公共衛(wèi)生微生物采樣、檢測(cè)方法總結(jié)

公共衛(wèi)生微生物采樣、檢測(cè)方法總結(jié)一、空氣中微生物的檢測(cè)方法 細(xì)菌總數(shù)〔養(yǎng)分瓊脂，121℃高壓滅菌20min，培育時(shí)間37℃,48h〕1.兩種方法撞擊法(二級(jí)或者六級(jí)微生物采樣器)自然沉降法〔暴露5min〕采樣：梅花布點(diǎn)，高度：1.2~1.5m；離墻：1m。二、茶具微生物檢驗(yàn)方法〔一〕細(xì)菌總數(shù)1、生理鹽水的制法：將氯化鈉〔8.5g〕溶解于蒸餾水〔1000mL〕10mL，121℃20min。2、采樣：棉拭子潮濕生理鹽水，在茶具內(nèi)、外緣涂抹50cm2，即口唇接觸處一圈〔1~1.5cm〕，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸處，將10mL4h3、檢驗(yàn)程序：檢樣→各1mL參加兩塊滅菌平皿〔假設(shè)污染嚴(yán)峻，可十倍遞增稀釋〕→37℃，48h培育→菌落計(jì)數(shù)→報(bào)告4、單位：cfu/cm2。〔二〕大腸菌群1、培育基：乳糖膽鹽發(fā)酵培育液〔雙料的，每管10mL，115℃15min〕2、檢測(cè)方法：發(fā)酵法〔11〕3、檢樣〔測(cè)定細(xì)菌總數(shù)余下的樣品〕4、革蘭氏染色過(guò)程：〔陽(yáng)性菌顯紫色，陰性菌顯紅色〕初染：1min，水洗；碘染：1min，水洗；脫色：30s，水洗；復(fù)染：1min，水洗，待干，鏡檢。5、結(jié)果報(bào)告：凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，即可報(bào)告檢出大腸菌群。三、毛巾、床上臥具微生物檢測(cè)方法〔一〕細(xì)菌總數(shù)1.采樣毛巾、枕巾：對(duì)折后兩面的中心各25cm2；床單、被單：在上下兩部中心25cm2來(lái)回涂抹；2、檢測(cè)程序同茶具細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)3.計(jì)算單位：cfu/25cm2。(二)大腸菌群〔檢測(cè)程序同茶具大腸菌群檢測(cè)〕1.涂抹法：〔用測(cè)定細(xì)菌總數(shù)時(shí)采集的樣品〕四、理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法〔一〕大腸菌群1、采樣推子：在推子前部上下局部均勻各涂抹三次；理發(fā)刀、剪和修腳工具：在使用的刀、剪面的兩側(cè)各涂抹一次采樣；兩個(gè)刀或者兩個(gè)剪為一份樣品。2、檢樣5mL，37℃，24h3、分別培育：接種伊紅美藍(lán)平板，做革蘭氏染色鏡檢；4、證明試驗(yàn)：接種乳糖發(fā)酵管37℃，24h培育，觀看產(chǎn)氣狀況。5、結(jié)果報(bào)告：乳糖管最終產(chǎn)酸產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性?！捕辰瘘S色葡萄球菌1、培育基：7.5%的氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培育基2、步驟：做大腸菌群剩余的5mL倒入培育基中，37℃，24h培育；接種血平板，37℃，24h培育；觀看外形：圓形、金黃色、凸起、外表光滑、四周有溶血圈；挑菌落做鏡檢：革蘭氏陽(yáng)性〔紅色〕，葡萄狀排列；甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：接種到甘露醇發(fā)酵培育基中，37℃，24h培育，觀看是否產(chǎn)酸；血漿凝固酶試驗(yàn)玻片法：在干凈的玻片兩邊，一端滴一滴生理鹽水，一端滴一滴血漿，接種環(huán)挑菌落分別與它們混合。5min后均無(wú)凝固現(xiàn)象的為陰性；假設(shè)血漿中消滅顆粒狀凝塊而生理鹽水中沒(méi)有，則為陽(yáng)性。五、拖鞋微生物檢驗(yàn)方法霉菌與酵母菌〔生理鹽水中要參加玻璃珠〕培育基：霉菌培育基、〔虎紅〕孟加拉紅培育基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培育基〔PDA〕取樣：有棉拭子在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處的5cm×5cm面3將盛有棉拭子的試管在手心用力振蕩100次，使霉菌孢子分開(kāi)；培育：在霉菌培育箱中25~28℃，培育觀看一周。5cfu/50cm2。六、浴盆、臉〔腳〕盆微生物檢測(cè)〔一〕細(xì)菌總數(shù)無(wú)菌生理鹽水：分裝125mL/瓶供浴盆采樣；50mL供臉〔腳〕盆采樣。采樣部位：在盆內(nèi)側(cè)二分之一到三分之一高度；布點(diǎn)：浴盆梅花布點(diǎn)；臉〔腳〕盆相對(duì)兩側(cè)壁布點(diǎn)；方法：涂抹法〔與茶具方法全都〕單位：cfu/25cm2。〔二〕大腸菌群(同茶具)七、游泳池水微生物檢測(cè)〔一〕、細(xì)菌總數(shù)采樣瓶：無(wú)酸、無(wú)堿、無(wú)毒的玻璃容器。