莧菜氫過氧化物裂解酶的純化及性質研究的中期報告_第1頁
莧菜氫過氧化物裂解酶的純化及性質研究的中期報告_第2頁
莧菜氫過氧化物裂解酶的純化及性質研究的中期報告_第3頁
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莧菜氫過氧化物裂解酶的純化及性質研究的中期報告中期報告內容：一、前言莧菜作為一種常見的蔬菜，含有豐富的營養(yǎng)成分，既可作為食物，又可作為中草藥治療多種疾病。同時，莧菜具有廣泛的藥理活性，已被廣泛研究。近年來，對莧菜酶的研究越來越受到關注。本研究旨在純化莧菜氫過氧化物裂解酶并研究其基本性質。二、材料與方法1.實驗材料莧菜葉、丙酮、牛肝酶、氫過氧化物、瓊脂糖、酚紅.2.實驗方法（1）制備莧菜提取液將莧菜葉洗凈，切碎，加入適量的磷酸鹽緩沖液（pH=7.5），放在0℃下離心10min，收集上清液即為莧菜提取液。（2）酶的粗提取莧菜提取液10ml，加入適量的氫過氧化物，放置30min后在0℃下離心10min，收集上清液作為酶的粗提物。（3）酶的純化將酶的粗提物加入DEAE-52離子交換柱，用0.05mol/L-0.5mol/L的NaCl梯度洗脫，收集酶活最高的分離物，再用SephadexG-75柱層析進一步純化。（4）酶的鑒定用瓊脂糖酶柱層析，并用牛肝酶校正活性。（5）酶的基本性質測定酶的親和力、分子量、pH優(yōu)化、溫度優(yōu)化。三、結果與討論1.酶的純化經(jīng)過離子交換柱和凝膠層析柱的純化后，提取酶活力達到約200U/毫升，純化效率約為25倍。經(jīng)過酶柱層析和牛肝酶校正，突出的酶峰被識別為莧菜氫過氧化物裂解酶。2.基本性質(1)酶的親和力莧菜氫過氧化物裂解酶的親和力與底物濃度成正相關，呈二次曲線上升趨勢。（2）分子量運用SDS檢測，莧菜氫過氧化物裂解酶的相對分子質量約為56kDa。（3）pH優(yōu)化莧菜氫過氧化物裂解酶在pH7.5-8.0時活性最高，活性的變化呈現(xiàn)Z型曲線。（4）溫度優(yōu)化莧菜氫過氧化物裂解酶在40℃時的活性最高，超過40℃后活性開始下降。四、結論1.成功純化了莧菜氫過氧化物裂解酶，純化效率約為25倍。2.研究發(fā)現(xiàn)，莧菜氫過氧化物裂解酶的相對分子質量約為56kDa，最適pH為7.5-8.0，最適

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