實驗柱色譜分離植物色素

實驗2---柱色譜分離植物色素“

理論是系統(tǒng)化、體系化的認(rèn)識，凡是認(rèn)識都來源于實踐，實踐是認(rèn)識的來源，所以理論不可能脫離實踐。我們既要堅持實踐第一的觀點，在實踐中認(rèn)識和發(fā)現(xiàn)真理，在實踐中檢驗和發(fā)展真理，又要重視科學(xué)理論的指導(dǎo)作用，堅持理論與實踐相結(jié)合的原則。”01—色譜法▲色譜法起源

當(dāng)樣品隨著流動相經(jīng)過固定相時，因樣品中不同組分在兩相間的分配不同而實現(xiàn)分離，這樣一類分離分析方法被稱為色譜法。目前常用的固定相有硅膠、氧化鋁等。1903年，俄國植物生理學(xué)家和化學(xué)茨韋特（M.C.Цвет，1872~1919）發(fā)表了第一篇關(guān)于色譜法的論文。他在玻璃管的一端塞上一團棉花，在管中填充碳酸鈣粉末，再把溶有綠色植物色素的溶液自上而下注入玻璃管中。結(jié)果植物色素被碳酸鈣粉末吸附，形成不同顏色的色帶。他將吸附不同色素的碳酸鈣分層取出，再用乙醇作溶劑，從植物色素中提取出葉綠素、葉黃素和胡蘿卜素等較純的組分。茨韋特的柱色譜實驗當(dāng)時并未引起人們的注意。25年后，德國化學(xué)家?guī)於鳎≧.Kuhn，1900~1967）在分離、提純胡蘿卜素異構(gòu)體和確定維生素的結(jié)構(gòu)時應(yīng)用了色譜法，并在1938年獲得了諾貝爾化學(xué)獎。此后，色譜法成為化學(xué)家分離、提純有機化合物的重要方法之一。人們還開發(fā)了紙色譜、薄層色譜、氣相色譜和高效液相色譜等多種色譜方法。02—高中化學(xué)課本實驗：粉筆分離菠菜葉中的色素1.

實驗用品：無水乙醇或95%乙醇、白粉筆、新鮮菠菜若干；燒杯、量筒、漏斗、濾紙、研缽、玻璃棒、載玻片、天平、鐵架臺及附件、剪刀。2.

實驗原理：菠菜葉綠體中含有胡蘿卜素（橙黃色）、葉黃素（黃色）、葉綠素a（藍(lán)綠色）、葉綠素b（黃綠色）等色素，利用色素能溶于有機溶劑的特性，用乙醇來提取葉綠體中的色素，并用粉筆對菠菜中的色素進行柱層析分離。▲柱色譜實驗裝置3.

實驗步驟：稱取5g新鮮菠菜葉，去中脈剪碎，置于研缽中，加入10mL無水乙醇，研磨至糊狀，繼續(xù)研磨至溶液呈墨綠色時過濾，濾出雜質(zhì)，將濾液置于50mL燒杯中，取一支干燥、潔凈的白色粉筆，大頭朝下置于燒杯底部，約10min后觀察并記錄實驗現(xiàn)象。4.

實驗現(xiàn)象：粉筆顏色分段，上段呈黃色，中段呈綠色，下段呈墨綠色。5.

實驗結(jié)論：菠菜葉中的不同色素在粉筆上的溶解性或吸附能力不同，幾分鐘后，色素就會隨著乙醇在粉筆上的擴散而分離開。【課本出處】2019年人教版新教材2019年魯科版新教材選擇性必修3

第一章第二節(jié)研究有機物的一般方法（P14~15）無03—大學(xué)化學(xué)實踐性實驗：薄層色譜法分離胡蘿卜素▲看起來很高級的廚具和一塊被它魚肉的胡蘿卜

1.

實驗?zāi)康模海?）了解薄層色譜法的原理。（2）學(xué)習(xí)薄層色譜分離有機化合物的方法和比移值的計算方法。2.

實驗用品：（1）儀器：載玻片、層析缸（2）試劑：丙酮、石油醚（30~60℃、60~90℃）、硅膠g（或硅膠GF254）、新鮮胡蘿卜、無水Na2SO4、三份柱色譜洗脫液3.

實驗原理：胡蘿卜素存在于胡蘿卜根、南瓜、橘屬植物的果皮中，也廣泛分布在一般綠葉中。胡蘿卜素有α、β、γ三種異構(gòu)體共存，但β-胡蘿卜素含量最高。β-胡蘿卜素可被轉(zhuǎn)化為2分子的維生素A，故稱為維生素A源。

▲β-胡蘿卜素

4.

實驗步驟：（1）薄層板的制備：傾注法制備5塊薄層板（2.5cm×7.5cm），活化備用。（2）樣品的制備：稱取5g搗爛的胡蘿卜置于50mL三角瓶中，再用10mL丙酮萃取2次，最后用10mL石油醚（30~60℃）萃取2次。合并萃取液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，并將混合物與50mL飽和NaCl溶液振蕩，分出有機層，再用50mL蒸餾水洗滌2次，分水后用無水Na2SO4干燥（約1h）。濾出溶液，水浴蒸餾除去溶劑，得到固體。固體用少量石油醚（60~90℃）溶解，拌硅膠約1g，備用?！鴮嶒炑b置▲醚煮胡蘿卜▲干燥粗產(chǎn)物▲被煮干的胡蘿卜絲和干燥后滯留在瓶中的Na2SO4粉末▲蒸發(fā)溶劑，得到較純的胡蘿卜素（3）點樣：取3塊薄層板，分別在距一端1cm處用鉛筆輕輕畫一條橫線作為起始線，并在線上點兩個點作為點樣記號。取管口平整的毛細(xì)管插入樣品溶液中，在三塊板起始線左側(cè)分別點實驗10所得的三個色帶的溶液（毛細(xì)管不能混用），同時在右側(cè)點未分離的混合樣品。如果樣點的顏色較淺，可重復(fù)點樣，重復(fù)點樣前必須待前次樣點揮發(fā)干后進行。樣點的直徑最好不要超過2mm?！鴮⒈影宸旁趶V口瓶中展開

（4）展開：待樣點干燥后，小心地放入已加入1:9的丙酮-石油醚（60~90℃）溶液的廣口瓶中，展開劑的高度約0.5mm即可，不可超過起始線，也不可過少。蓋好瓶塞，觀察展開劑前沿上升到離薄層板上端約1cm處取出，盡快用鉛筆標(biāo)記展開劑前沿位置。晾干后，測量展開劑前沿和樣點距起始線的距離l0和l1，計算Rf值。鑒定混合樣中各組分與柱層析所得組分是否相同。分析柱色譜與薄層色譜之間的聯(lián)系。▲薄層板上的現(xiàn)象5.實驗數(shù)據(jù)：本人實驗所得，展開劑前沿距起始線的距