滅菌前要參加足量的10%的硫代硫酸鈉溶液，一般125mL水樣0.1mL。采樣游泳池水面積，㎡兒童池成人池自然游泳池≦1000>1000≦2500>25001~2235>5注：在水面下30cm處取水樣450mL4.操作步驟〔與茶具細(xì)菌總數(shù)一樣〕〔二〕大腸菌群培育基：三倍濃縮乳糖蛋白胨培育液〔蒸餾水量不變，其他成分三倍〕步驟推想性試驗(yàn)2個(gè)裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培育液的大試管內(nèi)〔裝有小試管〕100mL105mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培育液的試管里〔裝有小試管〕10mL平板分別接種伊紅美藍(lán)，培育、觀看；典型菌落形態(tài)：黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤?！?〕復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)進(jìn)展革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，培育，觀看?！?〕查表：1000mL水樣中大腸菌群的MPN值。八、生活飲用水微生物檢驗(yàn)方法〔一〕采樣采樣容器應(yīng)承受干凈、無(wú)色、無(wú)毒的聚乙烯塑料和硬質(zhì)玻璃〔又稱硼硅玻璃〕。樣品瓶必需專瓶專用，切不行用試驗(yàn)室盛裝過(guò)濃溶液的瓶作采樣瓶。通常我們使用500ml的高壓滅菌的細(xì)口瓶采樣。容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度。檢驗(yàn)中所用的一切用品必需是完全滅菌的。在滅菌前應(yīng)徹底洗滌干凈，121℃20min160℃2h。冷藏，4h內(nèi)檢測(cè)。如有游離余氯應(yīng)在采樣瓶消毒前每125ml加0.1ml〔二〕細(xì)菌總數(shù)〔操作步驟同茶具，記得做空白比照〕〔三〕總大腸菌群1.乳糖發(fā)酵試驗(yàn)〔1〕10mL水樣參加10mL雙料乳糖發(fā)酵管中；1mL水樣參加10mL單料乳糖發(fā)酵管中；0.1mL水樣加到10mL單料乳糖發(fā)酵管中；5〔2〕37℃培育24小時(shí)，觀看產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象2.分別培育〔接種伊紅美藍(lán)，培育〕證明試驗(yàn)〔革蘭氏染色，鏡檢，接種乳糖發(fā)酵管〕結(jié)果報(bào)考：查表?！菜摹衬蜔岽竽c菌群1.培育基：EC培育基操作步驟：同大腸菌群多管發(fā)酵法。培育溫度：44.5℃24h?！参濉炒竽c埃希氏菌培育基：EC-MUG培育基〔培育基加熱溶解后要先在366nm紫光下檢查有無(wú)熒光〕培育溫度：44.5℃培育24h。觀看：在暗處用366nm的紫外燈照耀，是否有藍(lán)色熒光產(chǎn)生；計(jì)算陽(yáng)性管數(shù)，查表得出最可能數(shù)，結(jié)果以MPN/100mL報(bào)告。九、公共場(chǎng)所集中空調(diào)系統(tǒng)〔一〕冷凝水、冷卻水中嗜肺軍團(tuán)菌采樣采樣容器：可選擇玻璃瓶或聚乙烯瓶，廣口瓶，用前滅菌。采樣量：每個(gè)采樣點(diǎn)依無(wú)菌操作取水樣〔或沉積物、軟泥等樣品〕500ml。中和：經(jīng)氯或臭氧等消毒的樣品，采樣容器滅菌前加硫代硫酸鈉溶液中和。樣品運(yùn)輸與貯存：樣品最好2天內(nèi)送達(dá)試驗(yàn)室，不必冷凍，但要15熱處理：取1ml洗脫樣品置50℃水浴加熱30min。酸處理：取5ml洗脫樣品，調(diào)pH至2.2，輕輕搖勻，放置5min。接種平板靜置于濃度為2.5%的CO2培育箱中，35~37℃，10d，留意保濕。觀看軍團(tuán)菌生長(zhǎng)緩慢，易被其它菌掩蓋，需每天在體式鏡上觀看。軍團(tuán)菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍(lán)色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，外表光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，局部有熒光?！捕乘惋L(fēng)中細(xì)菌總數(shù)以無(wú)菌操作，使用六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器，以空氣流量為28.3L/min，在采樣點(diǎn)采集5~15min。將采集細(xì)菌后的養(yǎng)分瓊脂平皿35~37℃48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)?！踩乘惋L(fēng)中真菌總數(shù)采樣方法同上將采集真菌后的沙氏瓊脂培育基平皿置28℃培育5~7d7d5d計(jì)cfu/m3。〔四〕送風(fēng)中β-溶血