食品生物技術(shù)《動物免疫與動物采血實驗操作規(guī)范》

動物免疫與動物采血一、動物保定在進(jìn)行動物免疫和動物采血之前，進(jìn)行動物保定是非常必要的。正確的抓取固定動物是為了不損害動物健康，不影響觀察指標(biāo)，并防止被動物咬傷，保證試驗順利進(jìn)行。下面介紹幾種常見實驗動物的保定方法。1小鼠的抓取固定方法小鼠性情溫順，一般不會主動咬人，但取用時動作也要輕緩。抓取時先用右手抓取鼠尾提起，放在其前，爪能抓牢的物體外表稍后提，或放在實驗臺上，在其向前爬行時，用左手拇食指迅速提住其后頸部皮膚，把鼠體置于左手心中，將鼠尾用無名指和小指壓在手掌上。右手即可進(jìn)行各種操作，如注射、灌胃及其他實驗操作。如進(jìn)行解剖、手術(shù)、心臟及尾部采血和尾靜脈注射時，那么需將小鼠做一定形式的固定，解剖手術(shù)和心臟采血等均可使動物先取背臥式〔必要時先進(jìn)行麻醉〕，再用大頭針或線繩將鼠前后肢依次固定在支持物上。尾靜脈采血或尾靜脈注射時，可用小鼠尾靜脈注射架固定；或倒放適當(dāng)大小和重量的容器，把小鼠放在里面只露尾巴，這種容器能夠壓住尾部不讓活動，同時起，到驅(qū)趕血液的作用；或把小鼠放在一黑布口袋里小鼠趨黑，向前爬動，在尾部將小口袋縮口，固定小布口袋后，可進(jìn)行尾靜脈采血或尾靜脈注射等操作。如只想移動小鼠，可用兩手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央將小鼠倒提起來。2大鼠的抓取固定方法4-5周齡以內(nèi)的大鼠和小鼠一樣抓住尾部提起來，周齡較大的大鼠尾部皮膚因為容易被剝脫，所以用左手從背部中央到胸部捏起來抓住。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用襲擊方式抓取，以防大鼠在驚恐或擊怒時咬傷手指，提拿時最好戴上防護(hù)手套，輕輕抓住尾巴后提起，置于試驗臺上，固定方法隨操作目的而定。如需尾靜脈取血或注射，可將大鼠固定盒內(nèi)或用小黑布口袋裝大鼠，使其只露尾部；如需腹腔注射或肌肉注射或灌胃，可用右手提住鼠尾，將鼠放在鼠爪能抓牢的物體外表，如鐵絲籠子，稍向后拉鼠尾、鼠身被拉長，用左手貼在鼠背，捏緊頭頂部和背部皮膚，即可將大鼠固定在左手中，右手可進(jìn)行其他操作；如需長時間固定操作，可將大鼠四肢固定在木板上，用一根棉繩拉住兩只門齒固定在頭部后木板上。3豚鼠的抓取固定方法豚鼠較為膽小易驚，不宜強烈刺激和受驚，所以在抓取時，必須穩(wěn)、準(zhǔn)和迅速。抓取幼小豚鼠時，用兩手捧起來，成熟動物那么用右手大把抓起來，用手固定，方法是先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部。也可用固定器固定豚鼠或?qū)㈦嗍笏闹潭ㄔ谀景迳稀?家兔的抓取固定方法。家兔比擬順服不會咬人，但腳爪較尖，應(yīng)防止抓傷。進(jìn)行皮下、腹腔、肌肉注射或測肛溫時，只須將家兔抓牢或按住就行即可，抓兔的方法是用右手把兩耳輕輕地拿在手心，抓緊頸后部的皮厚處，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的體重大局部落在左手上，不能單提兩耳，因為兔耳并不能承當(dāng)全身重量，易造成疼痛而引起掙扎。單提兩耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正確的抓法。當(dāng)只對兔的頭部進(jìn)行操作時，如耳靜脈注射、采血等，可用兔固定器固定頭部，對兔進(jìn)行測量血壓，呼吸及手術(shù)時，可將兔固定在實驗臺上，四肢用棉繩固定在實驗臺兩側(cè)，另用一根棉繩拴住兔的兩只門牙，另一端固定在實驗臺的鐵柱上即可。5狗的抓取固定方法未經(jīng)馴服練用于急性試驗的狗，因狗性兇惡，能咬傷人，因此進(jìn)行實驗時第一步就是要綁住狗的嘴。