天性非綜合性耳聾基因分析研究

先天性非綜合性耳聾基因分析研究研究背景中國(guó)，聽(tīng)力語(yǔ)言障礙位居殘疾人總數(shù)的首位，我國(guó)聽(tīng)力殘疾者約為2800萬(wàn)，占總殘疾人口的三分之一；根據(jù)《中國(guó)出生缺陷報(bào)告（2012）》，我國(guó)每年新發(fā)先天性聽(tīng)力障礙3.5萬(wàn)例（其中遺傳因素所致的耳聾約占60%）；加上遲發(fā)型耳聾及藥物性耳聾患者，每年新增的聽(tīng)力障礙兒童超過(guò)6萬(wàn)；~80%的聾兒由聽(tīng)力正常的父母所生。聽(tīng)力缺陷患者造成沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)重度“聽(tīng)力缺陷兒”通常發(fā)現(xiàn)晚，錯(cuò)失語(yǔ)言和智力的發(fā)展黃金期。無(wú)有效治療方法，只能通過(guò)植入人工耳蝸及進(jìn)行后續(xù)長(zhǎng)期的語(yǔ)言康復(fù)才能幫助患兒獲知一定程度的聽(tīng)力，并且費(fèi)用昂貴。重度“聽(tīng)力缺陷兒”撫養(yǎng)平均需70萬(wàn)元耳聾篩查的現(xiàn)狀1傳統(tǒng)聽(tīng)力篩查傳統(tǒng)的聽(tīng)力篩查存在一定的缺陷：

只能篩查出先天性耳聾，無(wú)法檢出藥物性耳聾及遲發(fā)性耳聾2耳聾基因篩查：婚育指導(dǎo)，產(chǎn)前檢查新生兒篩查基因性耳聾的遺傳特征基因性耳聾大多為單基因的；77-99%病例是常染色體隱性遺傳，典型的語(yǔ)前聾大約10–20%的病例是常染色體顯性遺傳其余病例與X-性連鎖和線粒體遺傳相關(guān)非綜合性耳聾相關(guān)基因※遺傳性耳聾分為綜合性和非綜合性耳聾，非綜合性耳聾大約70%。※2014年NSHI定位到已經(jīng)超過(guò)170個(gè)基因座，涉及90個(gè)基因。DFNA常染色體顯性遺傳DFNB常染色體隱性遺傳2015,高慧王沙燕。中國(guó)人種分布最多的耳聾基因GJB2基因1997年發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)導(dǎo)致常染色體隱性遺傳非綜合性耳聾的突。Nature.1997GJB2，1993年被克隆，定位于13q11-12，DNA全長(zhǎng)4804bp，編碼區(qū)為678bp。編碼Cx26，是耳蝸縫隙連接的重要蛋白。GJB2常見(jiàn)突變位點(diǎn)：235delC、299-300delAT、176_191del16、35delG、167delT臨床表現(xiàn)：先天性重度以上感音神經(jīng)性耳聾。治療：人工耳蝸移植效果較好。

