幼苗有被啃食、埋沒、毀壞的現(xiàn)象,使居群所處的生境遭到不同程度的破壞,以致很難發(fā)現(xiàn)大量分布的野生居群。因此,作者的保護(hù)策略建議是:由于居群內(nèi)88.39%變異存在于居群內(nèi),僅有11.61%存在于居群間,即遺傳變異主要存在于居群內(nèi),居群間又有一定的分化,再結(jié)合繁育特性,建議在中華蚊母樹的保護(hù)保育策略上,除了現(xiàn)已主要保護(hù)的巴東沿渡河居群外,還應(yīng)增加其它高遺傳多樣性居群(如香溪、高家堰及樂天溪等)的取樣。取樣應(yīng)實(shí)行植株遷移和收集種子進(jìn)行繁育相結(jié)合,遷移保護(hù)地點(diǎn)除現(xiàn)有保護(hù)基地外,可以考慮在庫(kù)區(qū)支流的上游尋找適宜的河岸河灘作為保護(hù)保育基地,水電工程建成后,新消落帶重新形成,需重返新消落帶恢復(fù)重建自然居群。3.3遺傳聚類分析本研究采用SRAP標(biāo)記對(duì)中華蚊母樹進(jìn)行了遺傳多樣性分析,表明中華蚊母樹具有較高的遺傳多樣性(PPF=100.00%;Hp=0.2159;I=0.3509),與ISSR標(biāo)記的分析結(jié)果(PPF=100.00%;Hp=0.2379;I=0.3808)基本一致,但兩種標(biāo)記聚類結(jié)果有一定差異,ISSR標(biāo)記的聚類結(jié)果顯示高家堰居群?jiǎn)为?dú)聚為一類,另一類是樂天溪居群先與香溪居群聚為一小類,然后再與沿渡河和三峽植物園居群聚為一大類,而本研究SRAP聚類的結(jié)果是樂天溪居群先與香溪居群聚為一小類,后與高家堰居群聚為一大類,沿渡河和三峽植物園居群聚為另一大類。SRAP聚類結(jié)果表明地里距離比較近的樂天溪、香溪及高家堰居群