馴服的狗綁嘴時可從側(cè)面靠近輕輕撫摸其頸背部皮毛，然后迅速用布帶縛住其嘴，用粗棉帶從下頜繞到上頜打一結(jié)，然后繞下頜再打一結(jié)，最后將棉帶索引到頭后，在頸頂上打三結(jié)，在這結(jié)上再打一結(jié)，捆綁松緊要適宜，麻醉后應(yīng)立即解綁，尤其用乙醚麻醉時，以免由于鼻腔黏液阻塞而造成窒息。也可用特制的鉗或長柄狗夾夾住狗的頸部，注意不要夾傷嘴和其他部位，夾住頸后，使頭向上，頸部拉直，然后套上狗鏈。狗固定時先固定頭部，再固定四肢。頭部固定，固定狗頭需用一特制的狗頭固定器，狗頭固定器為一圓圈，圈的中央有一弓形鐵，與棒螺絲相連，下面有一根平直鐵閂。操作時先將狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的鐵圈內(nèi)，再用平直鐵閂橫貫于犬齒的上下頜之間，然后向下旋轉(zhuǎn)棒螺絲，使弓形鐵逐漸下壓在動物的下頜骨上，把鐵柄固定在試驗臺的鐵柱上即可。四肢固定，如果取仰臥位，四肢固定方法與家兔相同。二、動物免疫動物免疫接種的方法有很多，主要有注射免疫法、經(jīng)口免疫法、氣霧免疫法等。1注射免疫法注射免疫法中可分為皮下接種、皮內(nèi)接種、肌肉接種和靜脈接種等四種接種方法1.1皮下接種法家兔接種時，由助手把家兔俯臥或仰臥保定，于其背側(cè)或腹側(cè)皮下結(jié)締組織疏松局部剪毛消毒，術(shù)者右手持注射器，以左手拇指、食指和中指捏起皮膚使其成一個三角形皺褶，或用鑷子夾起皮膚，于其底部進(jìn)針。感到針頭可隨意撥動即表示插入皮下。當(dāng)推入注射物時感到流利暢通也表示在皮下。拔出注射針頭時用消毒棉球按住針孔并稍加按摩。豚鼠皮下接種，保定和術(shù)式同家兔。小鼠皮下接種時，無須助手幫助保定。術(shù)者在做好接種準(zhǔn)備后，先用右手抓住鼠尾，令其前爪抓住鐵絲蓋，然后用左手的拇指及食指捏住頭頸部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左右使小鼠腹部朝上，將其尾巴夾在左手掌與小指之間，右手消毒術(shù)部，把持注射器，以針頭稍微挑起皮膚插入皮下，注入時見有水泡微微鼓起即表示注入皮下。拔出針頭后，同家兔皮下注射時一樣處理。對牛、馬等大家畜皮下接種時，一律采用頸側(cè)部位，豬在耳根前方，家禽在胸部、大腿內(nèi)側(cè)。根據(jù)藥液的濃度和家畜的大小而異，一般用16-2021頭，長約-2.5cm。家禽那么應(yīng)采用針孔直徑小于2021針頭。1.2皮內(nèi)接種做家兔、豚鼠及小鼠皮內(nèi)接種時，均需助手保定動物，其保定方法同皮下接種。接種時術(shù)者以左手拇指及食指夾起皮膚，右手持注射器，用細(xì)針頭插入拇指及食指之間的皮膚內(nèi)，針頭插入角度要小，注入時感到有阻力且注射完畢后皮膚上有硬泡即為注入皮內(nèi)。皮內(nèi)接種要慢，以防使皮膚脹裂或自針孔流出注射物而散播傳染。大動物接種時，馬的皮內(nèi)接種采用頸側(cè)、眼瞼部位。牛及羊除頸側(cè)外，可在尾根或肩胛中央部位。豬大多數(shù)在耳根后。雞在肉髯部位。現(xiàn)在僅有羊痘弱毒菌苗、豬瘟結(jié)晶紫疫苗等少數(shù)制品，其他均屬于診斷液方面。一般使用專供皮內(nèi)注射的注射器，也可使用藍(lán)心注射器和相應(yīng)的注射器針頭。1.3肌肉接種大動物例如馬、牛、豬、羊的肌肉接種時，一律采用臀部和頸部兩個部位。小動物例如大白鼠、小白鼠、家兔、豚鼠的肌肉接種時，采用后肢股部，禽類的注射部位為胸肌部。術(shù)部消毒后，將針頭刺入肌肉內(nèi)，注射疫苗。靜脈接種家兔的靜脈接種：將家兔納入保定器內(nèi)或由助手把握住它的前、后軀保定，選一側(cè)耳邊緣靜脈，先用70%酒精涂察兔耳或以手指輕彈耳朵，使靜脈努張。