金黃色葡萄球菌檢驗PPT

金黃色葡萄球菌定性檢驗1.了解金黃色葡萄球菌生物學(xué)特性。

2.掌握金黃色葡萄球菌定性檢測程序和檢驗方法。

學(xué)習(xí)目的與要求一、生物學(xué)特性——菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽性球菌，直徑為0.5-1.0微米，鏡檢時呈單個、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如葡萄狀，故稱為葡萄球菌。大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡蘿卜素，使細胞團呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件，故稱金黃色葡萄球菌(高鹽甘露醇平板：金黃色葡萄球菌為淡黃色菌落；其他葡萄球菌為白色菌落)。

最適生長溫度37℃，最適pH為7.4；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在高鹽環(huán)境下生長，15%氯化鈉環(huán)境下還能生長；一般用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌或7.5%氯化鈉肉湯增菌。

所有的毒株產(chǎn)生血漿凝固酶，人和動物來源的菌株通常可凝固兔、人、馬和豬的血漿。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和溶菌酶等，大多數(shù)菌株可水解天然的動物蛋白并釋放脂肪酸。在BP平板產(chǎn)生磷脂環(huán)。生物學(xué)特性——致病性金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素：外毒素，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；在血平板培養(yǎng)出現(xiàn)溶血環(huán)。b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。d.耐熱核酸酶e.腸毒素：引起急性胃腸炎。葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)8-10小時即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。二、檢驗程序與操作方法食品安全國家標準GB4789.10-2016食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗第一法金黃色葡萄球菌定性檢驗

檢樣25g(ml)樣品+225ml7.5%氯化鈉肉湯，均質(zhì)Baird-parker平板，血平板BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告36±1℃36±1℃18h-24hBP平板24h-48h血平板18h-24h36±1℃18h-24h檢樣25g(ml)樣品+225ml7.5%氯化鈉肉湯，均質(zhì)Baird-parker平板，血平板BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告36±1℃36±1℃18h-24hBP平板24h-48h血平板18h-24h36±1℃18h-24h檢樣25g(ml)樣品+225ml7.5%氯化鈉肉湯，均質(zhì)Baird-parker平板，血平板BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告36±1℃36±1℃18h-24hBP平板24h-48h血平板18h-24h36±1℃18h-24h檢樣25g(ml)樣品+225ml7.5%氯化鈉肉湯，均質(zhì)Baird-parker平板，血平板BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告36±1℃36±1℃18h-24hBP平板24h-48h血平板18h-24h36±1℃18h-24h檢樣25g(ml)樣品+225ml7.5%氯化鈉肉湯，均質(zhì)檢驗程序——樣品處理

稱取25g（mL）樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min。檢驗程序——增菌

利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（最高可耐受15%的氯化鈉），用7.5%氯化鈉肉湯增菌。

36±1℃培養(yǎng)18h~24h。檢驗程序——分離培養(yǎng)（血平板和BP平板）血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。典型菌落：呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，菌落周圍有完全透明溶血環(huán)。大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血環(huán)陽性陰性BP（貝爾德-帕克）平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球菌外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢驗程序——分離培養(yǎng)

在BP平板上典型菌落為：圓形,表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰黑色至黑色,有光澤,常有淺色(非白色)的邊緣,周圍繞以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時具有黃油樣黏稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株,除沒有不透明圈和清晰帶外,其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落,其黑色常較典型菌落淺些,且外觀可能較粗糙,質(zhì)地較干燥。

B-P平板圓形、光滑、黑色有光澤,周圍繞以不透明圈,其外有清晰帶革蘭氏陽性，球形，葡萄狀，無芽孢，無莢膜檢驗程序——確證鑒定1.革蘭氏染色鏡檢檢驗程序——確證鑒定2.血漿凝固酶試驗

金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生血漿凝固酶，因此對其鑒別的主要試驗是測定其凝固酶。試管法挑取BP平板或血平板上至少5個可疑菌落（少于5個全選，分別接種于BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36±1℃培養(yǎng)18h-24h。取0.5mL無菌生理鹽水加入瓶裝凍干兔血漿中至完全溶解，加入培養(yǎng)后的BHI肉湯培養(yǎng)物0.2-0.3mL，振蕩搖勻，放36±1℃恒溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如凝固體積大于原體積一半時，判定為陽性。如結(jié)果可疑，從營養(yǎng)瓊脂小斜面挑去菌落到BHI肉湯，重復(fù)凝固酶試驗。不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動陰性陽性試管法結(jié)果報告在25g(mL)樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。即：檢出/25g(mL)或未檢出/25g(mL)小結(jié)了解金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性（耐鹽，能產(chǎn)毒素、凝固酶等）掌握檢驗流程知識點：增菌液，BP平板和血平板的典型菌落特征，凝固酶試驗。新舊標準主要差異增菌液統(tǒng)一改成了7.5%氯化鈉肉湯這個標準主要是因為2008版本參照美國FDA的方法增加了10%胰胨大豆肉湯以來，發(fā)現(xiàn)該增菌液使用效果不好，目標菌生長差。修改Baird-Parker平板的培養(yǎng)時間為24h～48h，原來是18h～24h或45h～48h。挑取Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落至少5個，2010版1個以上。后面內(nèi)容直接刪除就行資料可以編輯修改使用資料可以編輯修改使用主要經(jīng)營：網(wǎng)絡(luò)軟件設(shè)計、圖文設(shè)計制作、發(fā)布廣告等公司秉著以優(yōu)質(zhì)的服務(wù)對待每一位客戶，做到讓客戶滿意！致力于數(shù)據(jù)挖掘，合同簡歷、論文寫作、PPT設(shè)計、