化學(xué)止咳平喘藥色甘酸鈉的色譜保留時間研究

化學(xué)止咳平喘藥色甘酸鈉的色譜保留時間研究

1傳統(tǒng)“中藥制劑”難以識別咳嗽和中藥歷史悠久，療效肯定，具有豐富的藥物來源、低毒和低價的優(yōu)點。這一直深受患者喜愛。但近來發(fā)現(xiàn)市場上某些所謂“強效、速效”治療咳嗽、哮喘的“純中藥制劑”,往往被非法摻入治療咳喘的化學(xué)藥物成分色甘酸鈉、氨溴索、克倫特羅等,面對此類的違法行為,光憑肉眼很難識別,必須通過現(xiàn)代先進技術(shù)的檢測才能識別,現(xiàn)有單一的薄層色譜法、紫外分光光度法,已很難滿足檢測的要求,尤其是干擾成分多且量少的情況。雖然現(xiàn)有HPLC-MS法可以解決此類問題,但儀器太昂貴,基層單位很難擁有,故本文根據(jù)實際需要,建立了HPLC這種專屬性強、靈敏度高且基層適用的檢測技術(shù),有很大的實際應(yīng)用意義。2實驗部分2.1色甘酸鈉對照品Agilent1100型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);AgilentEclipseXDB-C18色譜柱(美國Agilent公司);752紫外可見分光光度計(日本島津公司)。色譜純甲醇(美國Fisher公司);色甘酸鈉對照品(武漢鑫華遠(yuǎn)科技術(shù)有限公司,純度≥97%,批號:100599-200502)。實驗用水為超純水。樣品:止咳中藥制劑S1(口服液)、S2(口服液)、S3(口服液)、S4(口服液)、S5(口服液)、S6(口服液)、S7(口服液)、S8(膠囊)、S9(膠囊)、S10(膠囊)、S11(膠囊)、S12(膠囊)、S13(片劑)、S14(片劑)、S15(片劑)、S16(丸劑)、S17(顆粒劑)、S18(顆粒劑)、S19(顆粒劑)、S20(顆粒劑),均為市售常用止咳中藥。2.2實驗方法2.2.1流動相、流速和檢測方法色譜柱:AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流動相:甲醇∶0.34%磷酸二氫鉀=15∶85;流速:1.0mL·min-1;進樣量:5μL;檢測器:UV檢測器;檢測波長:240nm。2.2.2紫外分光光度計上色甘酸鈉最大吸收波長取色甘酸鈉對照品加水制成40μg·mL-1的溶液。以水為空白,置于紫外可見分光光度計上,在200—400nm的波長范圍內(nèi)進行掃描(見圖1)。從光譜圖可知色甘酸鈉在219、238nm和327nm有最大吸收。為減少末端吸收的干擾,故選擇240nm波長處作為檢測波長。2.2.3溶解成分配的量表準(zhǔn)確稱取色甘酸鈉對照品18.49mg,置于小燒杯中溶解后轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,再準(zhǔn)確量取2mL置于10mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,即得。2.2.4膠囊、飲料、服用品若供試品為片劑、丸劑、顆粒劑,研細(xì),稱取一次最大服用劑量,置于具塞錐形瓶中,加水20mL超聲處理20min,過濾,并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中用水稀釋至刻度,搖勻,即得;若供試品為膠囊劑,取一次最大服用劑量內(nèi)容物,研細(xì),囊殼加水10mL,加熱使溶解,其溶液與膠囊內(nèi)容物混合,置于具塞錐形瓶中,加水20mL,超聲處理20min,過濾,并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中用水稀釋至刻度,搖勻,即得;若供試品為口服液,取供試品一次服用量,加甲醇20mL,振搖,離心(1000r/min)15min,取上清液至25mL容量瓶中,加水至刻度,混勻,即得。檢測結(jié)果見圖2。2.2.5準(zhǔn)分離主溶液的制備取處方中不含色甘酸鈉的止咳平喘類中成藥,按2.2.3項下的方法制備,即得。2.2.6色甘酸鈉方準(zhǔn)確稱取色甘酸鈉對照品,加入處方中不含色甘酸鈉的止咳平喘類中成藥中,混勻。按2.2.3項下的方法制備成每毫升中約含色甘酸鈉各120μg的溶液,即得。3結(jié)果與討論3.1色甘酸鈉測定見圖2。由圖2可知,對照品色甘酸鈉保留時間為32.5min,在陽性對照溶液中均能檢測到色甘酸鈉,而在陰性對照溶液中均不能檢測到色甘酸鈉。3.2色甘酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱取色甘酸鈉對照品適量,加水制成400μg·mL-1的溶液,準(zhǔn)確量取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,各進樣5μL,以色甘酸鈉對照品的濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)x,對照品的峰面積為縱坐標(biāo)y,繪制校準(zhǔn)曲線,得回歸方程和相關(guān)系數(shù)y=14.20758x-60.14365,r=0.9991實驗結(jié)果表明色甘酸鈉在40—200μg·mL-1之間線性關(guān)系良好。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限取2.2.3項中對照品溶液(40μg·mL-1)稀釋100倍,準(zhǔn)確吸取對照品溶液5μL,注入液相色譜儀,記錄主峰高約為噪音峰高的3倍時的色譜圖確認(rèn)檢出限。經(jīng)實驗,色甘酸鈉的檢出限為0.744μg·mL-1。3.4進樣的測定取2.2.3項下濃度為111.6μg·mL-1對照品溶液,按色譜條件下方法,以5μL的進樣量分別注入色譜儀5次,記錄色譜圖,按色甘酸鈉峰面積計算,RSD=0.4%(n=5)結(jié)果表明精密度良好。3.5加標(biāo)回收率實驗對照品溶液配制:取2.1項下樣品S7、S8、S2的一次最大服用量各3份,準(zhǔn)確稱取色甘酸鈉對照品適量分別加入到上述樣品中,照2.2.4項下方法制備成供試品溶液,按色譜條件下方法,進行加標(biāo)回收率實驗,計算其平均回收率為96.4%(見表1)。3.6重復(fù)實驗取2.2.4下供試品溶液各進樣5次,依法操作,RSD=1.1%(n=5),結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。3.7樣品的制備準(zhǔn)確稱取色甘酸鈉對照品18.49mg,照2.2.3項下方法制備成對照品溶液,取2.1項下樣品S1—S20,照2.2.4項下方法制備成供試品溶液,分別準(zhǔn)確吸取供試品溶液與對照品溶液各5μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。供試品色譜中,未呈現(xiàn)與對照品保留時間一致的色譜峰,檢測結(jié)果所選20種中藥止咳制劑未發(fā)現(xiàn)有非法添加色甘酸鈉化合物。4系統(tǒng)適應(yīng)性實驗制備供試品溶液使用水直接提取樣品作