注射時，用左手拇指和食指拉緊兔耳，右手持注射器，使針頭與靜脈平行，向心臟方向刺入靜脈內(nèi)，注射時應(yīng)無阻力且有血液向前流動即表示注入靜脈，緩慢注射，注射完畢用消毒棉球緊壓針孔，以免流血和注射物溢出。豚鼠靜脈接種：使豚鼠俯臥保定，腹面向下，將其后肢剃毛，用70%酒精消毒皮膚，施以全身麻醉，用銳利刀片向后肢內(nèi)上側(cè)向外下方切一長約1cm的切口，使露出尾部，用最小號針頭刺入尾側(cè)靜脈，緩慢注入接種物，接種完畢，將切口縫合一兩針。小鼠的靜脈注射：其注射部位為尾側(cè)靜脈。選15-20g體重的小鼠，注射前將尾部浸于約50℃溫水內(nèi)1-2min，使尾部血管擴張易于注射。用一燒杯扣住小鼠，露出尾部，用最小號針頭刺入尾側(cè)靜脈，緩慢注入接種物，注射時應(yīng)無阻力，皮膚不變白、不隆起，表示注入到靜脈內(nèi)。馬、牛、羊的靜脈接種，一律在頸靜脈部位，豬在耳靜脈部位。雞那么在翼下靜脈部位。2經(jīng)口免疫法飲水免疫與喂食免疫飲水免疫是將可供口服的疫苗混于水中，畜、禽通過飲水而獲得免疫，喂食免疫是將可供口服的疫苗用冷的清水稀釋后拌入飼料等事物中，畜、禽通過吃食而獲得免疫。疫苗經(jīng)口口免疫時，應(yīng)按畜、禽頭數(shù)和每頭畜、禽平均飲水量或吃食量，準(zhǔn)確計算需要的疫苗劑量。免疫前應(yīng)停水或停料半天，夏季停水或停料時間可以縮短，以保證飲喂疫苗時，每頭畜、禽都能飲入一定量的水或吃入一定量的料。飲水免疫時，一定要增加飲水量，讓每頭畜、禽都能飲到足夠的水。稀釋疫苗時應(yīng)當(dāng)用清潔的水，禁用含漂白粉的自來水?；煊幸呙绲娘嬎惋暳弦话悴粦?yīng)超過室溫。已稀釋的疫苗，應(yīng)迅速飲喂。經(jīng)口滴入將動物保持相應(yīng)的體位，用金屬或硬塑料管接上注射器，也可用吸管、移液管等，將疫苗滴入動物口腔，注意應(yīng)送至咽部，讓其自行吞咽，為了不使滴入的疫苗流出口外，可在滴入口腔之后，可給予動物較喜歡吃的食物，使滴入的疫苗全部進(jìn)入胃內(nèi)。3氣霧免疫法此法是用氣泵產(chǎn)生的壓縮空氣通過氣霧發(fā)生器，將稀釋疫苗噴出去，使疫苗形成直徑1-10μm的霧化粒子，均勻地浮游在空氣中，畜、禽通過呼吸道吸入肺內(nèi)，以到達(dá)免疫。雞感染支原體病時禁用氣霧免疫，因為免疫后往往激發(fā)支原體病發(fā)生，雛雞首免時使用氣霧免疫應(yīng)慎重，以免發(fā)生呼吸道疾病而造成損失。三動物采血1大鼠和小鼠采血方法割尾采血需血量較少時采用此法采血。先將動物固定或麻醉，并露出鼠尾，將鼠尾浸在45℃左右溫水中數(shù)分鐘或?qū)⑹笪卜旁陔娙∨翱緮?shù)分鐘或用酒精或用酒精涂擦鼠尾，使鼠尾血管充盈，然后將鼠尾擦干，用銳器割去尾尖1-2mm或3-5mm，讓血液自由順管壁流入試管或用血紅蛋白吸管吸取，為采取較多的血，可由手自尾根部向尾尖按摩。采血結(jié)束時，傷口消毒，并壓迫止血，也可用火燒灼止血或6%火棉膠涂敷止血。也可在尾部做一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液及止血方法同上。此法采血每鼠一般可采血10余次以上，小鼠每次取血左右，大鼠可取血，如方法適宜，室溫較高，小鼠也可取血以上，大鼠可取血3ml以上。眼眶后靜脈叢取血左手抓住鼠兩耳之間的頭部皮膚，使頭部固定，并輕輕向下壓迫頸部兩側(cè)，引起頭部靜脈血液回流困難，使眼球充分外突，眶后靜脈叢充血。右手持長為7-10cm的玻璃制取血管或連接7號針頭的1ml注射器，使采血器與鼠面成45℃的夾角，將針頭刺入下眼瞼與眼球之間，輕輕向眼底部方向移動，在此處旋轉(zhuǎn)取血管以切開靜脈叢。把取血管保持水平位，稍加吸引，即可取出血液。當(dāng)?shù)玫剿枰难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。