博士答辯幻燈(機制研究)-大學課件-在線文檔投稿賺錢網(wǎng)

*****機制研究研究生：**導

師：***

教授導師組：***

教授等研究背景N缺血性腦血管疾病是引起人類死亡和長期癱瘓的主要原因之一，目前其發(fā)病率逐年上升，給社會經(jīng)濟帶來了極大的負擔。N近年來，美國將銀杏葉用作保健食品，歐洲一些國家將其作為植物藥，廣泛用于防治心腦血管疾病、記憶力下降及癡呆。N我國的銀杏資源居世界首位，應加大力度開發(fā)，造福人民。實驗總體設計離體NOS、[Ca2+]iPGI2、TXA2iv.兔EGB整體EGB銀杏葉提取物對兔腦血流量的影響第一部分實驗方法健康新西蘭兔，雌性4只，雄性4只體重2.6±0.2kg靜脈注射3%戊巴比妥鈉溶液（30

mg/kg）麻 醉氣管插管術、單側股動脈和股靜脈插管分離一側頸內(nèi)、外動脈，結扎頸外動脈，在頸 內(nèi)動脈上套電磁流量機探頭待呼吸、血壓穩(wěn)定后，給0.1ml/kg生理鹽水， 測量兔腦血流量、收縮壓、舒張壓，作為對照靜脈注射EGB

2.5、5.0、10.0

mg/kg，在給藥 后1，3，5，10，15，20，30min記錄上述指標實驗結果*p<0.05，**p<0.01

vs

administration

before實驗結果實驗結果結論靜注EGB注射液能明顯增加兔腦血流量， 其劑量為10.0mg/kg時對兔腦血流量增

加作用大于劑量為2.5、5.0mg/kg時的作 用。在給藥1～5min內(nèi)收縮壓、舒張壓略微升 高，5～20min收縮壓、舒張壓略微下降， 以后逐漸恢復正常。變化無統(tǒng)計學意義。第二部分以小鼠大腦皮層血管內(nèi)皮細胞研究EGB舒張血管機制實驗方法L-Arg+O2

NO+親核性物質 有色化合物 530nm波長下測定吸光度。根據(jù)吸光度大小可計算出NOS活力。培養(yǎng)的細胞以1×106個細胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，后每3d半量換液。至d6分別加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1。37℃培養(yǎng)8h，將細胞消化，制成10％的細胞懸液，進行測定。NOS測定方法NOS6-酮-前列腺素F1a和血栓素B2含量測定方法培養(yǎng)的細胞以1×106個細胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，后每3d半量換

液。至d6分別加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1及陽性對照藥阿司匹林1g·L-1。37℃培養(yǎng)8h，取上清，用放射性熒光免疫法進行測定。細胞內(nèi)鈣離子含量測定方法1）培養(yǎng)的bEnd3細胞以1×109個細胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，并加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1。2）37℃培養(yǎng)24

h，用0.25％胰蛋白酶消化液消化細胞，用HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）重懸，調(diào)整細胞濃度為

2×109

個細胞·L-1，制成細胞懸液。用臺酚藍染色檢查細胞的存活率，要求存活率不低于95％者進入下一步實驗。將制備好的細胞懸液37℃預溫5min，加入Fura2-AM，使其終濃度為5umol·L-1,混勻，放入CO2培養(yǎng)箱中，37℃避光孵育45min，之后以1000r·min-1離心5min,棄上清。沉淀細胞用含0.2％牛血清白蛋白的HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）洗2次，最后用HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）調(diào)整細胞懸液為2×109個細胞·L-1。避光放置，用熒光分光光度計30min內(nèi)測完。實驗結果*P<0.01

vs

control

group;**P<0.05,

***P<0.01

vs

previous

groups實驗結果*P<0.01

vs

control

groups;**P<0.05,

***P<0.01

vs

previous

groups實驗結果實驗結果**P<0.01,

*P<0.05

vs

control

groups討論與血管舒張反應最為密切的物質是NO。EGB能顯著上調(diào)NOS的活性，說明其舒張血管作用部分與上調(diào)NOS的活性有關。討論本實驗研究所用細胞為小鼠大腦皮層血 管內(nèi)皮細胞，其一氧化氮合酶為內(nèi)皮型（eNOS），eNOS的激活需要Ca2+及CaM的參與。EGB能顯著升高[Ca2+]i，提示其上調(diào)

NOS活性可能與其升高[Ca2+]i相關。討論EGB對6-Keto-PGF1a和TXB2的水平均有 一定影響（分別導致它們輕微升高和下 降）。這些結果提示EGB擴血管作用機制還包 括其對PGI2和TXA2的作用，即增加PGI2 水平和降低TXA2水平。結論EGB可上調(diào)eNOS活