Cx26，與相鄰細(xì)胞的縫隙連接蛋白組成一個(gè)完整的縫隙連接通道，這些通道在信息傳導(dǎo)和物質(zhì)交換中起重要作用，是完成電解質(zhì)、第二代信使和代謝產(chǎn)物的細(xì)胞間轉(zhuǎn)換的重要通道。GJB2基因突變與耳聾密切相關(guān)。致病機(jī)制：大部分GJB2基因編碼區(qū)的突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程中的移碼突變，產(chǎn)生無(wú)功能的蛋白質(zhì)，影響了縫隙連接蛋白的結(jié)構(gòu)，從而影響通道的正常開(kāi)閉，使鉀離子回流進(jìn)入內(nèi)淋巴液的循環(huán)受到影響，濃度發(fā)生改變，導(dǎo)致Corti氏器的鉀中毒，從而引起感音神經(jīng)性聾。.SLC26A4（PDS)SLC26A4基因又稱(chēng)PDS基因,編碼蛋白質(zhì)Pendrin（陰離子（氯/碘）轉(zhuǎn)運(yùn)跨膜蛋白），表達(dá)在甲狀腺、腎臟和耳蝸。突變能夠?qū)е虑巴?dǎo)管擴(kuò)大，是已明確的常染色體隱性遺傳疾病。ProcNatlAcadSciUSA1999.常見(jiàn)突變位點(diǎn)：281C→T，589G→A,IVS7-2A→G,1174A→T,1226G→A,1229C→T,IVS15+5G→A,1975G→C,2027T→A,2162C→T,2168A→G臨床表現(xiàn)：Pendred綜合征，表現(xiàn)為甲狀腺腫大和耳聾；大前庭導(dǎo)水管綜合征（LVAS），先天或后天重度以上感音神經(jīng)性耳聾。指導(dǎo)：確診患兒的日常行為及注意事項(xiàng)。（防治頭部撞擊、倒立。勿參加劇烈體育活動(dòng)；禁止致聾藥物使用；進(jìn)行頭部CT，及時(shí)藥物治療）致病機(jī)制：攜帶PDS基因2條等位基因突變的患者表現(xiàn)為前庭水管擴(kuò)大，攜帶PDS基因單條等位基因突變的患者30%會(huì)表現(xiàn)為前庭水管擴(kuò)大，凡是引起顱內(nèi)與內(nèi)耳的通道異常擴(kuò)大，顱腔與內(nèi)耳的通道異常擴(kuò)大，凡是引起顱內(nèi)壓變化的因素如輕度的頭部碰撞、感冒等就能引起EVAS患兒聽(tīng)力下降。SLC26A4（PDS)GJB3GJB3基因[編碼縫隙連接蛋白31(Cx31)GJB3基因是我國(guó)夏家輝院士在國(guó)內(nèi)兩個(gè)常染色體顯性遺傳非綜合征性耳聾大家系中定位并克隆的本土第一個(gè)耳聾相關(guān)基因，其錯(cuò)義突變538C>T被認(rèn)為與語(yǔ)后高頻聽(tīng)力下降有關(guān)，遵循常染色體顯性遺傳模式。GJB3基因突變?cè)谥袊?guó)人群中攜帶率低（小于3%）突變位點(diǎn)：538C>T、547G>A指導(dǎo)：聽(tīng)力補(bǔ)償；高頻助聽(tīng)器12SrRNA線粒體DNA（mtDNA）是唯一存在于人細(xì)胞質(zhì)中的DNA分子，是獨(dú)立于細(xì)胞核染色體外的基因組。mtDNA的突變可通過(guò)母親傳給后代，后代中女性可將突變的mtDNA繼續(xù)傳給下一代，而男性則不再下傳。突變位點(diǎn)：（1555A>G,1494C>T)致病機(jī)制：通過(guò)改變線粒體DNA的空間結(jié)構(gòu)使形成新的與氨基糖甙類(lèi)抗生素結(jié)合位點(diǎn)而導(dǎo)致對(duì)此類(lèi)藥物敏感而致聾。研究方案病例選擇入組標(biāo)準(zhǔn)：1）≤25歲2）無(wú)其他遺傳性疾病耳聾患者；3）非綜合性耳聾患者排除標(biāo)準(zhǔn)：1）外傷性耳聾2）存在其他基因相關(guān)疾病耳聾基因篩查方法---飛行時(shí)間質(zhì)譜儀飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)優(yōu)勢(shì)耳聾基因20位點(diǎn)檢測(cè)，更精準(zhǔn)！結(jié)合多重PCR、單堿基延伸、質(zhì)譜檢測(cè)等技術(shù)，綜合兩種技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，遠(yuǎn)優(yōu)于單獨(dú)使用PCR檢測(cè)多態(tài)性SNP，檢測(cè)靈敏度更高！單堿基延伸又稱(chēng)為“微測(cè)序”，使用特異性探針對(duì)DNA分子進(jìn)行識(shí)別，具有測(cè)序技術(shù)的高準(zhǔn)確性，特異性好、假陽(yáng)性低；不同于測(cè)序技術(shù)延伸數(shù)百個(gè)堿基，該技術(shù)僅延伸單個(gè)堿基，出錯(cuò)概率更低；操作簡(jiǎn)單、安全、自動(dòng)化程度高、防污染。研究結(jié)果在中國(guó)人，GJB2基因的致病突變熱點(diǎn)最常見(jiàn)的為235delC，其次為299-300delAT、176_191del16和35delG。GJB2中國(guó)非綜合性耳聾患者GJB2至少一個(gè)等位基因突變的比例及地理分布（JTranslMed2009）純合子0%~14.7%，雜合子頻率1.7%~16.1%。中國(guó)不同族群間的c.235delc等位基因頻率最低（0.8%）西藏最高的（31%）在馬鞍同類(lèi)研究的比較SLC26A4（PDS）IVS7-2A>G是中國(guó)人中突變頻率較高的類(lèi)型。同類(lèi)研究的比較GJB3其中一例聾兒A1555G表現(xiàn)為異質(zhì)突變Mitochondria12SrRNA四種基因的突變比例復(fù)合突變GJB2基因突變中發(fā)生復(fù)合突變的比例為20%。耳聾基因在不同地域的分布GJB2

山東臨沂和湖北宜昌耳聾人群235delAT的突變頻率表現(xiàn)出不同的趨勢(shì)，但P=0.0518,在目前的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)中這樣的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此這一結(jié)論的進(jìn)一步證明有待于更大樣本量的數(shù)據(jù)。SLC26A4（PDS）P=0.45GJB3Mitochondria12SrRNA11份來(lái)自聾兒及其親屬的樣本13位正常親屬，耳聾基因的分布1/13為GJB2299_300delAT雜合突變，1/13為235delC雜合突變家系遺傳3對(duì)孿生子其中兩對(duì)出現(xiàn)相同的突變位點(diǎn)1對(duì)孿生子未在目前檢測(cè)的4個(gè)基因20個(gè)個(gè)突變熱點(diǎn)中檢測(cè)到突變孿生子遺傳特征318例非綜合性聽(tīng)力喪失患者突變基因檢測(cè)的結(jié)果顯示，國(guó)人常見(jiàn)的基因突變頻率與目前的報(bào)道基本保持一致；山東臨沂和湖北宜昌地區(qū)GJB2基因的致病突變熱點(diǎn)最常見(jiàn)的為235delC，其次為29