一般刺入深度小鼠約2-3mm，大鼠約4-5mm，刺入當(dāng)感到有阻力時即停止推進(jìn)，同時，將針退出約-0.5mm，可邊退邊抽取血液。小鼠、大鼠、豚鼠、家兔皆可自眼眶后靜脈叢取血，根據(jù)實驗需要，可在數(shù)分鐘后在同一穿刺孔重復(fù)取血，一般兩眼輪換取血，小鼠每次可采血，大鼠每次可采血。心臟采血鼠類心臟較小，且心率較快，心臟采血較困難，一般較少用，小鼠幾乎不用活體心臟取血。大鼠取血時將大鼠仰臥固定于固定板上，將心前區(qū)部位毛剪去，并用碘酒酒精消毒此處皮膚，在左側(cè)第3-4肋間，用左手食指觸摸心搏動處，右手取連接有4-5號針頭的注射器，選擇心搏最強處穿刺，當(dāng)針刺入心臟時，血液由心臟跳動的力量自動進(jìn)入注射器，也可由左手抓住大鼠，右手選擇心搏最強處后直接將針刺入心臟，心臟取血時最好一次刺中心臟，反復(fù)刺心臟，會引起動物死亡。也可開胸一次死亡采血，先將動物作深麻醉，翻開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液，小鼠約可取，大鼠可取。眼球取血先將動物用左手倒持固定，壓迫頸〔背〕部，使眼球突出并充血，以彎頭小止血鉗〔或鑷子〕迅速鉗取眼球〔或挖取眼球〕，眼眶內(nèi)很快流出或噴出血液，將血滴入盛血的器皿中，或滴入預(yù)先加有抗凝劑的器皿中，直到到達(dá)要求的取血量，一般可取動物體重的4-5%血液量。如取血時眼部血液凝固，可再挖取對側(cè)眼球，并做規(guī)律性松緊擠壓胸腔，以促使血液流出。此種取血方法為一次性取血，取血后動物多死亡。2豚鼠采血方法心臟采血使動物仰臥固定，用左手觸摸心臟搏動處，在心跳最明顯處剪毛消毒，然后用針頭插入胸壁稍向右下方刺入，一般在胸骨左緣第4-6肋間腔。如果注射針正確地刺入心臟，血液隨心臟跳動而進(jìn)入注射器內(nèi)，取血宜迅速，以縮短針留在心臟內(nèi)的時間，以防止血液在注射器內(nèi)凝固。也可豚鼠不固定，由助手握住前后肢進(jìn)行采血。豚鼠采血時，一般應(yīng)在麻醉下開胸直接從心臟取血。局部取血可采取5-7ml，采全血15-2021。如果一次未刺入心臟或稍偏時，可將針頭稍提起向另一方再刺。如果認(rèn)為針已進(jìn)入心臟，但抽不出血時，可把針慢慢稍退出一點即可。如抽血失敗時應(yīng)拔出針再操作。在胸腔內(nèi)針尖不能左右擺動，以防損傷心、肺引起死亡。耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器〔刀或刀片〕割破耳緣，在切口邊緣涂抹2021檬酸鈉溶液或1%肝素溶液，阻止血凝，那么血可自切口自動流出，進(jìn)入盛器。此法能采血左右。采血后用消毒紗布壓迫止血5-10秒鐘。3家兔采血家兔采血可采用心臟采血和耳緣靜脈采血。耳緣靜脈采血將動物固定后，露出兩耳，選擇靜脈清晰的耳朵去毛，常規(guī)消毒，壓迫耳根部，使靜脈怒張或用酒精涂擦。既可用針頭穿刺靜脈采血。針尖向耳尖反向抽吸其血。一次可采血1-2ml。心臟采血如需采取大量血液，那么用心臟采血法。動物左仰臥由助手保定，或以繩索將四肢固定，術(shù)者在動物左前肢腋下處局部剪毛消毒，在胸部心臟跳動最明顯處下針。用12號針頭，直刺心臟，感到針頭跳動或有血液向針管內(nèi)流動時，即可抽血，一次可采血15-2021。如采其全血，可自頸動脈放血。將動物保定，在其頸部剃毛消毒，動物稍加麻醉，用刀片在頸靜脈溝內(nèi)切一長口，露出頸動脈并結(jié)扎，于近心端插入一玻璃導(dǎo)管，使血液自行流至無菌容器內(nèi)，凝后析出血清；如利用全血，可直接流入含抗凝劑的瓶內(nèi)，或含有玻璃珠的三角燒瓶內(nèi)震蕩脫纖防凝。放血可達(dá)50ml以上。4禽類采血翼根靜脈采血雞、鴨、鵝、鴿的常用采血法就是從其翼根靜脈取血，取血時